庆大霉素重组合异种骨复合体防治开放性骨折骨缺损感染的实验研究

目的 研制庆大霉素重组合异种骨复合体（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ－ｒｅｃｏｎｓｔｉｕｔｅｄ ｂｏｎｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ－ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ,Ｇ－ＲＢＸ－Ｃ）,为临床防治开放性骨折骨缺损感染提供理论依据。方法 采用具有高效骨诱导及骨肟导能力的重组合民种骨作为载体,复合庆大霉素制备庆大霉素后组合异种骨复合体,并对其体内药物释放特性、异位诱导成骨能力及骨缺损修复能力进行了研究。结果 体内药物释放试验显示：Ｇ     

庆大霉素重组合异种骨复合体修复兔桡骨节段性骨缺损的研究

观察庆大霉素重组合异种骨复合体（Ｇ－ＲＢＸ－Ｃ）修复兔桡骨节段性骨缺损的能力。方法采用兔桡骨干１５ｍｍ节段性骨缺损不愈合模型评价Ｇ－ＲＢＸ－Ｃ的骨缺损修复能力。结果植入Ｇ－ＲＢＸ－Ｃ术后４周,纤维组织长入,诱导形成多个新生软骨、骨岛;术后８周,新骨大量形成;术后１６周,初步形成正常骨干结构,骨皮质连续,骨髓腔再通。结论Ｇ－ＲＢＸ－Ｃ具有良好的骨缺损修复能力,有望成为临床开放性骨折合并骨缺损一期植骨治疗的较理想骨移植材料。     

庆大霉素重组合异种骨复合体的制备及相关研究

目的探讨局部应用抗生素与骨移植结合,以改进感染性骨不连、骨缺损的治疗. 方法用高效液相色谱法(HPLC)在不同时间内测定植入不同含量庆大霉素重组合异种骨(G-RBX)后小鼠肌袋内庆大霉素浓度,并在污染的兔桡骨骨缺损模型中观察其抗感染与骨修复功能. 结果明胶包裹4 mg庆大霉素的G-RBX具有良好的药物缓释功能,在植入部位周围软组织中维持有效浓度可达17天,提高明胶浓度能进一步延缓药物释放度;G-RBX植入3×107 CFU金葡菌污染的兔桡骨干1.5cm骨缺损模型可有效抑制感染,16周后获得完全骨连接. 结论庆大霉素重组合异种骨是一种既有抗感染能力又有较高成骨活性的新型骨移植材料.     

抗感染重组合异种骨对犬污染性桡骨缺损的一期植骨修复作用

目的探讨抗感染重组合异种骨(anti-infective reconstituted bone xenograft,ARBX)对犬污染性桡骨缺损的一期植骨修复的效果. 方法在重组合异种骨(reconstituted bone xenograft,RBX)基础上,结合抗生素局部缓释技术,制备具有较强抗感染能力和较高成骨作用的ARBX.取成年杂种犬8只,于双侧桡骨中上段制成15 mm节段性骨缺损,在缺损处注入5×106 CFU/ml金黄色葡萄球菌1 ml,静置15分钟后,于双侧缺损区分别植入ARBX、RBX,并用钢板固定.术后6个月对存活的6只犬进行取材,通过解剖学、X线片、组织学及细菌学检查,比较ARBX和RBX一期植骨修复犬污染性桡骨缺损的效果. 结果术后6个月,ARBX侧有5只完全修复,1只中央部3 mm缺损未修复,均无骨髓炎表现,标本细菌培养均为阴性.RBX侧有1只部分修复,5只未能修复,残留8～13 mm缺损,均有明显骨髓炎表现,标本细菌培养均为阳性. 结论 ARBX具有较高成骨活性和较强的抗菌能力,能够一期植骨修复细菌污染性骨缺损.     

庆大霉素重组合异种骨复合体的制备及相关研究

目的研制既有抗感染能力又有较高成骨活性的新型骨移植材料。方法用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定庆大霉素重组合异种骨（ＧＲＢＸ）在小鼠肌袋内药物释放度,并在污染的兔桡骨骨缺损模型中观察其抗感染与骨修复功能。结果明胶包裹４ｍｇ庆大霉素的ＧＲＢＸ具有良好的药物缓释功能,在植入部位周围软组织中维持有效浓度可达１７天,提高明胶浓度能进一步延缓药物释放度。ＧＲＢＸ植入３×１０７ＣＦＵ金葡菌污染的兔桡骨干１．５ｃｍ骨缺损模型可有效抑制感染,１６周后获得完全骨连接。结论局部应用抗生素与骨移植相结合有可能改进开放性骨损伤及感染后骨不连骨缺损的治疗。     

块形重组合异种骨修复犬桡骨骨缺损

为使异种骨种移植应用于骨干节段性骨缺损治疗。作者将经去抗原处理的牛松质骨骨块与牛骨形态发生蛋白复合形成块形重组合异种骨，通过犬桡骨干中上段２０ｍｍ，骨－骨膜缺损修复模型，综合评价ＭＲＢＸ修复大型动物长骨节段性骨缺损的能力。方法：６只成年犬左侧桡骨节段性骨骨膜缺损处理ＭＲＢＸ，右侧不做修复，为空白对照。     

带血供骨膜包裹骨形态发生蛋白联合修复四肢骨缺损的实验研究

目的 探讨带血供骨膜包裹含骨形态发生蛋白(BMP)重组合异种骨RBX联合修复四肢骨缺损的效果。方法 将牛骨形态发生蛋白(bBMF)与去抗原牛松质骨(BCG)复合制成条状重组合异种骨(RBX)，并采用兔桡骨干1．5cm缺损的动物模型，通过大体观测、X线、组织形态学观察及计算机图像分析，比较单纯RBX移植、带血供骨膜包裹：BCG与带血供骨膜包裹RBX联合修复四肢骨缺损的疗效。结果 带血供骨膜包裹：RBX，在骨缺损修复早期，其成骨速度及成骨质与量均较优越，8周即可使骨缺损基本修复。结论 带血供骨膜包裹RBX对骨缺损修复能力最强，可大大缩短骨缺损修复时间。     

治疗节段性骨缺损的一种新方法—新型重组合异种骨与带血循骨膜联合移植

目的 探讨治疗节段性骨缺损新方法－新型重组合异种骨（NRBX）与带血循骨膜联合移植方法的效果。方法 将基因重组人BMP2（rhBMP2）与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成NRBX;并将之与带血循环骨膜联合移植修复兔桡骨干1．5cm缺损,通过X线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,对该联合方法治疗节段性骨缺损的效果进行研究,并与单纯NRBX移植方法对比。结果 ①单纯NRBX移植,可在16周使节段性骨缺损基本修复,其机制与过程与重组合异种骨（RBX）相似;②NRBX与带血循骨膜联合移植,仅用8周即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制。结论 上述二种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以NRBX与带血循骨膜联合移植较为理想,该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。     

块型抗感染重组合异种骨Ⅰ期植骨修复犬桡骨污染性节段性骨缺损

目的：研究和开发能够Ⅰ期植骨修复细菌污染的节段性骨缺损的植骨材料。方法：在块型重组织异种骨（MRBX）基础上，结合抗生素局部缓释技术。研制出兼具高效成骨作用和强力抗感染能力的块型抗感染重组合异种骨（MARBX）；并采用细菌污染的犬桡骨，1.5cm节段性骨缺损模型，通过解剖学、放射学、组织学及细菌学检查，对比研究MARBX和MRBXⅠ期植骨内固定修复效果。结果：术后6个月，MARBXⅠ期植骨，可有效预防感染，并基本完成骨缺损的修复；而MRBXⅠ期植骨，则导致骨髓炎，不能修复骨缺损。结论：MARBX由于既具有高效成骨活性，又有非常强的抗菌能力，能Ⅰ期植骨、有效修复污染性节段性骨缺损。     

庆大霉素重组合异种骨在犬肢体Ⅲb炸伤中抗感染的实验研究

目的　探讨庆大霉素重组合异种骨复合体 (G -BRX)在犬四肢爆炸伤中抗感染能力。方法　炸伤试验犬左后肢。造成Ⅲb骨折 ,外固定架固定。 3d后取出骨折碎片 ,人为的造成一约 1 5cm× 1cm皮质骨骨缺损 ,分为两组 ,A组局部运用G -BRX10粒 ,B组为对照 ,运用自身骨碎片。两组局部均运用金葡菌 5× 10 6CFU ,而后用游离肌皮瓣覆盖创面。术后 6个月观察各组骨髓炎发生率。结果　A组仅有 1例感染 ,B组有 7例感染 ,二者有统计学差异。结论　庆大霉素重组异种骨复合体在爆炸伤创面的早期修复中可有效的防治感染 ,是骨缺损早期修复的一种良好材料。     

抗感染重组合异种骨对兔胫骨近端骨髓炎的预防作用

目的：探索一种能效预防术后感染,降低骨髓炎发生率,同时能促进骨损伤快速修复的方法。方法：在重组合异种骨（RBX）基础上,结合抗生素缓释技术,研制抗感染重组合异种骨（ARBX）,并进一步采用兔胫骨近端骨髓炎模型,于胫骨近端骨窗内注入金葡菌后即刻,分别植入ARB（ARBX组）,植入RBX并肌注庆大霉素（RBX加全身用药组）,单纯植入RBX（RBX组）,术后8周无菌取材,通过解剖学,放射学,组织学,细菌学检查,比较上述各组方法对骨髓炎的预防作用。结果：术后8周,RBX加全身用药组的细菌计数及改良的Norden分值较RBX组明显减少（P＜0．01）,但ARB组明显增多（P＜0．01）,其解剖学及组织学观察的骨髓炎程度也介于RB组和ARBX组这间,ARB组的细菌计数及改良的X线Norden骨髓炎分值均极低,明显小于其它2组（P＜0．01）,其解剖学和组织学观察均无骨髓炎表现。结论：传统的全身抗生素应用,有一定的抗感染能力,但当I期植骨时,不能有交地发挥预防骨髓炎的作用。ARBX除有良好的骨传导和骨诱导作用外,还有很好的抗生素缓释作用。具有非常强的抗感染能力,能I期植骨修复细菌污染的骨缺损,并能有效预防骨髓炎的发生。     

复合rhBMP_2的异种骨(rhBMP_2/BCB)与骨膜联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损

目的　探讨复合基因重组人ＢＭＰ２ 的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ） 移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法　将ｒｈＢＭＰ２ 与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;并采用兔桡骨干１．５ ｃｍ 缺损的动物模型,通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,比较单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与带血运骨膜联合移植及ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与游离骨膜联合移植修复节段性骨缺损的疗效。结果　（１） 单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 移植,可在１６ 周使节段性骨缺损基本修复,其修复机制与过程和重组异种骨相似;（２）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植,８ 周即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制;（３）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与游离骨膜联合移植,在骨缺损修复早期（ ≤１２ 周） ,其成骨速度及成骨质与量均优于单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植,约在１２ 周使骨缺损基本修复。结论　上述三种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植较为理想。该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。     

游离骨膜与复合rhBMP2的异种骨联合移植修复骨缺损的实验研究

目的 探讨复合基因重组人ＢＭＰ２（ｒｈＢＭＰ２）的异种骨与游离骨膜（ＦＰ）联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法 将ｒｈＢＭＰ２与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;选用新西兰大耳白兔２８只,制成烧骨干１５ｍｍ缺损动物模型,分别行ＦＰ和ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ复合移植（ｎ＝６）、ｒｈＢＭ２／ＢＣＢ移植（ｎ＝６）和单纯ＢＣＢ移植（ｎ＝２）;术后４、８、１２、１６周取材,通过Ｘ线、生     

负载胰岛素样生长因子-1的骨髓间充质干细胞与壳聚糖-胶原复合物修复大鼠骨缺损的实验研究

背景：目前已有较多研究表明将种子细胞复合于支架材料进行骨缺损的修复能够取得良好的效果,但仍需探索有效的生长因子以促进修复过程。 目的：探讨负载胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor,IGF-1）的骨髓间充质干细胞与壳聚糖-胶原复合物对大鼠骨缺损的修复作用。 方法：分离大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面标志物;将骨髓间充质干细胞进行成骨诱导后检测碱性磷酸酶的活性以鉴定其成骨能力;IGF-1过表达载体转染骨髓间充质干细胞并筛选稳转细胞系,Real-time PCR以及Western blot鉴定稳转细胞系中IGF-1的表达。扩培细胞,并与壳聚糖-胶原进行复合培养。同时建立大鼠骨缺损模型,造模成功后将20只大鼠随机分为4组,每组5只。实验组植入负载IGF-1的骨髓间充质干细胞复合支架,支架修复组植入未经细胞复合的支架,干细胞复合支架修复组植入单纯骨髓间充质干细胞复合支架,空白对照组缺损处未植入任何物质。术后分别通过X射线和组织学切片观察比较各组大鼠的骨缺损修复情况。 结果：流式细胞术鉴定结果显示细胞CD44阳性率为98.19%,CD45阳性率为3.65%,CD90阳性率为97.62%。成骨诱导后碱性磷酸酶浓度升高至（11.57±0.48）U/L,显著高于未经成骨诱导的细胞（5.55±0.63）U/L（〈0.05）。Real-time PCR以及Western blot检测结果IGF-1稳定转染的细胞中IGF-1 mRNA以及蛋白的表达均显著升高（〈0.05）。X射线以及组织学观察结果表明空白组骨缺损不能自行修复,壳聚糖-胶原支架与骨髓间充质干细胞复合物植入大鼠后未见明显的免疫排斥反应,与其他组相比负载IGF-1的骨髓间充质干细胞与壳聚糖-胶原复合物组的成骨及修复效果均较为明显。 结论：骨髓间充质干细胞是较为理想的骨组织工程种子细胞,将IGF-1负载于骨髓间充质干细胞能够促进骨组织的修复。     

rhBMP-2在兔桡骨远端骨缺损模型中成骨效应研究

目的 评价大肠杆菌DH5α高度表达的重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）促进兔桡骨远端骨缺损骨愈合的有效性和剂量-成骨关系.方法 72只成年雄性新西兰白兔按照所设rhBMP-2剂量随机等分为空白对照组、0.5mg组和1.0mg组,右桡骨远端截骨构建骨缺损模型,分别于骨缺损处植入吸附rhBMP-2的纤维胶原蛋白载体复合物.术后2周、4周和8周每组分别处死动物8只,根据钼钯X线摄片、微CT检测、三点弯曲最大承载力测定和组织细胞学检查评估rhBMP-2成骨效应及剂量-成骨关系.结果 3个rhBMP-2剂量组术后2周、4周、8周Lane-Merchant评分所示骨愈合率有统计学差异（P＜0.05）.根据微CT检测,所有标本正常骨密度无个体差异（P＞0.078）,3个rhBMP-2剂量组术后2周、4周、8周缺损区骨密度均有统计学差异（P＜0.05）;3个rhBMP-2剂量组术后2周、4周、8周三点弯曲最大承载力均有统计学差异（P＜0.05）.组织细胞学检查结果也符合以上结果.结论 rhBMP-2（0.5 mg、1.0 mg）能有效促进兔桡骨远端骨缺损愈合,其成骨能力在一定剂量范围内存在剂量依赖性.纤维胶原蛋白载体有着良好的生物相容性,但降解速度相对较快,对rhBMP-2缓释、提高局部有效浓度维持时间的作用有限.     

治疗节段性骨缺损的一种新方法—新型重组合异种骨与带血循骨膜联合移植

目的探讨治疗节段性骨缺损新方法一新型重组合异种骨(NRBX)与带血循骨膜联合移植方法的效果。方法将基因重组人BMP2(rhBMP     

带血供自体骨和重组异种骨移植修复骨缺损效应中血管内皮细胞生长因子的表达

目的探讨带血供自体骨和重组异种骨(reconstitutedbonexenograft,RBX)移植修复骨缺损的疗效,以及受体血清血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)的表达状况。方法将1998年1月～2002年12月随机收集入院的骨缺损27例,分为A组:带血供自体骨和RBX移植修复组(n=9);B组:带血供自体骨移植修复组(n=10);C组:RBX移植修复组(n=8)。以术后3、6及12个月随访的X线片判断骨缺损修复情况、骨愈合时间与是否再吸收;3组分别在术前,术后2、4、6和8周,采用免疫定量分析血清VEGF的表达。结果X线片显示:术后3个月A组8例、B组6例和C组3例达临床骨愈合;6个月A组1例、B组与C组各3例骨愈合;12个月B组1例、C组2例发生骨移植区部分再吸收,未愈合。3组术后2、4周血清VEGF值均较术前呈显著性升高,4周A组和B组分别与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),但各组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后6周和8周3组的血清VEGF值术前、术后及各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论带血供自体骨和RBX移植修复骨缺损,其移植早期受体血清VEGF表达明显增高,且表达水平可作为骨生长、愈合状况的生物分子指标。     

新型骨组织工程β-TCP／CPPF／PLLA支架复合BMSCs修复节段性骨缺损的影像学研究

目的：将自体骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）接种到β-TCP／CPPF／PLLA支架上,进行体外复合培养,构建组织工程人工骨,植入兔桡骨大段骨缺损模型中,评估BMSCs／β-TCP／CPPF／PLLA复合体促进成骨的作用。方法：用新西兰大白兔40只,随机分为BMSCs／β-TCP／CPPF,PLL复合物组（A组）、β-TCP／CPPF／PLLA支架组（B组）、空白对照组（C组）共三组,建立兔桡骨双侧大段骨缺损模型,相应植入自体细胞材料复合物和单纯支架材料,空白对照组不作任何处理。术后4、8、12、16周处死动物,摄X线片观察骨缺损修复情况。结果：X线检查结果：A组术后2周可见缺损处有散在的、少量的模糊状骨痂生成,术后4周可见明显的骨生成影像,成云雾状,均匀分布在骨缺损区,术后8周整个缺损区均可见到骨痂生成,成骨现象较4周更加明显,部分髓腔已通,术后12～16周,缺损区已完全为新生的骨组织充填,骨髓腔已完全再通,修复区比正常的桡骨较细。B组、C组术后2～16周,虽有不同程度的成骨现象,但没有完全修复骨缺损区,B组较C组修复明显。X线评分结果：A组在各时期均明显高于B组,差异具有显著性（P〈0．01）。结论：自体BMSCs与β-TCP／CPPF／PLLA复合物移植能修复大节段的骨干缺损。