构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs 去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs 去细胞同种异体神经支架;C组:自体BMSCs PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学、神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、C三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源SCs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。     

种植脂肪干细胞的去细胞神经修复坐骨神经缺损的实验研究

目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)应用于组织工程化外周神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只体重200～220 g的雌性F344大鼠随机分成6组,每组8只,分别用下面6种不同的实验组修复15 mm长坐骨神经缺损.A组:种植ADSCs的去细胞神经;B组:种植诱导ADSCs的去细胞神经;C组:种植许旺细胞(SCs)的去细胞神经;D组:去细胞神经;E组:自体神经移植;F组:空白对照.通过神经电生理检测、荧光金逆行示踪、组织学检测和坐骨神经功能指数测定评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后12周,F组未见桥接物,A组和B组的神经电生理等各项指标均分别优于D组(P＜0.05或P＜0.01),与C组和E组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 初步结果显示ADSCs及诱导后ADSCs作为种子细胞,与去细胞神经构建的组织工程化外周神经移植体,能够修复外周神经缺损.     

冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究

目的研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法50只成年雌性DA大鼠随机分为5组，每组10只，分别用5种移植物桥接大鼠1．5cm坐骨神经缺损。A组：冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组；B组：冻干去细胞异体神经移植组；C组：去细胞异体神经移植组；D组：新鲜异体神经移植组；E组：自体神经移植组。术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果术后24周A、E组间差异无统计学意义（P〉0．05），A、E组的各项指标均优于B、C、D组（P〈0．05或P〈0．01）。结论冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料。     

辐照和绿茶多酚处理同种异体神经移植体的实验研究

[目的]比较经绿茶多酚溶液及辐照预处理的同种异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.[方法] 48只成年雄性Wista大鼠,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm处切除1.0 cm,随机分为4组,每组12只,神经缺损分别用4种移植物桥接.A组:自体神经移植;B组:新鲜异体神经移植;C组:经辐照处理的异体神经移植;D组:绿茶多酚溶液保存的异体神经移植.术后6、12周通过大体、电生理学、组织学、透射电镜观察评价各组修复神经缺损的效果.[结果]A、D组间差异无统计学意义,A、D组的各项指标均优于B、C组.[结论]大鼠坐骨神经缺损模型中,绿茶多酚溶液保存的同种异体神经是良好的神经移植替代材料,移植后神经再生情况优于辐照预处理的异体神经.     

组织工程神经修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的观察组织工程神经修复SD大鼠1．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法用甘油处理10只SD大鼠2．0cm长坐骨神经，制备成同种异体脱细胞基质，备用。取SD乳鼠10只，分离坐骨神经，去神经外膜后，剪成小碎块，在DMEM中培养3周，扩增后的细胞鉴定、备用。3个月龄的SD雌性大鼠40只，单纯随机分成4个神经移植组（A、B、C、D），每组10只。A组：用扩增的雪旺细胞加同种异体脱细胞基质桥接，即组织工程化人工神经组。B组：用元雪旺细胞但具有内部支架结构的同种异体脱细胞基质桥接。C组：自体神经移植组。D组；空白对照组。术后12周，进行一般情况、小腿三头肌湿重、再生神经的组织学观察。结果完成对40只大鼠（每组10只）的实验评估。所有大鼠伤口瑚愈合，元死亡。A、B、C组大鼠足部元溃疡形成，D组7只足部有溃疡形成，所有组实验侧小腿三头肌较健侧萎缩，但以D组最明显。小腿三头肌湿重、神经电生理监测A组、C组差异无统计学意义（P〉O．05），A、C组与B、D组差异有统计学意义（P〈O．05），B组与D组差异有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP），B组、D组中则仅录到波幅很低的CMAP。A组和C组再生轴突已通过移植段神经全长，远端肌肉轻度萎缩。B组部分通过移植段神经；D组不能通过移植段神经，6例形成神经瘤。结论组织工程人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

猕猴组织工程化周围神经移植物的实验研究

目的 评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40mm尺神经缺损的效果。方法 共使用成年猕猴9只，随机取其中的6只，培养自体雪旺细胞，应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组，空白组，正常对照组3组。术后5个月通过形态学，肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果 3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成，猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期．最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40mm的尺神经缺损，可取得与自体神经移植相似的效果。     

去细胞异种神经复合骨髓基质干细胞修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨去细胞异种神经(acellular xenogeneic nerve,AXN)复合骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)修复周围神经缺损的效果.方法 体外培养大鼠BMSCs;取雌性Wistar大鼠60只,随机分为3组,每组20只,建立右坐骨神经10 mm缺损修复模型.A组:BMSCs与AXN复合修复神经缺损;B组:单纯AXN修复神经缺损;C组:自体神经移植组.术后4、12周依次进行干细胞的转归、移植免疫、神经电生理检测、新生神经组织学观察和小腿三头肌肌纤维横径等检测,判断坐骨神经功能恢复情况.结果 术后移植物内均可见细胞生长,A、C组细胞数目较多,排列整齐,只有A组S-100免疫组化染色阳性细胞内可见BrdU阳性表达,术后12周再生神经已通过远端缝合口.A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组(P＜0.05),A组与C组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs作为种子细胞可以在体内存活,并可分化为SCs,其与AXN复合构建组织工程神经修复神经缺损的效果接近于自体神经移植.     

犬化学去细胞神经同种异体移植的早期观察

目的：以化学去细胞同种异体神经，移植修复犬粗大神经的长段缺损，观察早期功能恢复及神经再生。方法：去细胞神经移植组和自体神经移植组各3犬，分别桥接坐骨神经5.0cm缺损。术后3个月观察其运动功能及神经再生。结果：实验组和对照组在术后功能恢复；移植段内新生神经纤维、新生血管及许旺细胞；吻合口远端有髓神经纤维等方面非常相似。结论：化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其早期功能恢复及神经再生与自体神经移植无明显差别。     

硫酸软骨素酶处理的异体去细胞神经修复周围神经缺损的实验研究

目的 评价应用硫酸软骨素酶ABC降解硫酸软骨素蛋白多糖的去细胞异体神经修复神经缺损的效果.方法 经硫酸软骨素酶ABC处理后化学去细胞异体神经修复大鼠15 mm坐骨神经缺损为实验组(A组),对照组为未经酶处理的化学去细胞异体神经移植组(B组)和自体神经移植组(C组).术后8、12周进行痛觉刺激试验.术后12周进行肌电图检查,检测小腿三头肌湿重和有髓神经纤维密度,评价其修复周围神经缺损的效果.结果 术后8周,A组痛觉恢复率高于B、C组.术后12周A、C组痛觉均恢复,B组部分大鼠痛觉恢复.术后12周,A、C组小腿三头肌湿重差异无统计学意义,移植段神经5mm处有髓神经纤维密度A组高于C组,移植段神经10 mm处有髓神经纤维密度差异无统计学意义,移植段神经以远5 mm处胫神经平面有髓神经纤维密度A组略低于C组.肌电图动作电位波幅A组和C组无明显差别.神经传导速度A组低于C组.A、C组上述指标均优于B组.结论 经硫酸软骨素酶ABC处理的去细胞神经,有利于轴突进人生长,缩短靶器官神经重新支配时间,提高修复效果.     

去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损的免疫反应研究

目的观察去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损后的全身及局部免疫排斥反应,评价该修复材料的安全性。方法健康成年雄性长白猪1只,体重48 kg,取胫神经制备去细胞异种神经;健康成年雄性猕猴1只,体重4.5 kg,分离培养脂肪干细胞;健康成年雌性猕猴10只,体重3～5 kg,制备25 mm长桡神经缺损动物模型,随机分为复合细胞组和无细胞组(n=5),前者采用去细胞异种神经复合第3代脂肪干细胞移植修复,后者采用去细胞异种神经移植修复。于术前及术后14、60、90 d抽取外周静脉血行淋巴细胞分析;术后5个月取材观察移植物组织免疫反应和神经再生情况,并与自体神经移植组作比较。结果复合细胞组与无细胞组术前及术后各时间点外周静脉血淋巴细胞数量、T淋巴细胞百分率及其数量、CD8+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d,复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于其余时间点,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点两组间比较,除术后14 d复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于无细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后5个月,去细胞异种神经与周围组织有轻度粘连,神经外膜较自体神经厚,未见组织坏死、纤维瘢痕形成,移植物内见再生神经纤维,复合细胞组、无细胞组均有稀疏的CD3+、CD4+、CD8+、CD68+、CD163+T淋巴细胞散在分布,细胞浸润情况与自体神经移植组类似。结论去细胞异种神经移植修复猕猴周围神经缺损后未产生全身及局部免疫排斥反应;复合同种异体脂肪干细胞移植后也未发现免疫排斥反应,且术后早期可能抑制CD4+T淋巴细胞增殖。     

嗅鞘细胞与雪旺细胞修复神经缺损的效果比较

目的 比较雪旺细胞和嗅鞘细胞修复周围神经损伤的能力. 方法体外培养异体雪旺细胞及嗅鞘细胞2周后纯化浓缩待用.60只成年雌性Wistar鼠随机分成三组,坐骨神经切除25 mm长轴突,保留神经外膜吻合于近端,分别将细胞培养液、雪旺细胞、嗅鞘细胞分别植入A、B、C组神经外膜腔内,术后3个月,通过大体形态观察、显微镜及透射电镜观察、逆行标记荧光红的运输距离、免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白及神经生长因子、踝关节功能评分、酶联免疫方法检测髓鞘碱性蛋白及神经丝蛋白来评估神经缺损的修复效果. 结果神经缺损再生情况,肉眼观C组最完全,B组次之,而A组最差,光学显微镜及透射电镜观察神经纤维生长情况、荧光显微镜下观察逆行标记荧光红在神经中的运行距离,C组最长,B组次之,而A组最短;免疫荧光检测神经生长因子及胶质纤维酸性蛋白浓度、酶联免疫吸附实验检测髓鞘碱性蛋白及神经丝蛋白浓度均数、踝关节运动功能评分均数的结果都是C组最高,B组次之,而A组最低,三组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论嗅鞘细胞能促进神经缺损再生,且效果优于雪旺细胞.     

Malignant nerve sheath tumor containing endocrine cells

A malignant nerve sheath tumor occurred in the thigh of a 29-year-old man who had the stigmata of von Recklinghausen's neurofibromatosis. Chondroid foci, rhabdomyoblasts, and mucus-containing acini were identified in the tumor. Argyrophil cells and somatostatin-immunoreactive cells were present in acinar epithelium. Endocrine type granules were found in epithelial cells on ultrastructural examination. This is an example of a so-called "glandular schwannoma" and is unique in that it contained somatostatin-immunoreactive cells. A neural crest derivation is suggested for this complex tumor.     

微囊化雪旺细胞/神经组织移植促进周围神经再生的实验研究

目的:探讨免疫隔离技术应用在神经细胞/组织移植促进周围神经再生的可行性.方法:采用静电液滴法制备海藻酸钠/聚赖氨酸/海藻酸钠(alginate-polysien-alginate,APA)微胶囊,包埋分离自SD大鼠周围神经的雪旺细胞(SChwann cells,SCs)/神经组织;采用台盼蓝拒染法和ELISA法检测其培养后活性和分泌神经生长因子情况.制备坐骨神经横断损伤的SD大鼠模型,将微囊化SCs/神经组织移植到实验组坐骨神经吻合口处.结果:微囊化SCs/神经组织培养一定时间后,仍保持活力和分泌神经生长因子的功能;4周后实验组吻合口远端可见到再生的阳性纤维,明显大于对照组,瘢痕明显少于对照组;实验组再生的神经纤维和新生的微小血管远较对照组密集.结论:微囊化SCs/神经组织移植后在局部持续分泌神经生长因子,有促进周围神经修复的作用.     

Uncultured adipose-derived regenerative cells promote peripheral nerve regeneration

Background

We examined whether or not peripheral nerves can be regenerated using uncultured adipose-derived regenerative cells (ADRCs). We also searched for humoral factors that might promote the proliferation or migration of Schwann cells.

Methods

Thirty rats were randomly assigned to three groups. A 10 mm sciatic nerve defect was bridged using a silicon tube filled with physiological saline (control group), type I collagen gel (collagen group), and a mixture of ADRCs and type I collagen gel (ADRC group). The regenerated tissues were studied two weeks after surgery.

Results

Continuity of regenerated tissue was observed in all rats in the control group and the ADRC group. In the collagen group, only two rats had a bridge of thin tissue, which was barely visible macroscopically. Protein gene product 9.5 staining confirmed significantly faster regeneration in the ADRC group. The distributions of the PKH-26 positive areas and the S-100 protein positive areas were different, suggesting that the transplanted cells had not differentiated into Schwann cells. In real-time RT-PCR, neuregulin-1 (Neu-1) and vascular endothelial growth factor A (VEGFA) expression were detected in uncultured ADRCs before transplantation. The regenerated tissue in the ADRC group had higher levels of Neu-1 and VEGFA expression than the control group.

Conclusions

ADRCs promote peripheral nerve regeneration. The mechanism does not involve the differentiation of transplanted cells into Schwann cells, but probably involves the secretion of some type of humoral factor such as Neu-1 or VEGFA that promotes the proliferation or migration of Schwann cells.     

聚乳酸-聚羟基乙酸神经导管和骨髓间充质干细胞构建组织工程神经

[目的]用聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly lactide-co-glycolide acid,PLGA)为原料制备新型神经导管,同时对兔骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程神经的可行性进行观察.[方法]以聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物和壳寡糖为原料,采用静电纺丝工艺制备中空的PLGA神经导管.通过扫描电镜观察材料的微观结构,排水法测定材料的孔隙率.将兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养后与导管共培养,扫描电镜观察细胞在材料上的生长粘附情况,MTT方法检测细胞在材料上的增殖活性.[结果]PLGA神经导管管壁具有疏松多孔结构,管壁纤维直径为18 μm左右,孔隙率为85.4%±1.6%,MTT结果显示导管无细胞毒性.兔骨髓间充质干细胞在导管表面生长良好.[结论]PLGA神经导管具有良好的孔隙率,生物相容性好,是构建组织工程神经的良好材料.     

雪旺细胞移植与周围神经再生

广泛阅读近年来有关人工神经方面的文献，重点了解桥接神经的移植体和雪旺细胞移植方面的研究进展。自体材料，异体材料和合成材料均可作为桥接神经缺损的神经导管，以化学萃取的同种异体神经较为理想，雪旺细胞体外纯化和培养后仍具有生物活性，用微注入法把雪旺细胞植入移植物内可促进神经轴突的再生。理想的人工神经应由有特定的三维结构的生物材料和有生物活性的雪旺细胞构成，雪旺细胞在支架内有序的分布，类似于Bungner带。     

Repair of nerve defect with acellular nerve graft supplemented by bone marrow stromal cells in mice

The acellular nerve graft that can provide internal structure and extracellular matrix components of the nerve is an alternative for repair of peripheral nerve defects. However, results of the acellular nerve grafting for nerve repair still remain inconsistent. This study aimed to investigate if supplementing bone marrow mesenchymal stromal cells (MSCs) could improve the results of nerve repair with the acellular nerve graft in a 10-mm sciatic nerve defect model in mice. Eighteen mice were divided into three groups (n = 6 for each group) for nerve repairs with the nerve autograft, the acellular nerve graft, and the acellular nerve graft by supplemented with MSCs (5 × 10(5)) fibrin glue around the graft. The mouse static sciatic index was evaluated by walking-track testing every 2 weeks. The weight preservation of the triceps surae muscles and histomorphometric assessment of triceps surae muscles and repaired nerves were examined at week 8. The results showed that the nerve repair by the nerve autografting obtained the best functional recovery of limb. The nerve repair with the acellular nerve graft supplemented with MSCs achieved better functional recovery and higher axon number than that with the acellular nerve graft alone at week 8 postoperatively. The results indicated that supplementing MSCs might help to improve nerve regeneration and functional recovery in repair of the nerve defect with the acellular nerve graft.     

植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经修复上肢神经缺损

目的 研究修复上肢神经缺损新的手术方法。方法 应用植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经复合型神经桥接体，修复上肢神经缺损46例（52条），术后1年进行神经功能评定。结果 本组46例随访40例，随访时间12－36个月，接Seddon的周围神经损伤术后恢复评定标准进行评定，优良率为69．57％。植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经复合型神经桥接体移植，是一种修复上肢神经缺损的新方法，具有进一步深入研究和临床应用的前景。     

Safe injection of cultured schwann cells into peripheral nerve allografts

The effects of cultured host Schwann cells on axonal regeneration in peripheral nerve allografts were studied. Fischer rats served as recipient animals and Buffalo rats provided nerve allografts. Animals were randomized into 9 groups. Rats receiving tibial nerve isografts were left untreated (group I), or injected with isogeneic Fischer Schwann cells (group II) or placebo suspension (group III). Allografts obtained from Buffalo rats were left untreated (group IV), or received isogeneic Fischer Schwann cells (group V), 2 mg/kg Cyclosporin A and Fischer Schwann cells (group VI), 5 mg/kg Cyclosporin A (group VII), or 5 mg/kg Cyclosporin A with Schwann cells (group VIII). No Schwann cell tumors were identified 4 or 8 weeks postoperatively. Group IX animals, harvested 3 days postoperatively, demonstrated no evidence of injection injury. Schwann cells modestly improved axonal regeneration in both isografts and allografts and may have a clinical role in the treatment of peripheral nerve allografts.