白细胞介素2基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性黑素瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对恶性黑素瘤的杀伤能力.方法 提取小鼠脾细胞,分离淋巴细胞,培养CIK细胞,用携带IL-2的质粒PEGF-N1-IL-2转染CIK细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定IL-2基因的表达.将效应细胞(CIK细胞或IL-2转染CIK细胞)和靶细胞(B16黑素瘤细胞)分别按照效靶比10∶1、20∶1和40∶1混合培养,采用4h乳酸脱氢酶释放测定法,检测两种CIK细胞对B16细胞的细胞毒活性.按照效靶比40∶1混合,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测两种CIK细胞IL-2、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.建立小鼠黑素瘤模型,将28只模型小鼠平均分为4组:对照组(瘤旁注射0.2 ml生理氯化钠溶液)、IL-2组(瘤旁注射100 IU IL-2)、CIK组(瘤旁注射细胞数约1×106 CIK细胞悬液)、IL-2转染CIK组(瘤旁注射细胞数约1×106 IL-2转染CIK细胞悬液),通过肿瘤形态学和抑瘤率、细胞凋亡率来评价荷瘤小鼠肿瘤生长情况.两组正态分布计量资料的比较行t检验,多组计量资料的比较采用方差分析,两两间多重比较采用LSD-t检验.结果 荧光显微镜及RT-PCR均显示IL-2转染CIK细胞成功.效靶比实验显示,40∶1时IL-2转染CIK细胞对B16细胞的毒性最强,IL-2转染CIK细胞组分泌IL-2 (1107.26±6.49 pg/ml)、IFN-γ(50.01±3.35 pg/ml)和TNF-α(39.86±3.25 pg/ml)的能力明显高于CIK细胞组(分别为51.09±3.85、32.71±2.43、30.11±3.08 pg/ml),两组比较,t值分别为442.60、14.93和6.89,差异均有统计学意义(P＜0.01).动物实验显示,与干预前相比,干预后对照组小鼠肿瘤体积明显增大(P＜0.05),而IL-2组、CIK组和IL-2转染CIK组小鼠肿瘤体积明显减小(P＜ 0.001),且IL-2转染CIK组肿瘤体积显著小于其他3组(均P＜0.01),但IL-2组和CIK组差异无统计学意义(P＞0.05).CIK组、IL-2组和IL-2转染CIK组的细胞凋亡率均显著大于对照组(P＜0.01),IL-2转染CIK组的细胞凋亡率及抑瘤率均显著大于IL-2组和CIK组(P＜ 0.01),而IL-2组和CIK组细胞凋亡率及抑瘤率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-2转染CIK细胞对恶性黑素瘤有更强的杀伤作用.     

局限期小细胞肺癌化疗联合放疗疗效分析

目的回顾分析局限期小细胞肺癌经化疗后放疗再化疗与化疗后同步化放疗再化疗的疗效。方法患者71例,分为化疗4周期后放疗再化疗2周期为A组,24例;化疗2周期后放疗再化疗4周期为B组,22例;化疗2周期后同步放化疗再化疗2周期为C组,25例。化疗为EP方案,放疗为三维适形放疗。治疗后1月判断近期疗效,观察复发进展情况,并随访无进展生存时间(PFS)和总生存时间(OS)。结果 A组、B组和C组有效率分别为75.0%、77.3%和84.0%。三组间差异无统计学意义(P>0.05)。A组、B组和C组中位PFS分别为9月、10月和13月,有统计学意义(P<0.05)。A组、B组和C组中位OS分别为15月、17月和21月,有显著统计学意义(P<0.01)。结论三组近期疗效相似,化疗2周期后同步化放疗再化疗2周期,能够延长局限期小细胞肺癌患者中位无进展生存时间和总生存时间。     

非共面容积旋转调强在食管癌治疗中的应用

目的:研究非共面容积调强（VMAT）在食管癌治疗中的应用前景。方法:选取15例2017年9月至12月间收治的局部晚期胸段食管癌患者,分别设计共面调强、非共面调强和非共面VMAT计划,分析非共面VMAT相对于共面调强和非共面调强靶区和危及器官的剂量分布情况。结果:非共面VMAT、共面调强和非共面调强都可以达到靶区剂量覆盖的要求,但非共面VMAT在适形度指数和均匀性指数上显著优于非共面调强（P<0.05）;在脊髓Dmax上,非共面VMAT均显著优于共面调强和非共面调强（P<0.05）;在肺V5、V20、V30、Dmean上,非共面VMAT也显著优于共面调强（P<0.05）;在心脏的保护上,非共面VMAT在V30、V40上和共面调强、非共面调强之间没有统计学差异。结论:在食管癌放疗中,非共面VMAT有助于提高靶区的适形度指数和均匀性指数,同时降低肺和脊髓的受照射剂量和体积,有助于降低放射性肺炎以及放射性脊髓炎发生的概率。     

氯化锂增加获得性耐药人肺癌细胞系H460R对TRAIL的敏感性

目的:通过人工诱导建立肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)获得性耐药的肺癌细胞系,氯化锂联合rhTRAIL作用细胞,以期了解氯化锂增敏TRAIL的现象及机制。方法:通过低剂量rhTRAIL诱导人肺大细胞癌细胞系H460,建立TRAIL耐药细胞株H460R并鉴定,应用MTT和流式细胞术分析氯化锂和rhTRAIL联合给药后亲本株与耐药株细胞增殖和凋亡差异,应用RT-PCR和Western blot检测死亡受体表达。结果:rhTRAIL处理亲本株H460和耐药株H460R后细胞存活率存在显著差异(P<0.01),IC50分别为59.2ng/ml和294.8ng/ml。60ng/ml rhTRAIL处理耐药株及亲本株后平均细胞凋亡比例存在显著差异(10.5%vs 19.4%,P<0.01),耐药株表现出显著的TRAIL耐受现象。但联合20mmol/L氯化锂后,MTT及流式细胞术检测耐药株细胞增殖及凋亡发现H460R对rhTRAIL的敏感性显著增加。进一步研究发现死亡受体DR4和DR5的mRNA及蛋白水平升高,这可能是药物增敏的机制之一。结论:氯化锂能够增加获得性耐药细胞系H460R对TRAIL的敏感性,死亡受体表达增加是可能的增敏机制之一。     

溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对人乳腺癌细胞的作用

目的:研究BET家族小分子抑制剂JQ1对乳腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响及其作用机制。方法:JQ1作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞存活曲线,克隆形成法测定细胞抑制率,real-time PCR检测c-MYC的基因表达水平变化。Western blotting方法检测c-MYC及BRD4蛋白表达水平的变化。结果:乳腺癌细胞MDA-MB-231对BRD4抑制剂JQ1敏感,而MCF-7则对JQ1耐受。JQ1可以诱导MDA-MB-231细胞G1期阻滞和凋亡,相同的处理因素作用于MCF-7后,则无明显的细胞周期及凋亡水平的改变。JQ1作用于MDA-MB-231细胞后可以显著下调c-MYC基因及蛋白表达水平,而JQ1作用于耐药的MCF-7后,c-MYC的基因的表达水平升高,而蛋白表达水平无明显改变。结论:BET抑制剂提供了一个潜在的治疗乳腺癌的靶点。     

进展期胃癌根治术后放化疗与单纯化疗预后分析

目的 评价进展期胃癌根治术后放化疗与单纯化疗的疗效及不良反应。方法 搜集2004—2010年Ⅱ~Ⅳ(M₀)期胃癌根治术后病例共183例,其中术后放化疗64例、单纯化疗119例。分析二者生存及不良反应,分层分析二者在不同分期、不同淋巴结转移个数、不同手术方式(D₀、D₁、D₂术式)的生存差异。采用Kaplan-Meier法计算生存率并Logrank法检验和单因素分析,不良反应等行χ²检验。结果 随访率为87.8%,随访时间满3、5年例数分别为72、29例。术后放化疗和单纯化疗的1、3、5年生存率分别为86%、62%、55%和77%、53%、43%(P=0.079),3~4级胃肠道和血液学不良反应相似(P=0.363、0.617)。单因素分析显示Ⅲ_B~Ⅳ(M₀)期、D₀切除术、淋巴结转移个数>6个者放化疗比单纯化疗生存获益(P=0.022、0.025、0.021)。结论 胃癌根治术后放化疗有延长生存趋势,不良反应可耐受。Ⅲ_B~Ⅳ(M₀)期、D₀切除术、淋巴结转移个数>6个者可从放化疗中获益。     

人喉癌细胞Hep2线粒体DNA缺失模型建立及放射生物学观察

放疗主要机制是放射线直接或间接造成细胞DNA损伤,而线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)比核DNA(nuclear DNA)缺少组蛋白保护,位于氧化呼吸链附近,更易受到损伤且损伤后缺乏有效修复^[1]。笔者通过构建Hep₂ mtDNA缺失的ρ⁰细胞模型,观察其放射敏感性、增殖、周期、ATP及活性氧族(reactive oxygen species,ROS)变化,探讨mtDNA与放射敏感性的关系及可能机制。     

非霍奇金淋巴瘤中枢神经系统侵犯的治疗

目的:研究化疗+全脑全脊髓放疗治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)中枢神经系统(CNS)侵犯的临床疗效。方法:回顾性分析18例合并中枢神经系统侵犯的非霍奇金淋巴瘤患者(15例为系统治疗后复发,3例为首程治疗前合并发生)的治疗情况,总结全脑全脊髓放疗治疗中枢神经系统侵犯的临床疗效。结果:326例病理诊断的NHL患者18例继发CNS侵犯,继发CNS侵犯多发生于B细胞性侵袭性淋巴瘤。经采用包括全脑全脊髓放疗在内的综合治疗,有效率77.8%(14/18),症状缓解率88.9%(16/18)。发生CNS侵犯的中位时间为诊断NHL后11.5月(0~40月);发生CNS侵犯后中位生存时间为9月(3~36月);诊断NHL后总生存中位生存时间为19.5月(3~74月)。发生CNS侵犯后1年生存率为45.1%,患者5年生存率为36.7%。未增加治疗相关死亡和毒性。结论:全脑全脊髓放疗是治疗非霍奇金淋巴瘤中枢神经系统侵犯的有效方法。