一种新型PI3K/mTOR双抑制剂GDC-0941的抗肝癌机制探讨

目的 探讨磷脂酰肌醇3磷酸激酶(PI3K)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激酶双抑制剂GDC-0941抗肝癌活性及其作用机制.方法 分别采用MTT法和流式细胞术测定GDC-0941对HepG2肝癌细胞生长和细胞周期的影响;通过免疫印迹法检测信号通路蛋白、细胞周期抑制因子和凋亡相关蛋白的表达.结果 GDC-0941对HepG...     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

ABT-199体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt4细胞增殖凋亡影响及其机制研究

目的 大多数肿瘤细胞对化疗诱导细胞凋亡的耐受与Bcl-2家族蛋白有关,ABT-199是针对抗凋亡蛋白Bcl-2的选择性拮抗剂.本研究旨在探讨ABT-199体外对急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞株增殖凋亡的影响及其机制.方法 体外培养Molt4细胞,CCK8法检测不同浓度ABT-199对Moh4的增殖抑制作用,DAPI细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,Annexin Ⅴ/PI双染法检测不同浓度ABT-199对Molt4细胞的诱导凋亡作用,JC-1染色法检测不同浓度ABT-199作用于Moh4细胞后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测经ABT-199处理后线粒体信号通路相关蛋白(Bcl-2、PARP和cleaved Caspase-3蛋白)表达水平的变化.结果 ABT-199对Molt4细胞具有抑制增殖的作用,48 h的IC50值为(4.63±0.15) μmol/L.荧光显微镜观察显示,ABT-199处理Moh4细胞后细胞核染色质染色浓聚,细胞核碎裂,出现凋亡小体,且随着药物浓度的增加上述形态变化更加明显;Annexin Ⅴ/PI检测细胞凋亡结果显示,0、1、2、4、8 μmol/L的ABT-199诱导细胞凋亡的百分比分别为(3.09±1.16)％、(11.59±5.58)％、(25.37±7.42)％、(46.38±7.05)％和(80.60±11.18)％,给药组与对照组的凋亡比例差异有统计学意义,x2=18.286,v=4,P=0.001.JC-1检测结果显示,ABT-199能促使Molt4细胞的线粒体膜电位下降,呈浓度依赖性,给药组与对照组的线粒体膜电位下降比例差异有统计学意义,x2 =17.386,v=4,P=0.002.蛋白质印迹法检测结果显示,给药组线粒体通路中Bcl-2表达水平显著下降(x2=9.024,v=3,P=0.029),并出现Caspase-3下游底物多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP ribose poly-merase,PARP)的裂解,同时出现了Caspase-3裂解片段的累积.结论 ABT-199在体外能抑制急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制与激活线粒体信号通路相关.     

科罗索酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究科罗索酸（corosolic acid）对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的科罗索酸处理K562细胞,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,分光光度法检测对Caspase-3/7,-8,-9活性的影响。结果:科罗索酸能显著抑制白血病K562细胞的增殖,并且这种抑制作用随着科罗索酸浓度升高和培养时间延长而显著增强。科罗索酸处理后的K562细胞中,处于G0/G1期的细胞比率明显升高（P＜0.05）,S期和G2/M期的细胞明显减少（P＜0.05）,凋亡细胞明显增多（P＜0.05）,Caspase-3/7,-8和-9的活性明显增强。结论:科罗索酸能抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,这一效应可能与Caspase活性的增强有关。     

Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法：运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果：survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论：Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究 PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对不同类型白血病细胞的增殖抑制及诱导凋亡效应。方法用基因工程技术构建含有 PTD4-GFP-Apoptin 目的基因的重组载体,表达 PTD4-GFP-Apoptin融合蛋白,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测其对白血病细胞增殖的影响,用流式细胞术（FCM）检测其对白血病细胞凋亡的影响。结果 PTD4-GFP-Apoptin 对不同类型的白血病细胞都有不同程度的增殖抑制效应,且抑制效应与作用的时间和浓度呈正相关;PTD4-GFP-Apoptin 对急性髓系白血病细胞株HL-60有诱导凋亡作用,其凋亡率与 PBS 对照组细胞相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PTD4能够携带大分子蛋白质穿过细胞膜,PTD4-GFP-Apoptin 在体外对多种白血病细胞有抑制增殖的作用;Apoptin 可诱导白血病细胞凋亡,而正常细胞不受影响,可能成为临床治疗白血病的新型药物。     

马鞭草总黄酮通过AKT/mTOR信号通路调控自噬抑制肝癌细胞增殖

目的:分析马鞭草总黄酮(total flavonoids of verbena officinalis L.,TFV)对肝癌细胞自噬和增殖的影响,并探讨其机制。方法:MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-甲基腺嘌呤(3-MA)、雷帕霉素(RAPA)研究TFV对自噬、细胞增殖的影响,MTT法检测细胞存活率。裸鼠成瘤实验验证TFV对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬相关蛋白水平的影响。结果:TFV能增加HepG2、Huh-7细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加,促进HepG2、Huh-7细胞中自噬蛋白Beclin-1、LC3 II/LC3 I水平表达,降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.05)。与TFV组比较,TFV+3-MA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显降低,p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05);与TFV组比较,TFV+RAPA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05);与TFV组比较,TFV+3-MA组裸鼠瘤体LC3 II/...     

邻苯二甲酸正丁酯对急性白血病原代细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨邻苯二甲酸正丁酯(DBP)对急性白血病患者骨髓原代白血病细胞增殖与凋亡的影响.方法应用体外液体悬浮培养观察细胞增殖;应用DNA片段凝胶电泳方法观察细胞凋亡;组间差异用t检验.结果DBP50μg/ml和200μg/ml处理24小时,对急性白血病原代细胞增殖抑制率分别为24.24%和36.33%,来自急性髓系白血病的原代细胞较急性淋巴细胞性白血病原代细胞对DBP抑制作用更敏感.DBP诱导白血病原代细胞凋亡,在DNA片段凝胶电泳时显示典型的细胞凋亡表现.结论 DBP可能通过抑制急性白血病细胞增殖和诱导其凋亡来发挥净化白血病骨髓的作用.     

mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014（10、100、500、1 000 nmol/L）对肝癌细胞增殖的作用,再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1（UHRF1）mRNA和蛋白的表达水平。结果：细胞增殖实验结果显示,10、100、500、1 000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力,抑制程度与其浓度呈正相关（P < 0.05）;荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,500和1 000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论：AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。     

mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014（10、100、500、1 000 nmol/L）对肝癌细胞增殖的作用，再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1（UHRF1）mRNA和蛋白的表达水平。结果：细胞增殖实验结果显示，10、100、500、1 000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力，抑制程度与其浓度呈正相关（P < 0.05）；荧光定量PCR和Western blot检测结果显示，500和1 000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论：AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。     

芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡和miR-21/PTEN/AKT信号通路的影响

目的:探讨芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:以不同浓度（0、12.5、25、50、100和200 μg/ml）芒柄花黄素处理HL-60细胞24、48和72 h后，采用MTT法检测细胞存活率，并计算出IC50以筛选出合适的作用浓度。采用流式细胞仪检测芒柄花黄素对HL-60细胞周期和凋亡的影响，实时荧光定量PCR检测芒柄花黄素对HL-60细胞中miR-21表达的影响，免疫印迹法检测芒柄花黄素对HL-60细胞中PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。结果:与0 μg/ml处理组相比，25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素处理24 h后HL-60细胞的存活率明显降低（P<0.05）；同时，12.5、25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素分别处理48 h和72 h后HL-60细胞的存活率明显低于0 μg/ml处理组（P<0.05）；芒柄花黄素作用HL-60细胞24、48和72 h后的IC50值分别为146.50 μg/ml、120.10 μg/ml和89.00 μg/ml。50、100和150 μg/ml芒柄花黄素处理后HL-60细胞在G0/G1期的百分比、细胞凋亡率和PTEN蛋白的表达水平均逐渐升高，而细胞在S期和G2/M期的百分比、miR-21的表达水平以及p-AKT蛋白的表达水平均逐渐降低，且与0 μg/ml相比，差异均有统计学意义（P<0.05），但HL-60细胞中AKT蛋白的表达水平与0 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:芒柄花黄素可抑制白血病HL-60细胞增殖并诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控miR-21/PTEN/AKT信号通路有关。     

WWOX基因对人急性淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究WWOX基因对人急性淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制。方法:体外培养CCRF-CRM细胞系,将WWOX基因转染入CCRF-CEM细胞,建立高表达WWOX的CCRF-CEM细胞,流式细胞仪法测定CCRF-CEM细胞的细胞周期和凋亡,Western blot法测定WWOX基因、细胞周期和凋亡相关因子的蛋白表达,qRT-PCR法测定caspase-3的mRNA表达。结果:与对照组和空白质粒组相比,转染入WWOX的CCRF-CEM细胞的WWOX蛋白表达显著增加,G0/G1期的细胞比例显著增加,凋亡细胞比例显著增加;CCRF-CEM细胞中cyclin D1、cyclin E、CDK2的蛋白表达显著降低而Wnt-5α和JNK的蛋白表达显著增加,caspase-3的mRNA表达促进CCRF-CEM细胞的凋亡。结论:WWOX基因在急性淋巴细胞性白血病CCRF-CEM细胞中发挥抑癌基因作用,可以有效促进细胞凋亡并抑制细胞周期进程。     

miR-26a抑制ST3GAL6基因介导mTOR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:探究miR-26a靶向调控ST3GAL6基因介导mTOR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法:构建肺癌小鼠模型,将小鼠分为正常组和模型组;免疫组化检测ST3GAL6在肺组织中的表达情况,qRT-PCR法检测miR-26a在组织中的表达;细胞分为空白组、阴性对照组、miR-26a mimic组、miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组、miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组和miR-26a mimic+RAD001（mTOR抑制剂）组;qRT-PCR法检测细胞中miR-26a和ST3GAL6 mRNA的表达情况;MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况;Western blot法测定各组细胞ST3GAL6、p-mTOR、Akt蛋白相对表达量。结果:miR-26a和ST3GAL6在肺癌小鼠肺癌组织中均高表达（均P<0.05）。与空白组相比,miR-26a mimic组ST3GAL6 mRNA及蛋白表达上升,Akt、p-mTOR蛋白表达上升,细胞增殖率上升、凋亡率下降（均P<0.05）;而miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组ST3GAL6 mRNA及蛋白表达下调,Akt、p-mTOR蛋白表达下降,细胞增殖率下降、凋亡率上升（均P<0.05）。同时,miR-26a表达在miR-26a mimic组和miR-26a mimic+RAD001组中上升,miR-26a inhibitor组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组中下降（均P<0.05）。结论:miR-26a下调ST3GAL6基因,抑制mTOR信号通路活化,抑制肺癌细胞增殖及促进细胞的凋亡。     

硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

黄芩苷通过Notch通路对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄芩苷能否通过抑制人结肠癌SW480细胞中Notch通路的表达而抑制其增殖并促进其凋亡。方法:MTT法及流式检测术分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长抑制及凋亡的影响；Western Blot法及RT-PCR法分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞Notch1、Hes-1蛋白和Jagged1基因表达的影响。结果:随着药物剂量的增大，黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制率逐步上升；黄芩苷20 μmol/L组细胞凋亡率显著高于对照组；黄芩苷40 μmol/L组细胞凋亡率显著高于黄芩苷20 μmol/L组；黄芩苷20 μmol/L组细胞Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于对照组，黄芩苷40 μmol/L组Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于黄芩苷20 μmol/L组。结论:黄芩苷能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖，促进其凋亡，这种作用可能是通过对细胞中Notch通路的负性调节而实现的。     

PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为两组:pcDNA3.0组与pcDNA3.0-PTEN组,分别转染pcDNA3.0质粒、pcDNA3.0-PTEN质粒2 μg,转染48 h收集细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,双染法检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞蛋白表达。结果:pcDNA3.0-PTEN组的细胞存活率低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。与pcDNA3.0组对比,pcDNA3.0-PTEN组的细胞凋亡率显著上升,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。pcDNA3.0-PTEN组的PTEN蛋白表达量高于pcDNA3.0组,Akt、mTOR蛋白表达量低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:PTEN基因过表达可通过抑制Akt-mTOR信号通路,提高乳腺癌细胞凋亡指数,降低细胞增殖活性,从而发挥抑癌作用。     

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、 凋亡和自噬

目的：探讨异莲心碱（Iso）通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法：用 10、20和40 μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关 蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20 μmol/L的Iso和25 μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细 胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、 p62、PI3K、p-PI3K、 mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果：10、20和40 μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下 降（均P<0.05）,细胞凋亡率均显著升高（均P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调（均P<0.05）,p26蛋白表达显著下调（P<0.05）。 Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降（均P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著升高（均 P<0.05）;Iso 组 细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（均 P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著下降（均 P<0.05）;与 740 Y-P 组相比,Iso+740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（P<0.05）, p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降（均P<0.05）;与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下 降（均P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高（均P<0.05）。结论：Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路 抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。