RNA干扰畸胎瘤源性生长因子基因对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰畸胎瘤源性生长因子（PCDGF）基因对食管鳞癌细胞Eca-109的影响.方法 脂质体介导PCDGF-shRNA的表达载体转染Eca-109细胞,应用RT-PCR、Westernblot检测转染后细胞PCDGF mRNA及蛋白的表达情况,分别采用Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒和Boyden小室法检测转染后Eca-109细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 转染组PCDGF mRNA和蛋白表达水平均较其他组下调.转染24、48和72 h转染组细胞增殖均受到抑制,抑制率分别为20.4％、21.1％和20.9％,其细胞增殖活性较未转染组、阴性质粒组和脂质体组均明显降低（均 P＜0.05）.未转染组、阴性质粒组、脂质体组和转染组的细胞迁移数分别为118.8±12.0、100.8±9.0、114.3±4.7和 53.5±16.3,转染组与其余3组比较,差异均有统计学意义（P=0.001,P=0.002,P=0.002）.结论 RNA干扰PCDGF基因可抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及侵袭能力,PCDGF基因可能成为基因治疗的新靶点.     

脐血CD34+细胞向巨核系定向扩增的初步探讨

目的探讨不同细胞因子组合定向诱导CD34 细胞向巨核系分化的能力。方法利用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞,在无血清培养体系中以1×105/ml每孔接种,经不同细胞因子组合诱导培养。结果收集5份脐血标本,平均体积为95ml,CD34 细胞的比例为2.18%±0.89%,经过MACS分选后,CD34 细胞纯度平均可达81.55%。在细胞生长因子的刺激培养下,MK3组有核细胞数,CD34 细胞数,CD41a 细胞数在培养第16天分别达277.4倍、6.89倍、66.79倍,高于其它各组。结论脐血CD34 细胞体外在相关细胞生长因子的刺激下可向巨核细胞系定向分化。     

KIR不相合的NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用

放化疗导致的淋巴细胞减少，改变了免疫细胞亚群的格局，启动了免疫细胞的内源性增殖，重建了一个新的免疫微环境。其机制主要与抑制肿瘤免疫的调节性T细胞比例与功能显著下调；内源性细胞因子IL-7、IL-15等供应增多，淋巴细胞高效扩增；抗原提呈细胞功能增强和以非对称性为特点的淋巴细胞自稳性增生的改变等相关。经历了淋巴细胞减少状态下肿瘤免疫格局的改变后，机体消除了抑制肿瘤免疫的重要因素，打破了肿瘤免疫耐受。肿瘤放化疗后选择合适时间点与生物治疗联合治疗，可以诱导出优于单一生物治疗的抗肿瘤效应，部分修正了以往认为放化疗导致的淋巴细胞减少不利于抗肿瘤免疫生物治疗的观念，为临床攻克肿瘤开辟新的治疗途径。     

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中表达的研究

目的探讨趋化受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的关系,以及脂多糖(LPS)对其表达的影响.方法采用流式细胞仪和RT-PCR法检测23例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及MDA-MB-231细胞中CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达情况,以及LPS对MDA-MB-231细胞 CXCR4表达的影响;用Transwell板检测经LPS作用前后MDA-MB-231对趋化因子SDF-1趋化活性的影响.结果乳腺癌组织MDA-MB-231细胞的趋化因子受体CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05),并且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;脂多糖(LPS)能下调CXCR4的表达,经LPS作用后乳腺癌细胞趋化活性降低.结论趋化因子受体在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平,可减少或抑制其转移.     

MICA蛋白在肿瘤生物治疗中的作用

近年,NK细胞的活化性受体NKG2D已成为研究热点,作为NKG2D配体的MICA(人类MHC-Ⅰ类分子链相关基因A)蛋白越来越受关注.机体内MICA以膜型和分泌型两种形式存在.膜型MICA与NKG2D相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用;与此相反,分泌型MICA不仅下调NKG2D受体的表达,而且下调其细胞毒活性,对免疫细胞抗肿瘤起阻碍作用,可能是肿瘤免疫逃逸的一种新的机制.因此,可以利用这些特点发挥MICA蛋白在肿瘤生物治疗中的应用价值.     

NKG2D配体在中晚期食管癌患者术后NK细胞免疫治疗中的作用

  目的  探讨NKG2D配体MHC-I类相关分子A（MHC class I-related molecules A,MICA）在中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗中的作用。   方法  福建省肿瘤医院90例中晚期食管癌患者手术后,分为单纯化疗组40例、化疗联合NK细胞治疗MCIA阴性组（简称MICA-组）25例及化疗联合NK细胞治疗MICA阳性组（简称MICA+组）25例,比较其疗效。   结果  与单纯化疗组及MICA-组相比,MICA+组CD3+、CD4+T细胞阳性率、NK细胞阳性率及CD4+/CD8+比率明显高于治疗前[（64.2±6.4）% vs（51.3±5.6）%,（39.8±8.2）% vs（29.5±3.2）%,（25.3±2.1）% vs（16.4±4.3）%,（1.4±0.5）vs（1.1±0.7）;均P < 0.05],T-reg细胞明显低于治疗前[（6.3±4.5）% vs（17.3±2.4）%,P < 0.05]。3组疾病控制率及有效率无明显差异（P>0.05）。MICA+组KPS评分治疗后明显提高,MICA+组能明显改善化疗引起的白细胞减少、外周神经毒性症状,MICA+组疾病进展时间（time to progression,TTP）及总体生存时间（overall survival,OS）均明显延长（均P < 0.05）。但单纯化疗组及MICA-组之间差异无统计学意义（P>0.05）。   结论  食管癌组织MICA表达阳性的中晚期患者进行化疗联合自体NK细胞能有效能有效提高免疫力,改善患者生活质量,并能延长生存期,且回输安全、不良反应小。      

IL-12诱导肝癌微环境中NK细胞活化发挥抗肿瘤作用

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组和PBS对照组,瘤内注射IL-12后,观测荷瘤小鼠瘤体积、体重、一般状况的变化,IL-12瘤内注射后第30天ELISA法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中IL-12、INF-γ含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-otransferase,AST)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量,免疫组化法检测IL-12治疗后肝癌微环境中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46,以及抑制性受体KIR2DL3/CD158b、NKG2A/CD159a的表达。结果:第12、18、24、30天IL-12组荷瘤小鼠瘤体积均小于PBS组[(594.47±205.51)vs(832.10±187.49)mm3,(963.61±427.95)vs(1 350.87±468.23)mm3,(1 285.02±368.56)vs(1 975.49±655.54)mm3,(1 903.64±471.34)vs(2 568.77±784.68)mm3,均P<0.05]。IL-12组小鼠肝癌组织中IL-12与INF-γ的表达水平均明显高于PBS组[(2.96±1.02)vs(1.35±0.75)pg/ml,(12.26±4.11)vs(7.81±3.46)pg/ml,均P<0.05]。IL-12组与PBS组相比,血清ALT水平第7天显著升高[(73.85±10.71)vs(41.73±13.13)U/L;P<0.05],第14天达到高峰。IL-12组治疗后肝癌组织中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30的表达较PBS组高(P<0.05),NKp46的表达未见明显升高;而NK细胞抑制性受体CD158b和CD159a表达较PBS组低(P<0.05)。结论:肝癌模型小鼠瘤体内IL-12注射可上调瘤组织内NK细胞活化性受体、IL-12、IFN-γ的表达,下调抑制性受体的表达,从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长。     

外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞检测在肺癌诊断及治疗中的意义

 目的　通过研究肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞的表达及动态变化,分析其与肺癌发生、发展的关系及其临床意义。方法　运用流式细胞术检测66例肺癌患者（肺癌组）、60例肺结核患者（肺结核组）和60名健康人（健康对照组）外周血中CD+3、CD+3 CD+8、CD+3 CD+4、Th／Ts、CD+16 CD+56的表达;肺癌组还检测了化疗前后第3、7和20天外周血CD+3、CD+3 CD+8、CD+3 CD+4、Th／Ts、CD+16 CD+56 的表达。结果　肺癌组CD+3、CD+3 CD+4、Th／Ts、CD+16 CD+56表达明显降低[（54.23±10.37）%、（34.23±8.03）%、1.35±0.20、（25.18±4.34）%],与肺结核组[（63.09±9.19）%、（39.46±12.74）%、1.51±0.41、（26.45±3.96）%]和健康对照组[（69.68±8.31）%、（42.31±13.29）%、1.89±0.48、（29.44±2.51）%]比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;CD+3 CD+8 表达三组间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。在化疗组中,化疗缓解组化疗后第3天CD+3、CD+3 CD+4、Th／Ts和CD+16 CD+56 表达较化疗前均显著降低（均P＜0.01）,而CD+3 CD+8表达显著升高（P＜0.01）;第7天各项指标基本恢复到化疗前水平;第20天CD+3、CD+3 CD+4、Th／Ts和CD+16 CD+56 表达较化疗前均显著升高（均P＜0.05）,而CD+3 CD+8表达显著降低（P＜0.05）。化疗未缓解组化疗前后各项指标的表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）。在肺癌组中,ⅢA期、ⅢB期与ⅠA期比较、淋巴结转移N3组与N0组比较,CD+3、CD+3 CD+4、CD+3 CD+8、Th／Ts和CD+16 CD+56 表达差异均有统计学意义（均P＜0.05）;不同病理分型间各项指标表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论　动态监测肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞可指导临床诊断和治疗,并有助于评估患者免疫功能状态。     

Survivin HLA—A2^＋高亲和性CTL表位的预测及鉴定

目的:采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA-A2+限制性CTL表位,为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础.方法:采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivin HLA-A2+限制性 CTL表位进行预测;选取得分>10的表位肽为候选对象,并进行人工合成.采用T2细胞,以HLA-A2结合实验和流式细胞术(FITC染色)检测候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光系数(fluorescence index,FI)表示];以HLA-A2解离实验和流式细胞术检测其结合稳定性[以复合物解离50%的时间DC50(dissociation complex 50%)表示].结果:预测到的候选survivin CTL表位肽分别是:20STFKNWPFL28 (SV20-28)、23KNWPFLEGC31 (SV23-31)、96LTLGEFLKL104 (SV96-104)、6LPPAWQPFL14 (SV6-14)、33CTPERMAEA41 (SV33-41)、46CPTENEPDL54 (SV46-54)、130KVRRAIEQL138 (SV130-138)、37RMAEAGFIH45 (SV37-45)、88SVKKQFEEL96 (SV88-96).亲和力分析显示:SV20-28 、SV96-104、SV130-138、SV23-31的FI分别为8.61、6.88、5.89、3.81;SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96的FI分别为0.31、-0.29、-0.4、-0.16和-0.03;稳定性分析结果DC50为:SV20-28、SV96-104、SV130-138 ＞8 h;SV23-31 为4～6 h;SV6-14、SV33-41、SV88-96为2～4 h;SV46-54、 SV37-45为0～2 h.结果提示,SV20-28 、 SV96-104、SV130-138为高亲和力表位肽,SV23-31为中等亲和力表位肽,SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96为低亲和力表位肽.结论:超基序法、量化基序法可快速有效地预测抗原表位,SV20-28 、SV96-104、SV130-138有可能是survivin HLA-A2+ CTL表位,可用于后续研究.