nm23-H1和E-Cadherin基因蛋白在胆囊癌组织中的表达

目的：探讨nm23-H1和E－cadherin(E-Cad)基因蛋白在胆囊癌组织中的表达与组织类型，病理分级和转移的关系。及nm23-H1和E－Cad基因蛋白表达的相关性。方法：应用催化信号放大系统免疫组化方法，检测52例胆囊腺癌，20例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中nm23-H1和E－Cad表达水平。结果：在胆囊癌中nm23-H1和E－Cad阳性表达率分别为51．9％和42．3％，均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎（P＜0．05），nm23-H1和E－Cad表达与胆囊癌的组织类型，病理分级和转移密切相关（P＜0．05），两基因蛋白表达在胆囊癌组织中呈正相关（P＜0．05），结论：nm23-H1和E－Cad基因与胆囊癌的转移密切相关，对临床判断胆囊癌预后有一定指导意义。     

吲哚胺2,3双加氧酶和叉状头转录因子3对胆囊癌免疫耐受的作用及影响

目的 研究吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)、叉状头转录因子3(FOXP3)在原发性胆囊腺癌中的表达情况,探讨其对胆囊癌细胞免疫耐受的作用及影响.方法 采用免疫组化SP法检测51例原发性胆囊腺癌组织、90例慢性胆囊炎组织和20例正常胆囊组织中IDO和FOXP3的表达情况.结果 IDO和FOXP3在胆囊癌组织的阳性率分别为72.5％(37/51)和60.8％(31/51);在正常对照组胆囊黏膜阳性表达率分别为5.0％(1/20)和20.0％(4/20);在胆囊炎及胆囊结石分别为11.1％(10/90)和32.2％(29/90).三组间IDO和FOXP3阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.01).IDO在单纯增生、不典型增生、胆囊癌Ⅰ～Ⅲ期和胆囊癌Ⅳ～Ⅴ期的阳性表达率分别为7.1％、17.7％、40.0％和77.4％,FOXP3的阳性表达率分别为14.3％、35.3％、35％和64.5％,IDO和FOXP3在单纯增生、不典型增生、胆囊癌Ⅰ～Ⅲ期和胆囊癌Ⅳ～Ⅴ期的阳性率差异均有统计学意义(IDO:x2=50.75,P＜0.01；FOXP3:x2=22.79,P＜0.01).胆囊癌在Nevin不同分期、有无淋巴结或远处转移、有无并发结石组间的IDO和FOXP3的阳性率表达差异均有统计学意义(P值均＜0.05),而不同性别、年龄、组织学分化程度间IDO和FOXP3的阳性率表达差异均无统计学意义(P均＞0.05).胆囊癌组织中IDO阳性表达率(69.8％)与FOXP3阳性表达率(58.1％)显著正相关(γ=0.406,P=0.003).结论 原发性胆囊癌组织中IDO的高表达,以及间质淋巴细胞FOXP3的表达与胆囊癌的免疫耐受密切相关.IDO可能为胆囊癌免疫治疗的新靶点.     

环氧合酶-2在原发性胆囊癌中的表达及临床意义

目的：研究环氧合酶—2基因(COX—2)在原发性胆囊癌中的表达及其意义，探讨COX—2与原发性胆囊癌发生与发展的关系，为原发性胆囊癌的防治提供实验依据。方法：应用免疫组织化学SABC法检测39例原发性胆囊癌、11例胆囊腺瘤和16例慢性胆囊炎组织中COX—2蛋白的表达情况，并结合临床病理指标进行分析。结果：COX—2在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织中的阳性表达率分别为82％(32/39)、36％(4／11)和25％(4／16)，其差异有显著性(P＜0．05)；原发性胆囊癌组织中COX—2的表达在Nevin分期晚期病例比早期高(P＜0．05)，有转移者明显高于无转移者(P＜0．05)。结论：COX—2在原发性胆囊癌组织中为诱导性表达，其表达上调与原发性胆囊癌的形成关系密勿，并与肿瘤Nevin分期及是否有转移相关，提示COX—2在原发性胆囊癌的发生、发展中可能起一定作用。     

环氧化酶-2与血管内皮生长因子-C在胆囊腺瘤和胆囊腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胆囊良恶性病变组织中环氧合酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学法检测44例胆囊腺癌、10例胆囊腺瘤组织中COX-2与VEGF-C的表达.结果 胆囊腺癌和胆囊腺瘤组织中COX-2表达阳性率分别为72.7％和40.0％,胆囊腺癌COX-2的表达率明显高于胆囊腺瘤(P＜0.05).VEGF-C在胆囊腺癌组织中的表达明显高于胆囊腺瘤(63.6％比20.0％,P＜0.05).COX-2与VEGF-C的表达与胆囊腺癌的Nevin分期和淋巴结转移相关.COX-2与VEGF-C表达显著相关.结论 COX-2与VEGF-C表达与胆囊腺癌的发生和生物学行为密切相关.     

MUC1、MUC3在结石性胆囊炎和胆囊腺瘤样息肉粘膜组织中的表达及其意义

目的　探讨粘蛋白 (MUC1,MUC3 )在结石性胆囊炎和胆囊腺瘤样息肉中的表达规律。方法　采用免疫组化AEC法和蛋白印迹杂交 (Westernblot)方法对 2 0例正常胆囊标本 (对照组 ) ,3 8例结石性胆囊炎 (结石组 )及 18例胆囊腺瘤样息肉 (息肉组 )的胆囊粘膜中MUC1、MUC3的表达进行检测。结果　免疫组化检测与蛋白印迹杂交分析结果均显示 ,结石组及息肉组MUC1的表达阳性率明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,而MUC3的表达阳性率则明显低于对照组(P<0 .0 1) ;结石组MUC3的表达阳性率又明显高于息肉组 (P<0 .0 1)。结论　MUC1和MUC3在结石性胆囊炎及胆囊腺瘤样息肉中的表达呈负相关 ,这可能与结石形成及胆囊癌前病变有关。     

PCNA与Caspase-3在胆囊癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在胆囊癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化检测42例胆囊癌组织和10例慢性胆囊炎组织石蜡切片中PCNA和Caspase-3的表达水平,并分析与临床病理特征之间的关系.结果 (1)PCNA的阳性表达率在胆囊癌及慢性胆囊炎组分别为64.29%和30‰两组间差异有显著性(P<0.05);Caspase-3在胆囊癌及慢性胆囊炎组分别为30.95%和70%,两组间差异有显著性(P<0.05).(2)胆囊癌组织中,PCNA和Caspase-3表达水平在性别、年龄方面差异无统计学意义(P>0.05),但与淋巴结转移、癌组织分化程度及病理TNM分期有关(P<0.05).(3)PCNA和Caspase-3的表达呈负相关(rs=-0.62,P<0.01).结论 PCNA和Caspase-3的表达在胆囊癌组织中呈负相关,且两者表达水平与胆囊癌淋巴结转移、癌组织分化程度及病TNM分期有关,提示PCNA和Caspase-3是反映胆囊癌生物学行为的重要指标.     

胆囊癌中CD44v6和基质金属蛋白酶-2的表达及其临床意义

目的: 探讨胆囊癌中粘附分子CD44v6、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达及临床意义,以及二者之间的关系. 方法: 采用免疫组织化学方法检测42例胆囊癌、10例慢性结石性胆囊炎组织中CD44v6和MMP-2的表达. 结果: ①CD44v6阳性表达率在胆囊癌组为64.3%(27/42),明显高于慢性结石性胆囊炎组(0/10)(P<0.005);CD44v6表达与胆囊癌的组织类型、病理分级以及转移相关(P<0.05);CD44v6阳性的胆囊癌病人预后较差.②MMP-2在胆囊癌组织中表达率为61.9%,明显高于慢性结石性胆囊炎组(10%,P<0.005);MMP-2的表达与胆囊癌细胞的分化、转移和预后有关(P<0.05),与组织类型无关.③CD44v6和MMP-2在胆囊癌组织中表达呈正相关(P<0.005). 结论: CD44v6和MMP-2的表达与胆囊癌分化、转移、预后有关,在胆囊癌细胞的侵袭和转移中起重要作用.联合检测有利于评估胆囊癌的生物学行为和判断预后.     

CD44v6在胆囊癌中的表达及其意义

目的探讨CD44v6与胆囊癌发生及胆囊癌恶性生物学行为的关系.方法应用免疫组织化学法研究CD44v6在29例胆囊癌、16例胆囊腺瘤及8例正常胆囊组织中的表达.结果 CD44v6在正常胆囊组强保未见表达,胆囊癌与胆囊腺瘤中的表达率分别为62.1%和19%,CD44v6的表达与胆囊癌淋巴结转移相关(P＜0.05),未分化及低分化胆囊癌CD44v6的表达率显著高于高分化胆囊癌(P＜0.05).结论 CD44v6参与胆囊癌的发生、发展.     

胆囊良恶性病变组织中ABCG2、SFRP2、BRMS1和HPA的表达及临床病理意义

目的 研究胆囊良恶性病变组织中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2 (ABCG2),分泌型Frizzled相关蛋白2(SFRP2),乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)和乙酰肝素酶(HPA)的表达水平及其临床病理意义。方法 将108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,ABCG2、SFRP2、BRMSl和HPA染色方法均为EnVision免疫组化法。结果 胆囊腺癌ABCG2和HPA表达阳性率明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎(P＜0.05或P＜0.01);胆囊腺癌SFRP2和BRMS1表达阳性率明显低于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎（P＜0.05或P＜0.01）;ABCG2和（或）HPA表达阳性及BRMS1和（或）SFRP2表达阴性的良性病例胆囊上皮均呈中至重度不典型增生。高分化腺癌、无淋巴结转移及未侵犯周围组织器官病例,ABCG2和HPA表达阳性率明显低于低分化腺癌、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P＜0.05或P＜0.01),但SFRP2和BRMS1表达则相反（P＜0.05或P＜0.01）。经Kaplan-Meier生存分析发现,ABCG2和HPA表达阳性病例术后生存期明显低于阴性表达病例(P=0.017,P=0.016),而SFRP2和BRMS1表达阳性病例术后生存期明显高于阴性表达病例(P=0.019,P=0.008);Cox多变量回归分析显示,ABCG2和（或）HPA阳性表达以及SFRP2和（或）BRMS1阴性表达均为危险因素,是反映胆囊腺癌预后不良的重要指标。结论 ABCG2、SFRP2、BRMS1和HPA表达与胆囊腺痛发生、临床生物学行为及预后有密切关系,ABCG2和（或）HPA阳性表达者及SFRP2和（或）BRMS1阴性表达者预后不良。     

原发性胆囊癌CD44v6、Survivin的表达与临床病理的相关性

目的 探讨CD44v6和Survivin蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系,以及CD44v6与Survivin表达之间的相关性.方法 应用免疫组化方法检测52例胆囊腺癌、20例胆囊腺瘤和20例慢性胆囊炎组织中CD44v6和Survivin表达水平.结果 胆囊癌组织中CD44v6和Survivin阳性表达率分别为80.8%(42/52)和67.3%(35/52),均明显高于胆囊腺瘤(分别为45.0%和30.0%,P<0.05),并随着胆囊癌的分化程度减低、病理分级增高和转移而明显增高(P<0.05).同时,CD44v6表达与Survivin表达呈明显正相关(X2=5.19,P<0.05).结论 CD44v6和Survivin均是胆囊癌高度恶化和预后不良的重要指标.胆囊癌CD44v6表达与Survivin表达可能具有协同作用.     

CathePsin K基因慢病毒质粒载体的构建

目的 构建Cathepsin K(CTSK)基因慢病毒表达质粒,为进一步研究Cathepsin K在人软骨细胞体外老化过程中的作用奠定基础.方法 采用RT-PCR技术扩增Cathepsin K基因的蛋白翻译区,通过连接、转化等分子生物学技术,将该基因克隆至慢病毒pLenti6-V5载体上,经BamH I、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序.结果 从软骨细胞中成功地克隆出990bp的Cathepsin K基因,并经酶切分析得到6.964Kb和1.005Kb大小的两片断,测序结果显示接头两端序列正确.结论 通过基因克隆方法成功构建了Cathepsin K基因表达质粒,可用于进一步的病毒包装,为深入研究该基因对软骨细胞老化的影响奠定了基础.     

Cathepsin D: Ultra-immunohistochemical localization in dentinogenesis

Summary Cathepsin D was purified from rat liver using a new affinity chromatographic method, based on the coupling to the specific inhibitor pepstatin. This preparation was used for the production of specific antibodies from rabbit. The purified IgG fraction was conjugated to horseradish peroxidase in a two-step coupling procedure and used for electron microscopic immunohistochemistry of the odontoblast-predentine region of the rat incisor. Precipitates, indicating the presence of cathepsin D, were seen in the odontoblast, odontoblast process, and in the extracellular unmineralized matrix, the predentine. The observations are discussed in relation to proteoglycan degradation at the mineralization front simultaneous with crystal formation, and in relation to the function of lysosomal enzymes in the turnover of connective tissue.     

Expression of Cathepsin B and Cystatin C in Human Breast Cancer

Cathepsin B, which was originally found to be a lysosomal cysteine protease, is also an important matrix protease. In this study, we investigated the expression of cathepsin B and cystatin C, the strongest inhibitor of cathepsin B, and measured the relative amounts of each in human breast cancer tissues. Cystatin C expression relative to cathepsin B expression was found to be decreased. This finding could be associated with the looseness of cancerous interstitial tissue, which might play a role in cancer invasion and metastasis. This report documents the first simultaneous investigation of cathepsin B and cystatin C in breast cancer tissues. Received: February 23, 2000 / Accepted: November 20, 2000     

Cathepsin K基因抑制后对软骨细胞功能的影响研究

目的研究应用RNA干扰技术早期抑制人CathepsinK（CTSK）基因的表达对延缓软骨细胞的去分化过程及维持软骨细胞表型的影响。方法pGCsilencer TMH1／Nco／GFP／CTsKRNAi质粒体外转染人软骨细胞,并用G418筛选3周．再通过RT—PCR检测CTSK、Ⅱ型胶原和AggrecancDNA转录的表达,Western-Blot、免疫荧光检测转染后软骨细胞的CTSK、Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平的表达。结果装入质粒载体转染第1代的软骨细胞,在体外通过细胞形态观察可发现,抑制CTSK基因后3周软骨细胞仍大多数保持多角形,而对照组则向成纤维样细胞形态变化。RT—PCR结果显示,在mRNA水平抑制了CTSK的表达,而不影响对软骨细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA表达。免疫荧光和Wesfem—blot的结果证实了在早期抑制了软骨细胞CTSK基因表达并维持3周左右。软骨细胞的特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平明显增加。结论早期抑制了软骨细胞CTSK基因的表达,可使软骨细胞去分化过程中其软骨特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan增加,说明可以维持软骨细胞的表型。     

组织蛋白酶D在甲状腺乳头状腺癌中的表达及临床意义

目的:研究组织蛋白酶D在甲状腺乳头状腺癌中的表达并探讨其能否成为甲状腺乳头状腺癌独立的预后因素。方法:应用免疫组化方法,对40例甲状腺乳头状腺癌、10例甲状腺滤泡型腺瘤及10例甲状腺正常组织进行了组织蛋白酶D表达的研究,并对可能影响甲状腺癌病人预后的有关因素进行了时序检验单因素生存分析。结果:19例(47.5％)甲状腺乳头状腺癌的组织蛋白酶D表达阳性,而甲状腺滤泡型腺瘤及正常组织的表达均为阴性,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤大于4cm及有腺外侵犯者的甲状腺癌组织蛋白酶D阳性表达率(69.23％)明显高于肿瘤小于4cm及无腺外侵犯者(37.04％)(P<0.05)。经时序检验,组织蛋白酶D与甲状腺癌病人的预后并未表现出明显的相关关系。但组织蛋白酶D表达阳性病人的术后复发率为26.3％,表达阴性者复发率为14.3％,有一定的差异。结论:组织蛋白酶D在甲状腺乳头状腺癌中有一定的阳性表达率;当肿瘤大于4cm时,发生转移和侵袭的可能性明显增加,组织蛋白酶D表达阳性者其复发率有升高趋势。     

Cathepsin B and cysteine protease inhibitors in human osteoarthritis

The aim of this study was to determine the involvement of cathepsin B and its inhibitors in the proteolytic degradation of human osteoarthritic (OA) tissue. The characteristics of the cathepsin B found in both normal and OA cartilage and synovium were similar to those of the lysosomal cathepsin B. Two inhibitors of cysteine proteases were found with a molecular weight of 67,000 and 16,000 Da. The cartilage cathepsin B level of OA specimens (54.8 +/- 7.3 units/micrograms of DNA) was greater than the controls (39.8 +/- 3.2 units/micrograms of DNA). Mild-moderate graded samples (78.1 +/- 12.0 units/micrograms of DNA) had significantly higher levels of enzyme activity than the severely graded ones (31.4 +/- 3.9 units/micrograms of DNA, p less than 0.001) and controls (p less than 0.01). Compared to controls (2.3 +/- 0.4 units/mg of tissue w.w.), cysteine protease inhibitory activity in OA cartilage was decreased in specimens with severe lesions (1.5 +/- 0.2 units/mg of tissue). This was particularly noted in patients who had not received steroid injections (1.2 +/- 0.3 units/mg of tissue, p less than 0.05). In OA synovia, the cathepsin B level was greater (40.7 +/- 7.4 units/mg of tissue w.w., p less than 0.02) than in the controls (13.6 +/- 3.7 units/mg of tissue). The cysteine protease inhibitory activity was similar in OA synovium (1.7 +/- 0.2 units/mg of tissue w.w.) and in controls (1.5 +/- 0.3 units/mg of tissue). This data demonstrated an imbalance between the levels of cathepsin B and cysteine protease inhibitors in OA tissue. A decrease of specific inhibitors could be an important contributing factor, particularly in more severe lesions.     

Pharmacological Inhibition of Cathepsin S Suppresses Abdominal Aortic Aneurysm in Mice

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RNA干扰沉默Cathepsin L基因表达对肝癌细胞生物学特性影响的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术沉默Cathepsin L基因对肝癌细胞生物学特性的影响.方法 实验组为肝癌细胞CathepsinL siRNA转染基因沉默组(沉默组),实验对照为肝癌细胞空白对照组(空白组)和siRNA转染荧光蛋白对照组(荧光对照组).观察时间为Cathepsin L siRNA转染后1、3和6 d.观察各组肝癌细胞Cathepsin L siRNA转染效率.用免疫荧光、RT-PCR法及WB法检测肝癌细胞Cathepsin L表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,侵袭小室法测定肝癌细胞侵袭力变化.结果 沉默组与空白组、荧光对照组比较,Cathepsin L mRNA水平和蛋白水平显著下降,细胞生长受抑制,增殖指数显著下降,细胞凋亡率显著增加,肝癌细胞侵袭力显著下降.结论 RNAi可有效沉默肝癌细胞Cathepsin L表达,降低肝癌细胞增殖活力及细胞侵袭力.     

Cathepsin K deficiency in pycnodysostosis results in accumulation of non-digested phagocytosed collagen in fibroblasts

The rare osteosclerotic disease, pycnodysostosis, is characterized by decreased osteoclastic bone collagen degradation due to the absence of active cathepsin K. Although this enzyme is primarily expressed by osteoclasts, there is increasing evidence that it may also be present in other cells, including fibroblasts. Since fibroblasts are known to degrade collagen intracellularly following phagocytosis, we analyzed various soft connective tissues (periosteum, perichondrium, tendon, and synovial membrane) from a 13-week-old human fetus with pycnodysostosis for changes in this collagen digestion pathway. In addition, the same tissues from cathepsin K-deficient and control mice were analyzed. Microscopic examination of the human fetal tissues showed that cross-banded collagen fibrils had accumulated in lysosomal vacuoles of fibroblasts. Morphometric analysis of periosteal fibroblasts revealed that the volume density of collagen-containing vacuoles was 18 times higher than in fibroblasts of control patients. A similar accumulation was seen in periosteal fibroblasts of three children with pycnodysostosis. In contrast to the findings in humans, an accumulation of internalized collagen was not apparent in fibroblasts of mice with cathepsin K deficiency. Our observations indicate that the intracellular digestion of phagocytosed collagen by fibroblasts is inhibited in humans with pycnodysostosis, but probably not in the mouse model mimicking this disease. The data strongly suggest that cathepsin K is a crucial protease for this process in human fibroblasts. Murine fibroblasts may have other proteolytic activities that are expressed constitutively or up regulated in response to a deficiency of cathepsin K. This may explain why cathepsin K-deficient mice lack the dysostotic features that are prominent in patients with pycnodysostosis.     

反义表达人组织蛋白酶L对骨肉瘤细胞侵袭特性的影响

目的: 构建人组织蛋白酶L (cathepsinL, CATL) 基因的正、反义真核表达载体, 观察其转染后对人骨肉瘤细胞MG-63侵袭特性的影响。方法: 用基因重组技术构建人组织蛋白酶L正、反义真核表达载体, 转染人骨肉瘤细胞MG-63, RT-PCR和Westernblot检测CATL的mRNA和蛋白质的表达水平, 并对转染前后骨肉瘤细胞的侵袭能力进行检测。结果: 正、反义真核表达载体成功构建并转染入MG-63细胞中。反义载体转染后的细胞CATL的mRNA和蛋白质的表达水平下降, 体外侵袭实验表明细胞的侵袭力下降。结论: 反义CATL基因的转染使骨肉瘤细胞CATL的分泌水平下降, 细胞的体外侵袭力下降。