大肠癌CDK4、Ki-67表达与Cyclin D1、p16蛋白表达的相关性及临床意义

目的　探讨CDK4、Ki 6 7蛋白表达与临床病理因素、预后的关系及其与CyclinD1、p16蛋白表达的关系。方法　采用sp法对 89例大肠癌标本进行CDK4、Ki 6 7、CyclinD1、p16蛋白免疫组化检测。结果　CDK4核表达在组织学分级Ⅲ级与Ⅰ、Ⅱ级之间的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与术后三年生存率未见明显相关 ,与CyclinD1、p16蛋白表达明显相关 (P <0 .0 5 )。Ki 6 7强阳性表达在组织学分级Ⅲ级与Ⅰ、Ⅱ级之间及临床分期D期与B、C期之间的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与术后三年生存率及CyclinD1表达明显相关 (P <0 .0 5 ) ,与p16蛋白表达无明显相关。CDK4核表达组Ki 6 7强阳性表达明显增高。结论　大肠癌CDK4核表达具有癌基因蛋白的特性 ,对组织分化及细胞增殖有一定的影响 ,Ki 6 7强阳性表达对评估预后、组织分化、临床进展有一定意义。CyclinD1、CDK4与p16共同参与大肠癌的发生与发展。     

细胞周期相关蛋白在大肠癌中的表达及其意义

目的 探讨细胞周期相关蛋白在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化S-P法对70例大肠癌组织及距癌灶3 cm以外的癌旁组织、10 cm以外的正常组织中CyclinDl、CDK4、p16和Pb进行检测.结果 CyclinD1和CDK4在大肠癌中过度表达,分别为36/70(51.4%)和28/70(40.0%),并与肿瘤的分化程度呈反比,有淋巴结转移的大肠癌,其CyclinD1和CDK4的阳性率分别为70.0%和60.0%,无淋巴结转移的大肠癌阳性率分别为44.0%和32.0%,两者相比差异有显著性(P＜0.05),p16在大肠癌中为低表达33/70(47.1%),癌旁组织和正常组织中p16的表达分别为57.1%和71.4%,Rb在大肠癌、癌旁及正常组织中的表达分别为65.7%、78.6%和85.7%.CyclinD1与CDK4呈正相关关系(P＜0.05).CyclinD1与p16、p16与Rb是负相关关系(P＜0.05、P＜0.05).结论 CyclinD1、CDK4的过度表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关;p16的表达可能受Rb蛋白的负调控;CyclinD1的过度表达和p16的低表达在大肠癌发生中起协同作用;     

细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、p16在大肠癌中的表达及其意义

目的 探讨细胞周期调控因子在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化S-P法对70例大肠癌组织及距癌灶3 cm以外的癌旁组织,10 cm以外的正常组织中CyclinD1、CDK4、和p16进行检测.结果 CyelinD1和CDK4在大肠癌中过度表达,分别为36/70(51.4%)和28/70(40.0%),并与肿瘤的分化程度呈反比,有淋巴结转移的大肠癌,其CyclinD1和CDK4的阳性率分别为70.0%和60.0%,无淋巴结转移的大肠癌阳性率分别为44.0%和32.0%,两者相比差异有显著性(P《0.05),p16在大肠癌中为低表达33/70(47.1%),癌旁组织和正常组织中p16的表达分别为57.1%和71.4%,CyclinD1与CDK4呈正相关关系(P《0.05).CyelinD1与p16呈负相关关系(P《0.05).结论 CyclinD1、CDK4的过度表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关;CyclinD1的过度表达和p16的低表达在大肠癌发生中起协同作用;大肠癌的发生机制涉及CyclinD1、CDK4和p16调节环路中多个基因的异常.     

胃癌及癌前病变中p16、p21WAF1、CDK4、cyclin D1蛋白的表达及其意义

目的探讨胃癌及癌前病变中p16、p21WAF1、CDK4和cyclinD1蛋白的表达、相互关系及其意义。方法应用免疫组化SP法检测胃癌、不典型增生、慢性浅表性胃炎及正常胃组织中p16、p21WAF1、CDK4和cyclinD1蛋白的表达情况。结果胃癌中p16和p21WAF1蛋白表达率分别为52.7％、30.9％,显著低于慢性浅表性胃炎和不典型增生（P<0.01）,而CDK4和cyclinD1蛋白表达率分别为61.8％、47.3％,均明显高于正常胃组织和慢性浅表性胃炎,差异有显著性（P<0.01）,但胃癌和不典型增生组织中CDK4和cyclinD1蛋白表达率之间差异无显著性（P>0.05）。胃癌中p16与cyclinD1蛋白表达呈负相关关系（P<0.05）,而CDK4与cyclinD1呈正相关关系（P<0.01）。结论胃癌发生机制涉及p16、p21WAF1、CDK4和cyclinD1调节通路中多个基因的异常,且与胃癌Lauren分型、浸润深度、淋巴结转移有关。CDK4和cyclinD1蛋白高表达可能是胃癌发生过程中的早期分子事件。     

Rb、p16、CyclinD1基因蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨抑癌基因Rb、p16和癌基因CyclinD1在大肠癌中的表达及临床意义.方法:采用流式细胞分析技术(Flow cytometry,FCM),定量研究在大肠癌与正常粘膜中Rb、p16、CyclinD1的表达情况,所有数据换算成荧光指数(Fluorescence Index,FI)值后,利用SAS软件包进行统计分析.结果:1)30例大肠癌组织与正常粘膜中Rb、p16、CyclinD1 FI(x s)值经t检验,均P＜0.01;2)以Rb表达阳性、阴性进行分组,在Rb阳性下,p16与组织学分级呈负相关,CyclinD1与组织学分级呈正相关,p16与淋巴转移呈负相关,均P＜0.01.在Rb阴性下,Rb与淋巴转移呈负相关,p16与淋巴转移呈正相关,而CyclinD1与淋巴转移呈负相关,均P＜0.01.结论:1)Rb、p16、CyclinD1在大肠癌、正常粘膜组织中的表达存在显著差异;2)在Rb阳性下,p16失活、缺失或突变会导致组织的恶性程度增加且易发生淋巴转移,CyclinD1的激活会导致组织的恶性程度增加;3)在Rb阴性下,各种结果显示:负反馈机制在其中可能起作用.     

睾丸精原细胞瘤中p27kip1、p21ras、p16的表达及其临床意义

目的探讨p27kip1、p21ras、p16在精原细胞瘤中的表达及临床意义.方法采用免疫组化S-P法检测46例精原细胞瘤组织、10例正常睾丸组织p27kip1、p21ras、p16蛋白的表达情况.同时用PCR法检测27例精原细胞瘤组织p16和p21基因的缺失情况.结果 p27kip1在精原细胞瘤组织中的阳性表达率为48.9%(22/45),显著低于正常睾丸组织的90.0%(P<0.05),p27kip1蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达与淋巴结和远处器官转移相关(P<0.05),与组织学分型无关;p21ras、p16蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达率分别为42.2%(19/45)和60.0%(27/45),与正常睾丸组织比较,差异无显著性(P>0.05).p16、p21ras蛋白在精原细胞瘤组织中的表达与组织学类型及淋巴结转移无相关性(P>0.05).p21基因无纯合子缺失.p16基因纯合子缺失率为44.4%(12/27),其缺失率与精原细胞瘤的组织学类型、淋巴结和远处器官转移无关.p27kip1、p21ras及p16阳性表达率之间有相关性(P<0.05).结论 p27kip1蛋白的低表达或缺失可能与精原细胞瘤的发生、浸润转移有关,可作为估计精原细胞瘤预后的良好指标.p16基因的缺失和表达下降可能是精原细胞瘤发生的早期事件.     

子宫颈鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒感染与Rb相关基因蛋白的表达及其意义

 目的　探讨子宫颈浸润性鳞状细胞癌（ISCC）中高危型人乳头瘤病毒（HPV）16／18、31／33感染与Rb相关基因蛋白p16ink4a、CyclinD1、CDK4、Rb、E2F-1和Ki-67的表达情况并分析HPV及Rb相关蛋白与ISCC临床病理参数的相关性。方法　收集73例ISCC、30例高级别鳞状上皮内病变（HSIL）、32例低级别鳞状上皮内病变（LSIL）和21例正常子宫颈鳞状上皮（NCE）。采用原位杂交法检测HPV16／18、31／33DNA的表达;免疫组织化学二步法检测上述蛋白的表达。统计分析HPV、上述蛋白及临床病理参数的关系。结果　HPV16／18、31／33在四组总体间表达差异有统计学意义（P＜0.01）,HPV16／18阳性表达与脉管内瘤栓正相关（OR＝3.875）,HPV31／33阳性表达与临床分期正相关（OR＝3.5）;p16ink4a、CyclinD1、CDK4、Rb、E2F-1和Ki-67在四组总体间差异有统计学意义（P＜0.01）。Rb与Ki-67正相关（rs=0.250）;p16ink4a阳性表达与组织分级负相关（OR＝0.942）;CDK4阳性表达与组织分级正相关（OR＝1.033）;年龄与临床分期正相关（OR＝1.063）。结论　HPV16／18、31／33感染与ISCC的发生、发展密切相关;CDK4、Ki-67可作为子宫颈病变程度的客观参考指标;Rb在ISCC中的详细作用机制还需进一步探讨。     

大肠癌 p27蛋白表达与 DNA倍体分析的研究

背景与目的细胞周期调控的改变存在于绝大多数肿瘤中,因此可以认为肿瘤是一类细胞周期疾病.p27蛋白是细胞周期负性调控因子的主要成员,同时也是肿瘤的重要预后因子.p27蛋白表达下降及亚细胞定位改变在大肠癌发展中的意义尚不清楚.大肠癌中 p27蛋白表达与 DNA倍体关系尚未见报道.本实验研究大肠癌 p27蛋白表达与临床病理特征及 DNA倍体分析的关系.方法应用免疫组化方法检测 p27蛋白在 40例大肠癌中的表达水平,同时应用病理图像 DNA测量系统对癌组织进行倍体分析.结果p27蛋白在大肠癌中的高表达率为 62.5%(25/40),低表达率为 37.5%(15/40),p27蛋白低表达与大肠癌分化程度低显著相关(P< 0.05).除胞核着色外,32.5%(13/40)的大肠癌出现胞浆免疫阳性反应.p27蛋白胞浆表达与 Dukes分期晚(P< 0.01)、易发生淋巴结转移显著相关(P< 0.05).p27蛋白低表达组 DNA多倍体细胞检出率(22.2± 11.3)% 明显高于 p27蛋白高表达组 [(8.0± 7.7)%,P< 0.001]. 结论p27蛋白表达的下降及亚细胞定位改变促进大肠癌的发展 ; 抑制 DNA多倍体形成可能是 p27蛋白的抑癌机理之一.     

鼻咽癌及癌前病变组织中p16蛋白表达的研究

目的观察p16蛋白在鼻咽癌组织中的表达状态,探讨其与鼻咽癌的发生、发展关系。方法应用S-P免疫组化法检测p16蛋白在50例鼻咽癌、20例鼻咽粘膜慢性炎组织中的表达。结果鼻咽癌p16蛋白表达率为24.0%,显著低于鼻咽粘膜慢性炎组(P<0.01)。角化性鳞癌p16蛋白的表达率明显高于分化型非角化性癌和未分化癌(P<0.05)。20例淋巴结转移阳性组中p16蛋白表达率显著低于14例阴性组(P<0.05)。结论p16蛋白的缺失可能涉及鼻咽癌的发生、发展过程,且与鼻咽癌的转移、组织学分型有关。     

细胞周期调控基因与人类乳头状瘤病毒在子宫颈癌中的表达

目的分析细胞周期调控基因p16^INK4A、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及Ki-67蛋白与人乳头状瘤病毒（HPV）16／18、31／33在子宫颈鳞状细胞癌（ISCC）中的表达,研究其在ISCC发生、发展中的作用和相关性。方法应用组织芯片结合原位杂交法和免疫组织化学法检测66例ISCC、35例子宫颈上皮内瘤变（CIN）、30例正常子宫颈鳞状上皮（NCE）中p16^INK4A、Cyclin D1、Ki-67和HPV16／18、31／33的表达。应用SPSS13．0统计软件分析结果。结果HPV16／18、p16^INK4A、Cyclin D1及Ki-67在ISCC中的表达明显高于CIN和NCE组,差异有统计学意义;p16^INK4A蛋白阳性表达率与组织学分级呈正相关;Ki-67阳性表达率与淋巴结转移和子宫颈管壁浸润深度呈正相关;Cyclin D1蛋白与临床各参数均无相关性（P〉0．05）。结论高危HPV在ISCC的发生、发展中起重要作用,p16^INK4A基因可能不是单纯作为抑癌基因在子宫颈癌中起作用,Ki-67可以作为鉴别良、恶性肿瘤的有价值的临床参考指标。     

哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达

目的：构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法：从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果：RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论：成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。     

人FL基因表达载体的构建及其体内外生物活性的研究

目的:构建人Flt3配基的胞外区表达载体pCDNA3FL,并在体内外对其表达率及活性进行检测。方法:从健康人单核细胞中反转录PCR扩增FLcDNA胞外区片段,并进行测序,构建表达载体pCDNA3FL,测定pCDNA3FL转染H22细胞后及经小鼠尾静脉注射后hFL表达量。结果:测序结果表明,所扩增、克隆的靶序列正确,Western结果证实pCDNA3FL能正确表达hFL蛋白。ELISA结果表明表达载体pCDNA3FL在体外H22细胞中的瞬时表达量为5.9ng/ml。小鼠经尾静脉注射pCDNA3FL载体后血浆中的hFL蛋白最高含量为36μg/ml,外周血中CD3 、CD4 、CD8 、CD34 细胞亚群的比率均有不同程度的提高。结论:成功构建了表达载体pCDNA3FL,为构建肿瘤细胞瘤苗创造了条件。     

AR在乳腺导管原位癌中的表达及其与ER、PR表达的关系

目的:研究导管原位癌中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达情况,探讨AR表达与组织分级及与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达的关系.方法:用免疫组织化学方法研究51例不同级别导管原位癌(breast ductal carcinoma in situ,DCIS)中AR的表达及与ER、PR表达状态的相关性.结果:AR阳性表达于18例DCIS中,33例DCIS中没有表达.13例低级别导管内癌中有3例AR阳性表达,15例中级导管内癌中有7例AR阳性表达,23例高级导管内癌中有8例AR阳性表达(P=0.4270).导管内癌的分化程度与ER(P =0.0036)及PR(P=0.0398)的表达密切相关.在导管内癌的不同组织学亚型间AR的表达差异有统计学意义(P=0.0156),但ER(P =0.0695)与PR(P=0.4672)的表达无差异.绝经前与绝经后患者导管内癌的AR表达无差异(P =0.6510),但ER(P=0.0074)与PR(P=0.0259)的表达有差异.结论:有一部分乳腺导管内癌表达AR,导管内癌的AR表达与组织分化程度无关,与DCIS中ER、PR表达也没有相关性.     

Survivin在乳腺癌中的表达及其与p53的关系

目的:观察Survivin在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况,探讨其与突变型p53基因表达的相关性。方法:用免疫组化SP法检测60例乳腺癌组织,60例癌旁乳腺正常组织中Survivin和p53的表达情况,分析其与腋窝淋巴结转移之间的关系。结果:60例乳腺癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为78.33%,明显高于癌旁正常组织(5.00%)(P<0.05),Survivin在p53阳性的乳腺癌组织中的表达率明显高于p53阴性组,Survivin的表达与乳腺癌的病理分级和淋巴结转移状况无显著相关。结论:乳腺癌组织中Survivin表达上调与乳腺癌的发生与发展密切相关,其表达与p53基因突变显著相关,两者可能协同作用参与乳腺癌的发生与发展。     

PEA-15真核表达载体的构建及表达

目的构建PEA-15真核表达载体pcDNA3．1-PEA-15,并在人类食管癌细胞（EC-109）中表达。探讨PEA-15对EC．109细胞的影响。方法采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测EC-109细胞中的PEA-15基因表达。构建重组真核表达载体pcDNA3．1-PEA-15。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至EC-109细胞中。采用RT—PCR、Westernblot法检测基因及蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率。结果RT—PCR显示PEA-15在EC-109细胞中表达。PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果表明真核表达载体pcDNA3．1-PEA-15构建成功。转染后的细胞中PEA-15表达均增加（t值分别为4．078、5．269,均P〈0．05）。转染质粒72h后,细胞的生长抑制率较转染空质粒组降低[（7．12±0．86）％、（12．55±1．78）％,t=6．163,P〈0．05]。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3．I-PEA-15,并在EC-109细胞中进行了表达;转染后对食管癌细胞生长有促进作用,其表达可能促进食管癌的发生。     

胃癌miRNAs表达谱及胃癌组织miR-21表达临床意义探讨

目的:筛选胃癌miRNAs表达谱,探讨miR-21在胃癌组织中的表达情况及其临床病理意义.方法:收集手术切除新鲜胃癌标本共65例,包括胃癌组织及相应胃正常上皮组织,随机选取其中6例,应用miRNA芯片技术研究胃癌的miRNAs表达谱.采用实时定量PCR验证芯片结果并检测miR-21在65例胃癌组织标本及相应胃正常上皮组织的表达水平,探讨其表达与胃癌临床病理参数间的关系.结果:与胃正常上皮组织相比,胃癌组织中表达上调超过2倍的miRNAs有7个(miR-374b*、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b和miR-18a),表达下调超过2倍的miRNAs有9个(miR-29b-2*、miR-1260、miRPlus-E1241、miR-S1-5p、miR-148a、miR-29c、miR-647、miR-196b×和ebv-miR-BART5).46例(70.8％)胃癌组织中miR-21表达水平明显高于胃正常上皮组织,且与肿瘤的分化程度(x2=6.257,P=0.012)、浸润深度(x =5.705,P=0.017)和有无淋巴结转移(x2=7.107,P=0.008)有关.结论:筛选出的差异表达miRNAs可能参与胃癌的发病;miR-21与胃癌生物学行为密切相关,可能成为胃癌诊断和治疗的潜在生物学指标.