siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1，以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平，筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组，siRNA处理细胞后，采用CCK-8法检测细胞增殖情况，采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况，Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h；siRNA处理细胞后，与空白对照组相比，siRNA组细胞增殖率明显降低，凋亡率明显升高，Bax、caspase-3蛋白表达明显升高，Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AKT蛋白表达无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1，抑制鼻咽癌细胞增殖，促进其凋亡，可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

CiRS-7/P13K/AKT轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响及紫草素干预机制研究

摘 要：［目的］ 探讨小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellar degeneration-related protein 1 antisense,CDR1as,又名 ciRS-7)调控磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,P13K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）通路对乳腺癌细胞生物学行为影响及紫草素干预机制。［方法］ 选取河南黄河科技学院附属医院收治的41例乳腺癌患者癌组织及癌旁正常乳腺组织,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ciRS-7、P13K及AKT 信使RNA（messenger RNA,mRNA）表达情况。选取乳腺癌细胞株MCF-7及正常乳腺细胞MCF-10A进行体外实验。采用RT-PCR法检测MCF-7和MCF-10A细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达水平。向MCF-7细胞株转染 ciRS-7抑制剂（转染组） 和ciRS-7 inhibitor 阴性对照（阴性对照组）48 h后,采用Western blot法检测细胞P13K、磷酸化P13K（phosphorylation- phosphatidylinositol-3 kinase,p-P13K）、AKT、磷酸化AKT（phosphorylation- protein kinase B,p-AKT）蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室体外侵袭和迁徙实验检测细胞的体外迁移及侵袭能力。采用不同浓度（0、4、8、16 μmol/L）紫草素对MCF-7细胞进行干预,48 h后检测细胞增殖抑制率及凋亡率,RT-PCR法检测ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达,Western blot法检测细胞P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白表达量。［结果］ 相较于癌旁组织和MCF-10A细胞,乳腺癌组织和MCF-7细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平更高（P＜0.05）。MCF-7细胞转染后,相较于阴性对照组,转染组P13K、p-P13K、AKT和p-AKT蛋白相对表达量有所降低,且细胞迁徙及侵袭能力均降低;转染48 h后,转染组和阴性对照组增殖抑制率分别为36.71%±4.22%、0.09%±0.05%,两组凋亡率分别为27.84%±3.57%、5.44%±1.28%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。随着紫草素干预浓度的增加,48 h细胞增殖抑制率及凋亡率也有所上升,ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平以及P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量有所降低（P＜0.05）。 ［结论］ ciRS-7可通过P13K/AKT通路对乳腺癌细胞生物学行为产生影响,紫草素抑制乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能与ciRS-7/P13K/AKT通路有关。     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞，将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组，siRNA转染48 h，通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达；通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力；MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后，EC9706细胞XIAP表达明显降低，与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较，si-XIAP组细胞增殖明显降低，黏附率明显升高，侵袭和迁移能力明显降低，p-AKT和MMP-2表达明显降低，E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率，抑制侵袭和迁移能力，机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

siRNA沉默STMN1基因抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制探讨

目的:观察下调肺癌细胞中STMN1基因的表达对癌细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:以人正常肺细胞MRC-5作为对照,通过Western bloting检测人肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中STMN1的蛋白表达;STMN1的siRNA转染A549细胞为实验组,另设空白组和阴性组,转染48 h后,Western bloting检测转染效果;CCK8法及Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力;Western bloting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达。结果:STMN1在肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中的蛋白表达均显著高于在MRC-5细胞中的表达（P<0.05）,选择A549细胞为研究对象。转染STMN1 siRNA的A549细胞STMN1的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）。与空白组比较,实验组细胞增殖及侵袭能力均显著降低,PCNA、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论:siRNA沉默STMN1的表达通过下调PI3K/AKT信号通路降低肺癌细胞增殖及侵袭能力。     

mTOR通路抑制剂GDC-0349对CCRF-CEM细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨mTOR通路抑制剂GDC-0349对急性T淋巴细胞白血病细胞株CCRF-CEM细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度GDC-0349作用于CCRF-CEM细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 检测凋亡相关蛋白及AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果:GDC-0349作用于CCRF-CEM细胞后细胞增殖率减少且凋亡率增加（P＜0.05);凋亡相关蛋白Caspase3和BCL2下调,Cleaved-Caspase3增加（P＜0.05);通路相关蛋白AKT、p-AKT及p-mTOR下调（P＜0.05）。结论:GDC-0349能够抑制AKT/mTOR通路活化,从而促进CCRF-CEM细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

CHKA基因沉默对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制

背景与目的：胶质瘤是颅内常见的原发性恶性肿瘤之一,但发病机制不明,胆碱激酶A（choline kinase A,CHKA）与胶质瘤的恶性程度呈正相关,但具体作用途径尚不清楚。探讨下调CHKA基因的表达对胶质瘤细胞系U87和U251增殖、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法：使用慢病毒感染胶质瘤细胞系U87和U251,同时设置阴性对照组（shNC组）和空白对照组（control组）。为研究磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号转导通路与CHKA的相互作用,另设DMSO组和LY294002组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测CHKA基因mRNA的表达水平,采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,采用transwell实验检测细胞侵袭能力,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测胶质瘤细胞中CHKA、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白的水平。结果：Western blot结果显示,与control组和shNC组相比,shCHKA组胶质瘤细胞中p-PI3K、p-AKT和CHKA蛋白水平同步降低（P＜0.05）,PI3K、AKT蛋白水平无明显改变。在使用通路抑制剂后CHKA的表达量在control组和shNC组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。与此同时,shCHKA组胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力均弱于control组和shNC组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显增加,细胞周期主要停滞于G ₂ 期,细胞增殖明显降低（P＜0.05）。结论：CHKA基因可能是通过调控PI3K/AKT信号转导通路,从而影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为,且CHKA对PI3K/AKT信号转导通路的调控是单向的,PI3K/AKT信号转导通路中蛋白水平的降低对CHKA的表达无反馈作用。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

淫羊藿素通过PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌H460细胞增殖

目的:探讨淫羊藿素（icaritin）通过PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色实验检测,不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）淫羊藿素处理H460细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞凋亡的影响,Western blot实验检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Cleaved-Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:淫羊藿素可抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖,并表现为剂量和时间依赖性（P＜0.05）。0、5、10、20μmol/L淫羊藿素处理H460细胞24h后,H460细胞凋亡率分别为（4.90±1.20）%、（13.5±2.32）%、（16.47±1.90）%和（27.43±3.15）%,P＜0.05。淫羊藿素可下调PI3K、AKT的表达水平,降低AKT的磷酸化(p-AKT)水平,上调Cleaved-Caspase-9表达水平(P＜0.05)。结论:淫羊藿素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制H460细胞增殖。     

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平（P＜0.05）。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

抑制缺氧诱导因子1α表达对原代血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的:探讨抑制缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因表达对体外培养的血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法:用组织块结合酶消化法提取原代血管瘤内皮细胞,取第3代细胞用于实验。实验分为空白组、阴性对照组和HIF-1α转染组,转染48 h后Western bloting检测各组细胞中HIF-1α、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、Fas、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达;CCK8和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果:阴性对照组HIF-1α的蛋白表达与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05）,而HIF-1α转染组HIF-1α的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;HIF-1α转染组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3、Fas蛋白显著上调表达,PI3K、p-AKT蛋白显著下调表达,与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:抑制HIF-1α基因表达可降低血管瘤内皮细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

丹皮酚通过下调miR-21并抑制PI3K/AKT通路抑制Hela细胞侵袭、转移及增殖

目的:探讨丹皮酚对Hela细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法:使用不同浓度（50、100、200 和400 mg/L）丹皮酚处理Hela细胞株,分为正常对照组（NC组）、不同浓度丹皮酚组、miR-NC组、miR-21组、丹皮酚+miR-NC和丹皮酚+miR-21组。PI3K的激动剂740Y-P (25 μg/mL)加入丹皮酚组、 NC组,分别定义为丹皮酚+740Y-P组、740Y-P组。MTT检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞miR-21表达水平;Western blot检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、MMP9水平。结果:丹皮酚可抑制Hela细胞增殖能力（P＜0.05）,抑制作用与浓度呈正相关。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。与NC组比较,丹皮酚组侵袭及迁移细胞数量、MMP2蛋白、MMP9蛋白、miR-21表达水平明显降低（P＜0.01）。与NC组比较,丹皮酚组细胞凋亡率增加,G1期延长,S期、G2期缩短（P＜0.01）。与NC组、miR-NC组相比,48、72 h 时miR-21组细胞活力明显升高（P＜0.05）,克隆、侵袭及迁移细胞数量明显升高(P＜0.05)。与丹皮酚组、丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.05）。与NC组比较,丹皮酚组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显下降（P＜0.01）;与丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）。与丹皮酚组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.01）,与740Y-P组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数降低（P＜0.01）。结论:丹皮酚可下调miR-21,抑制PI3K/AKT通路,进而抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

川芎嗪通过PTEN/AKT通路抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖、侵袭和转移

目的:研究和探讨川芎嗪对人外阴鳞癌细胞SW962细胞功能（增殖、凋亡、转移、侵袭）的影响以及机制。方法:将不同浓度川芎嗪配置而成的培养基干预处理外阴鳞癌SW962细胞。MTT法检测川芎嗪梯度浓度变化和处理时间变化对SW962细胞增殖和生存率的影响；流式细胞术检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞凋亡的影响；Transwell小室实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移和侵袭的影响；划痕实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移的影响；Western blot电泳法检测川芎嗪对PTEN、AKT、p-AKT、cyclinD1蛋白表达的影响。结果:川芎嗪显著抑制SW962细胞增殖（P＜0.05），诱导SW962细胞凋亡增加细胞凋亡率（P＜0.05），抑制SW962细胞转移和侵袭（P＜0.05）。Western blot结果显示，川芎嗪处理细胞可以增加抑癌基因PTEN的表达，降低p-AKT和cyclinD1蛋白的表达（P＜0.05）。结论:川芎嗪可以通过影响PTEN/AKT/cyclinD1信号通路抑制外阴鳞癌细胞SW962的增殖，诱导凋亡，抑制SW962细胞转移和侵袭。     

miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制。方法 成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细胞转染无意义序列),细胞转染后倒置荧光显微镜下观察miR-182 mimics的转染效率,检测各组miR-182 mRNA表达水平及增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为改变,同时检测PI3K/AKT/FOXO3a信号通路相关蛋白(PI3K、p-AKT、FOXO3a)表达水平。结果 miR-182 mimics组miR-182 mRNA表达水平明显高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P＞0.05);miR-182 mimics组细胞转染后24、48及72 h时的细胞增殖率及迁移、侵袭能力明显高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),而细胞转染后24、48及72 h时的细胞凋亡率明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P＞0.05);miR-182 mimics组胶质瘤干细胞转染miR-182 mimics后PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01),FOXO3a蛋白表达水平明显低于空白对照组、阴性对照组(P＜0.01),而空白对照组与阴性对照组PI3K、p-AKT、FOXO3a蛋白表达水平比较无统计学差异(P＞0.05)。结论 miR-182可能通过激活活化PI3K/AKT/FOXO3a信号通路而起到增强GSCs增殖、迁移及侵袭能力和抑制细胞凋亡的作用,可能作为临床治疗胶质瘤的新靶点。     

ABL2在肺癌中的作用及机制研究

目的 探究ABL2在肺癌中的作用及其机制。方法 采用Realtime PCR方法检测ABL2在肺癌组织和癌旁组织中的表达情况。然后建立稳定低表达ABL2的肺腺癌A549细胞株;通过MTT、细胞迁移和克隆形成实验检测细胞增殖和迁移能力的变化情况;Western blot检测EMT、凋亡和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 肺癌组织中ABL2的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。在A549细胞系中沉默ABL2后,与对照组相比,48 h后细胞的迁移能力减弱(P＜0.001),从第3天开始细胞的生长速度开始明显减缓(P＜0.05),15天后形成的平均克隆数也减少(P＜0.01)。Western blot结果显示,沉默ABL2后上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P＜0.001),间质细胞标志物N-cadherin(P＜0.001)、Vimentin(P＜0.01)及Snail(P＜0.001)表达降低。凋亡相关蛋白Bcl-XL表达下降(P＜0.01),BAX表达上调(P＜0.001)。PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K P110(P＜0.05)、AKT(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)蛋白的表达都明显降低。结论 沉默ABL2基因能够通过PI3K/AKT信号通路促进细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖和迁移。     

长链非编码RNA HOXD-AS1介导骨肉瘤细胞阿霉素耐药的机制研究

目的:观察长链非编码RNA HOXD-AS1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖、凋亡能力以及对阿霉素化疗耐药的影响，并探讨其机制。方法:首先采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)检测人正常成骨细胞和OS细胞系以及阿霉素耐药OS细胞系中lncRNA HOXD cluster antisense RNA 1 (lncRNA HOXD-AS1)和P-gp（P-glycoprotein）的表达水平；在骨肉瘤细胞中抑制lncRNA HOXD-AS1表达后，通过RT-PCR和Western-blot检测P-gp的表达水平；在骨肉瘤细胞中抑制lncRNA HOXD-AS1表达后，再过表达P-gp，应用CCK-8 法检测转染后各组吸光值以评价增殖率，应用Annexin V/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率，在培养基中加入阿霉素检测各组细胞存活率。结果:与正常成骨细胞相比，OS细胞中lncRNA HOXD-AS1过表达，P-gp过表达(P＜0.05)；抑制lncRNA HOXD-AS1表达后OS细胞中P-gp表达下调(P＜0.05)；OS细胞中抑制lncRNA HOXD-AS1表达后细胞增殖转移能力明显减弱（P＜0.05），凋亡增加（P＜0.05），化疗耐药减弱（P＜0.05）；而过表达P-gp后恶性表型明显恢复（P＜0.05）。结论:LncRNA HOXD-AS1可通过调控 P-gp的表达而调节OS细胞的增殖、凋亡和化疗耐药，参与OS的发生发展。