肿瘤细胞之间的交流

一个肿瘤细胞的产生并不意味着肿瘤发生.多个肿瘤细胞之间的对话使肿瘤成为一个异常的组织或器官.细胞接触、挤出、纠缠、迁移和变异维持着肿瘤细胞间的有序组织和肿瘤的持续生长.阻断肿瘤细胞之间的对话可能成为新的肿瘤治疗策略.     

免疫细胞在移植物抗肿瘤效应中的作用

近年来异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)由于存在移植物抗肿瘤效应(GVT)而备受关注,尽管GVT的效应细胞和分子机制尚未明了,但一些临床和动物实验资料表明,不同亚群的T细胞、异源反应性自然杀伤(NK)细胞在GVT中发挥了重要作用。我们就免疫细胞在移植物抗肿瘤效应(GVT)中的作用作一综述。1956年,Barnes等在动物实验中发现,异基因骨髓干细胞移植(allo-BMT)具有抗白血病效应,将其称为移植物抗白血病作用(GVL)。20世纪80年代,人们在接受allo-BMT的淋巴瘤患者中也发现了类似作用,称之为移植物抗淋巴瘤作用。目前GVL作用已从过去主要…     

Ki-67蛋白在妊娠滋养细胞疾病中表达的意义

目的：探讨Ki-67蛋白与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法：采用免疫组织化学的方法,观察正常早期妊娠绒毛和妊娠滋养细胞疾病组织中Ki-67的表达。结果：正常绒毛和妊娠滋养细胞疾病相邻各亚组间滋养细胞的总Ki-67标记指数无统计学差异。但是排除了各组间滋养细胞构成比的影响,仅统计细胞滋养细胞的Ki-67标记指数,可发现从正常绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎到绒毛膜癌,随着疾病恶性程度的增加,细胞滋养细胞的Ki-67标记指数呈上升趋势,各组间差异有显著性（P〈0.05）。结论：细胞滋养细胞的Ki-67标记指数可以辅助预测滋养细胞疾病的发展及预后,是一个比总Ki-67标记指数更可靠的指标。     

原发性肝癌免疫治疗现状及展望

免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗手段,在肝癌的综合治疗方案中,免疫治疗在提高肿瘤治愈率,改善患者生活质量,延长生存期方面起重要作用,显示良好应用前景。文章对肝癌的免疫治疗现状及发展作一论述。     

DC活化淋巴细胞对自体乳腺癌细胞的杀伤作用

 目的探讨负载自体抗原DC诱导的CTLs对自体乳腺癌细胞的杀伤作用。方法以负载自体癌细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对自体癌细胞的杀伤作用。结果负载自体抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P<0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单核细胞组(P<0.01)及对照的MCF-7组和HT-29组(P<0.01)。结论肿瘤裂解物致敏DC可持续刺激特异性CTLs从而可在体外杀伤乳腺癌患者的自体肿瘤细胞,说明肿瘤抗原致敏的DC疫苗对于治疗残留的和(或)对化疗耐药乳腺癌可能是适合的,因而有可能成为标准的补救措施。     

骨髓微环境中成骨细胞与白血病细胞相互作用的实验研究

目的 研究骨髓微环境中成骨细胞对白血病细胞存活、凋亡以及白血病细胞对成骨细胞细胞因子表达的影响及机制.方法 将小鼠急性髓系白血病AML1-ETO9a-Rac1细胞与小鼠颅骨成骨细胞体外共培养,流式细胞技术检测白血病细胞的存活比例;Annexin Ⅴ/PI标记流式细胞术检测白血病细胞凋亡,Western blot法检测白血病细胞内的凋亡相关信号分子的活化水平;实时定量反转录PCR检测成骨细胞内细胞因子TPO、N-cadherin、OPN、Ang1的转录水平.结果 与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的GFP阳性率明显高于单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞.与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞凋亡率显著低于单独培养4d的AML1-ETO9a-Rac1细胞,且共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的PARP活化水平比单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞明显偏低.AML1-ETO9a-Rac1白血病小鼠的原代成骨细胞的N-cadherin转录水平显著升高,Ang1、OPN两类因子的转录水平则显著下降,TPO的转录水平较正常小鼠的升高.结论 成骨细胞能够支持白血病细胞的存活,抑制白血病细胞的凋亡.同时,白血病细胞也能反作用于成骨细胞,使其产生的微环境相关因子表达发生改变.     

CIK、DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用比较

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P<0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

MGBA负载脐带血DC诱导特异性CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的：观察乳腺珠蛋白（mammaglobin A, MGBA）负载脐带血来源树突状细胞（dendritic cell, DC）诱导产生的细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）对乳腺癌细胞的体外杀伤效果。方法：采集健康剖宫产女性志愿者的脐带血,分离脐带血单个核细胞并诱导DC生成,用MGBA致敏DC与自体淋巴细胞共培养诱导CTL。采用流式细胞术测定DC的表型(CD83、CD86、HLADR)变化,ELISA法测定IL-10、IL-12分泌水平,CCK-8法测定CTL对乳腺癌细胞的杀伤活性。结果：成功培养出形态典型、功能成熟的DC,MGBA负载DC诱导的MGBA特异性CTL对乳腺癌细胞MDA-MB-415 产生显著的杀伤效果（P<0.05）;加入HLA-I 抗体可显著减弱杀伤效果,加入HLA-II 抗体细胞毒活性无显著变化,加入HLA-I 抗体或HLA-II 抗体对正常乳腺细胞的杀伤性均无影响。结论：MGBA 能明显加强脐带血DC 诱导的CTL 对乳腺癌细胞的杀伤活性,该杀伤活性具有MHC限制性。     

小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞对特异性CTL的体内外诱 …

目的 探讨白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）诱导小鼠红白血病细胞产生的树突状细胞,对白血病特异性ＣＴＬ细胞的诱导作用,及体内免疫后对抗肿瘤免疫应答的诱导效果。方法：采用４小时＾５１Ｃｒ释放法,检测ＣＴＬ杀伤活性;观察小鼠红白细胞病细胞来源的树突状细胞体内免疫治疗后对肿瘤的抑制作用,采用了ＨＥ染色和电镜等技术,分析肿瘤组织的病理学变化。结果：ＩＬ－１２诱导ＦＢＬ－３细胞产生的ＤＣ,在体外可诱导出ＦＢＬ－     

凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗治疗肺癌的实验研究

目的：用凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞（dendritic cells，DCs）激发肿瘤抗原特异性的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）活性，观察其体内外抗肺癌的特性。方法：常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs，采用或不采用凋亡肿瘤细胞负载DCs，并利用激发型CD40单克隆抗体（CD40mAb）诱导DCs成熟；成熟DCs与自体T细胞共育，分别获得Ag-CTL及non-Ag-CTL，流式细胞仪检测Ag-CTL细胞表型的变化；^3H-TdR掺入法测定DNA片段形成率；建立人肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型，过继回输Ag-CTL和non-Ag-CTL，评价其在体内的抗肿瘤活性。结果：CD40mAb激发可使DCs上调CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR的表达；凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb激发可进一步促进DCs的成熟；成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8^＋T细胞明显上调；Ag—CTL对A549具有高效特异的杀伤力，明显强干Ag-CTL对肝癌细胞株HepG2的作用（P〈0．01），且Ag-CTL对A549的杀伤力明显强于non—Ag-CTL（P〈0．01），而non-Ag-CTL对A549及HepG2细胞的杀伤力无显著性差异；体内实验表明，Ag-CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，与生理盐水组（NS组）、non-Ag-CTL组相比在统计学意义上有显著差异（P〈0．05），non-Ag-CTL组与NS组相比在统计学意义上有差异（P〈0．05）。结论：凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗激发的Ag—CTL在体内外均呈现抑制肺癌细胞的特性。     

Th17 细胞及Treg细胞在非小细胞肺癌的免疫调节作用

CD4+T淋巴细胞是一类重要的免疫细胞,在不同细胞因子的诱导下,可分化为Th1 细胞、Th2 细胞、Th17 细胞和Treg 细胞等。Th17 细胞及Treg 细胞不仅具有多种生物免疫学效应,而且能够分泌不同的细胞因子,各种免疫细胞与细胞因子之间形成复杂网络,介导免疫反应,进行免疫调节,参与免疫相关性疾病的发生发展,如肿瘤、炎症、自身免疫性疾病等。近年来肺癌的发病率呈进行性升高,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）占肺癌的比例最高。因此,本文将对Th17 细胞和Treg 细胞的分化及特点及在NSCLC中的免疫调节作用作一综述。     

DC和NK细胞诱导的抗肿瘤CTL反应

细胞毒性T淋巴细胞（CTL）介导的细胞毒效应能够高效、特异性杀伤肿瘤细胞而不损伤周围组织。树突细胞（DC）是已知体内抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞，能摄取各种抗原，体内外能激发T细胞增殖，诱导特异性CTL生成。自然杀伤（NK）细胞在由DC引起的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。近年来NK-DC细胞的相互作用在CTL反应中的作用引起关注。现综述DC、NK细胞在诱导抗肿瘤CTL反应中作用的研究进展。     

miRNA141表达的调控对人前列腺癌DU145细胞恶性生物行为的影响

目的：研究microRNA-141（miR-141）表达的调控对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法：利用脂质体Lipofectamine2000将miR-141 mimics（miR-141 up组）和miR-141 inhibi‐tiors（miR-141 down 组）分别转染至人前列腺癌DU145细胞中，同时设置未转染组（Control组）和miRNA无义序列转染组（NC组）。qPCR检测转染前后各组DU145细胞中miR-141表达变化，MTT方法检测各组DU145细胞的增殖活力和对顺铂（DDP）作用敏感性变化，流式细胞术检测各组DU145细胞周期和顺铂作用下凋亡率变化，Transwell方法检测各组细胞侵袭和迁移能力的变化，Western blotting检测各组细胞中VEGF、EGFR蛋白表达量变化。结果：与Control组和NC组相比，miR-141 down组DU145细胞中miRNA-141表达水平下降为（0.18±0.08），其细胞增殖活力显著下降而对DDP敏感性显著上升、细胞周期被阻滞于G0+G1期而细胞凋亡率显著上升至（46.67±5.86）%、细胞侵袭率和迁移率分别显著下降至（44.34±8.32）%和（57.73±6.19）%、VEGF和EGFR相对表达量分别下降至（0.47±0.06）和（0.36±0.06）（上述各指标分别P<0.05或P<0.01）。miR-141 up组DU145细胞中miR‐NA-141表达水平上升为（4.23±0.53），其细胞增殖活力显著上升而对DDP敏感性显著下降、细胞周期提前进入S和G2期而细胞凋亡率显著下降至（18.77±4.24）%、细胞侵袭率和迁移率分别显著上升至（89.94±6.34）%和（94.44±5.84）%、VEGF和EGFR相对表达量分别上升至（0.89±0.07）和（0.73±0.06）（上述各指标分别P<0.05或P<0.01）。结论：miR-141在前列腺癌DU145细胞中发挥促癌因子作用，其下调表达能够显著抑制DU145细胞增殖活力、周期、侵袭与迁移，而促进对DDP的敏感性和细胞凋亡，其机制可能与其抑制VEGF和EGFR蛋白表达有关。     

三氧化二砷在诱导非小细胞肺癌NCI-H157细胞凋亡过程中对Survivin基因表达Caspase-3的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）在诱导非小细胞肺癌NCI-H157凋亡过程中时Survivin基因表达及Cas-pase-3的影响．探讨As2O3，诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理研究，方法：首先对NCI-H157细胞培养和增殖测定，然后采用RT-PCR法检测Surviv inⅡ1RNA表达；WestemBlot检测Survivin及Caspase-3蛋白，结果：RT-PCR结果显示，10txmol／LAs203作用于NCI-H157细胞12h，24h．48h同对照组相比，Survivin mNA表达分别降至85．7％，59．4％，22．5％，处理72h后几乎检测不到Survivin mNA的表达。，WesternBlot解析结果显示．Survivin蛋白表达在5txmol／LAs203处理后分别下调至75．2％（12h），54．3％（24h），37．5％（48h）及20．3％（72h）。分别用不同浓度的As2O3，5220moL／L作用NCI-H157细胞24h．Survivin蛋白表达随着A蜘0、浓度的增加逐渐下降．As2O3，作用12h之内只能检测到非激活状态32KD的proCaspase-3，处理24h后出现17KD的活性亚基，直至72h。结论：As2O33以时间、剂量依赖的方式抑制NCI-H157细胞增殖，诱导细胞凋亡过程中下调Survivin mNA及蛋白表达，并活化Caspases-3．提示As2O3、诱导的NCI-H157细胞凋亡机制可能与下调Survivin基因表达及激活Caspase-活性有关、     

体外细胞转化试验研究进展

正常人体细胞从增生、异型增生、原位癌发展到浸润转移癌,要经过细胞永生化、分化异常和恶性转移等过程.而在体外细胞水平则需经历永生化和恶性转化这两个过程.近年来随着端粒酶研究的不断深入,人们对细胞的永生化以及细胞转化有了更清晰的认识,细胞转化试验在致癌机制以及肿瘤研究等领域中得到广泛应用.人体细胞与啮齿类动物细胞在永生化和细胞转化两个阶段均存在着一定差异,本文从端粒及端粒酶的调控、永生化和恶性转化条件等方面对上述两种细胞进行比较,并探讨细胞转化模型在毒理学中的应用价值.     

大细胞肺癌中VEGF的表达与DCs Treg分布的相关性研究

  目的  探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在大细胞肺癌（large cell lung cancer, LCLC）肿瘤组织中的表达及树突状细胞（dendritic cells, DCs）、调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）在肿瘤组织和癌旁正常组织中的分布情况, 探讨VEGF的表达情况、DCs与Treg的分布情况之间的相关性, 及DCs、Treg分布与患者临床特征间的关系。  方法  收集天津医科大学附属肿瘤医院自2000年5月至2010年10月手术切除的原发性LCLC标本75例, 其中27例癌旁正常组织作为对照。采用免疫组织化学法检测LCLC标本中VEGF的表达、未成熟DC细胞（CD1a+DC）、成熟DC细胞（CD83+DC）及Treg细胞（Foxp3+T细胞）的分布, 并分析它们之间的相关性及与患者临床特征的关系。  结果  75例癌组织中VEGF的阳性率为94.7%（71/75）; CD1a+ DC、CD83+DC在癌组织中的分布均显著低于癌旁正常组织（P=0.005、P < 0.001）; Foxp3+T在癌组织中的分布显著高于癌旁正常组织（P < 0.001）。CD83+DC的分布在VEGF阳性组明显低于VEGF阴性组（χ2=7.802, P=0.020）; CD1a+DC与Foxp3+T的分布呈正相关（r_s=0.246, P=0.033）。CD83+DC的分布在不同T分期间存在差异, 随着T分期增高其数量降低（χ2=11.043, P=0.011）。  结论  LCLC组织中VEGF高表达与成熟DC数量的减少相关, 而未成熟DC的分布与Treg细胞的分布呈正相关。      

食管鳞癌患者手术前后外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的：分析食管鳞癌患者手术前后外周血中T淋巴细胞亚群与NK、NKT细胞变化规律及其临床意义.方法：应用流式细胞术检测78例食管鳞癌患者外周血中T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞的水平.结果：肿瘤切除术前NKT细胞水平在中低分化组较高分化组显著下降（P〈0.05）;术后外周血中CD8＋T细胞含量明显降低（P〈0.01）,CIM＋/CD8＋比值显著升高（P〈0.01）,同时NK与NKT细胞水平较术前显著下降（P〈0.01）.结论：手术可一定程度改善患者机体免疫功能,检查手术前后外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞水平有助于患者的细胞免疫功能监测,为食管鳞癌临床治疗提供依据.     

阿糖胞苷和泰素在不同靶细胞生长状态下具有不同细胞周期特异性

Objective： To investigate the cell-cycle specificities of cytarabine and paclitaxel in different growing status of target cell. Methods： Using flow cytometry, we tested the cell-cycle specificities of cytarabine and paclitaxel on acute lymphocyte leukemia cell line Molt-4 in different growing status and on clinical acute lymphocyte leukemia specimens in vitro as well as in leukemia patients in vivo. Results： Cytarabine induced S phase specific cebcyde blockage and apoptosis in exponentially growing Molt-4, but showed G0/G1 phase specificity in high-density cultured Molt-4 and in clinical specimens. Paclitaxel induced G2/M phase specific cell-cycle blockage and apoptosis in exponential Molt-4, but showed G0/G1 phase specificity in high-density cultured Molt-4 and S phase specificity in clinical specimens. In the first day of clinical chemotherapy, cytarabine induced G0/G1 with a little S phase apoptosis in leukemia cells of acute lymphocyte leukemia patient in vivo. Cytarabine plus paclitaxel together had almost the same effect in the second day. Conclusion： The cell-cycle effects of cytarabine and paditaxel were different in different target cell growing status. It should be noted that the in vivo effect of these agents may be different from people usually anticipated during clinical chemotherapy. So the combined chemotherapeutic regimens may need to be redesigned.     

食管鳞癌患者手术前后外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的:分析食管鳞癌患者手术前后外周血中T淋巴细胞亚群与NK、NKT细胞变化规律及其临床意义.方法:应用流式细胞术检测78例食管鳞癌患者外周血中T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞的水平.结果:肿瘤切除术前NKT细胞水平在中低分化组较高分化组显著下降(P<0.05);术后外周血中CD8+T细胞含量明显降低(P<0.01),CIM+/CD8+比值显著升高(P<0.01),同时NK与NKT细胞水平较术前显著下降(P<0.01).结论:手术可一定程度改善患者机体免疫功能,检查手术前后外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞水平有助于患者的细胞免疫功能监测,为食管鳞癌临床治疗提供依据.     

二十二碳六烯酸复合物的体内外抑瘤作用及其机制

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)复合物的抗癌作用及其作用机制.方法 建立H22小鼠肝癌细胞的移植瘤动物模型,观察DHA复合物的体内抑瘤作用,采用体外细胞培养的方法 ,观察DHA复合物对宫颈癌HeLa细胞和胶质瘤U251细胞的体外抑瘤作用.采用电镜和荧光显微镜观察细胞形态的变化.Western blot法测定移植瘤组织中caspase-3蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HeLa细胞和U251细胞中Bel-2和Bax mRNA的表达.结果 DHA复合物对小鼠H22细胞移植瘤有明显的抑瘤作用,其低、中、高剂量组的抑瘤率分别为37.62%、48.55%和58.63%.在体外,随着剂量的增加,DHA复合物对HeLa细胞和U251的生长抑制率逐渐增高,Hela细胞的IC50为0.9814 μg/ml,U251细胞的IC50为0.3746 μg/ml.DHA复合物处理后,移植瘤细胞的细胞核呈分叶状,可见大小不等、致密的凋亡小体;HeLa细胞的细胞核内可见致密浓染的黄绿色荧光和碎片,分布在核周边,呈肾形或者半月形,核固缩,趋于碎裂.与CMC组比较,DHA复合物能明显促进caspase-3蛋白的表达,且DHA复合物剂最越高,caspase-3蛋白的表达升高越明显.DHA复合物能下调U251细胞中Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达,与CMC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 DHA复合物在体内外对多种肿瘤细胞有抑制作用,其抑瘤作用可能是通过抑制Bcl-2的表达、促进Bax和caspase-3的表达实现的.