红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞(MSC)形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素(EPO)能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶(TERT)、POU5fl转录因子-4(OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)和多潜能维持因子(Nanog)mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.     

红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞(MSC)形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素(EPO)能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶(TERT)、POU5fl转录因子-4(OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)和多潜能维持因子(Nanog)mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.     

Notch信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的作用

MSC(Mesenchymal stem cell)具有多向分化潜能和自我增殖能力.在不同调节因子的作用下分化为多种细胞,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、神经细胞和血管内皮细胞等[1-3].MSC向Osteoblast(OB)分化的过程受到多种通路的调控和影响,如Notch、Wnt、MAPK等信号通路.本文结合最新研究进展,重点综述了Notch信号通路在MSC向OB分化过程中的调节作用.     

骨髓脂肪细胞多向分化潜能的初步探讨

目的 从人骨髓脂肪层中分离培养骨髓脂肪细胞,探讨其多向分化潜能.方法 体外贴壁培养和扩增人骨髓脂肪细胞,采用流式细胞仪检测骨髓脂肪细胞表面抗原CD105、CD166、CD49d等的表达情况.通过RT-PCR检测转录因子过氧化物酶增殖激活受体-γ2(PPAR-γ2)、CCAATT增强结合蛋白(C/EBPs)和瘦素(leptin)的表达.经体外诱导分化检测骨髓脂肪细胞的体外成脂和成骨能力.结果 流式细胞仪检测结果显示骨髓脂肪细胞与骨髓基质细胞具有相似的表面标志,但骨髓脂肪细胞特征性表达CD49d、C/EBPs以及leptin.体外诱导分化实验显示骨髓脂肪细胞具有成骨和成脂的能力.结论 骨髓脂肪细胞具有脂肪前体细胞的特性,但同时它具有同骨髓基质细胞相似的表面标志和多向分化潜能,提示可以作为一种新的组织工程种子细胞来源.     

骨髓诱导成骨成脂分化机制研究进展

骨髓间充质干细胞(MSC)有分化为多种细胞的潜能,在无任何条件干预下可自然分化为成骨细胞系和脂肪细胞系,两者分化存在相互制约的平衡关系。细胞分化方向的调节通过一些复杂信号通路,如骨形态发生蛋白、Wnt蛋白、脂联素以及脂肪细胞、成骨细胞分化转录调节因子PPAR-γ、Runx2等之间相互作用实现,药物、年龄、微重力作用等因素也可影响这些信号通路,调节MSC分化方向。该文就MSC成骨或成脂分化的影响因素研究进展作一综述。     

Notch信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的作用

MSC(Mesenchymal stem cell)具有多向分化潜能和自我增殖能力.在不同调节因子的作用下分化为多种细胞,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、神经细胞和血管内皮细胞等[1-3].MSC向Osteoblast(OB)分化的过程受到多种通路的调控和影响,如Notch、Wnt、MAPK等信号通路.本文结...     

骨髓诱导成骨成脂分化机制研究进展

骨髓间充质干细胞(MSC)有分化为多种细胞的潜能,在无任何条件干预下可自然分化为成骨细胞系和脂肪细胞系,两者分化存在相互制约的平衡关系.细胞分化方向的调节通过一些复杂信号通路,如骨形态发生蛋白、Wnt蛋白、脂联素以及脂肪细胞、成骨细胞分化转录调节因子PPAR-γ、Runx2等之间相互作用实现,药物、年龄、微重力作用等因...     

体外长期培养对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有体外增殖能力强及多向分化潜能,是目前临床应用的重要组织工程种子细胞.MSC经体外培养后干细胞生物学特性是否发生改变,是临床应用中亟待了解的问题.本实验以正常成人骨髓源MSC为研究对象,应用流式细胞学、细胞化学和染色体显带技术,观察了体外不同传代次数的MSC表面表型、分化能力和核型改变.结果显示:随着传代次数的增加,培养的MSC向软骨细胞、成骨细胞和脂肪细胞分化的能力依次减弱,但并不伴有细胞表面标志和核型的改变.这一结果提示,尽管体外培养的MSC遗传稳定性好,但高度增殖使细胞多向分化能力非同步逐渐丧失.因此在以MSC作为种子细胞构建不同的组织时,应注意选择适宜的扩增培养代数以便获得理想的细胞数目扩增同时保留细胞最佳分化能力.     

双份脐血移植后受者骨髓间充质干细胞嵌合情况

目的 研究双份脐血移植(DCBT)受者骨髓间充质干细胞(MSC)的嵌合状态.方法 急性粒细胞白血病M2a型男性患者1例,接受改良白消安环磷酰胺方案+抗胸腺细胞球蛋白(ATG)预处理,输注5个抗原(5/6)相合和4个抗原(4/6)相合的非血源脐血各1份,移植后19 d粒系造血重建.移植后87 d,采用密度梯度离心法分离DCBT后受者及正常供者的骨髓单个核细胞,分别培养MSC,用流式细胞术检测细胞表面标志,诱导其向成脂肪细胞和成骨细胞分化,应用逆转录聚合酶链反应法检测MSC表面造血及免疫相关分子的表达,短串联重复序列聚合酶链反应检测受者MSC、外周血、骨髓中供者细胞嵌合率.结果 移植后受者MSC与正常供者MSC具有相似的细胞形态、免疫表型以及分化潜能,均能表达白细胞介素6、干细胞因子、白血病抑制因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子等造血及免疫相关分子的mRNA.DCBT后受者骨髓优势脐血嵌合度达96.4％,外周血嵌合度达95.7％,MSC的优势脐血嵌合度为5.4％,MSC中受者本身部分占94.6％.结论 DCBT后,受者造血重建仅来自于其中1份脐血.移植后骨髓MSC大部分来源受者本身,部分嵌合的供者MSC来源于植入的单份脐血.     

体外培养条件下rhBMP—2和TGF—β对兔MSC分化和增殖的影响

目的：观察rhBMP－2,TGF－β等因子诱导在基质细胞向成骨细胞分化及增殖的情况。方法：通过体外培养兔骨髓基质干细胞（Bone Marrow Stromal Cells,MSC）稳定传代后,采取分别单独加入rhBMP－2,TGF－β等诱导因子方法观察MSC的成长分化,采用MTT方法以及碱性磷酸酶染色的方法观察上诉因子对细胞生长分化和增殖的影响。结果：当rhBMP－2的浓度在400－800ng/ml时对兔MSC的增殖和分化有明显的促进作用,其主要作用为促进分化,TGF－β对MSC的增值和分化也有明显的促进作用,其主要作用为促进MSC的增殖。结论：rhBMP－2和TGF－β可以作为兔骨髓基质细胞较理想的诱导因子,促进MSC在体外的增殖和分化,为体外培养组织工程化骨提供较好的种子细胞。     

Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。     

促进诱导多能干细胞向神经系统细胞分化的研究现状

诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iiPSC)是一种应用相关转录因子将细胞重编程、逆转其发育潜能而得到的类似于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)的一种多能性干细胞.2006年,Takahashi与Yamanaka[1]将Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc 4种因子转移至小鼠成纤维细胞,首次获得iPSC.由于其来源于自身细胞,自体移植时不涉及伦理问题,无免疫原性,在替代治疗、药物筛选、疾病建模等方面均可以发挥潜在的巨大优势[2].iPSC作为一种多能干细胞,在适当条件下可实现神经分化,即定向分化为神经干细胞(neural stem cell,NSC)、神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等组成神经系统的各种细胞[3,4],因而成为治疗神经系统疾病的理想选择.有学者总结了经典的胚胎干细胞神经分化的方法[5-7],这也成为确立iPSC神经分化方法的重要参考.     

1,25(OH)2D3体外抑制小鼠Th17细胞分化的用研究

目的 探讨1,25(OH)2D3对Th17细胞分化的体外抑制作用.方法 通过对分离出的脾淋巴细胞进行CD4+T细胞分选,将不同浓度的1,25(OH)2D3加入到CD4+T细胞中并在诱导因子的作用下诱导其分化.通过ELISA检测培养上清中IL-17A和IL-22的浓度;流式细胞仪分析Th17细胞的比例及RT-PCR检测Th17细胞分化的转录因子的表达.结果 培养上清ELISA检测显示:与对照组相比,1,25(OH)2D3组的IL-17A和IL-22浓度随着加入1,25(OH)2D3浓度的增大而呈现逐渐降低的现象,差异且具有统计学意义(P＜0.01);流式结果显示:诱导分化后对照组Th17细胞比例最多,1,25(OH)2D3组处理后Th17细胞比例降低,且呈剂量依赖性;RT-PCR检测显示:与对照组相比,1,25(OH)2D3组IL-17A、IL-22,RORγt和RORα 表达量随着剂量的增加而逐渐降低,并具有统计学意义(P＜ 0.01).结论 体外实验表明,1,25(OH)2D3具有抑制Th17细胞分化的作用,表现为Th17细胞比例、分泌的细胞因子及特异的转录因子表达均减少.     

重组人促红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响,并探讨其可能机制.方法 抽取健康志愿者的骨髓液,采用贴壁培养法获取第3代MSCs(P3-MSCs),通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的方法 鉴定MSCs.取经过鉴定的P3-MSCs,分别与不同浓度(0.5、1、5、10、50 IU/ml)rhEPO共培养,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;以过量特异性抗体封闭EPO受体(EPOR),再用MTT法观察P3-MSCs增殖情况;采用免疫荧光细胞化学染色法检测P3-MSCs的EPOR表达,用Western印迹检测增殖信号通路蛋白表达.结果 贴壁培养获取的P3-MSCs同时高表达CD105和CD90,低表达CD34和CD45,并可被诱导分化为脂肪、成骨及软骨细胞.MTT结果 显示,给予EPO后,MSCs的增殖明显增强,以浓度为10 IU/ml者的作用最为显著;同时加入抗EPOR抗体封闭EPOR后,MSCs的增殖率明显降低(P<0.01).P3-MSCs的EPOR表达阳性;用10 IU/ml EPO刺激4 d后,EPOR、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(pJAK2)及磷酸化信号转导和转录因子-5(pSTAT-5)的表达均明显上调.结论 EPO能促进体外培养的骨髓MSCs增殖,该效应经EPOR介导,并与JAK2-STAT-5信号途径有关.     

关节腔内注射间充质干细胞治疗骨关节炎研究进展

骨关节炎(OA)患者关节软骨病变的修复依然是实验研究和临床研究中最富挑战性的问题之一.间充质干细胞(MSC)具有强大的自我更新、增殖能力和分化潜能,不同组织来源的MSC分化和增殖能力不相同.关节腔内直接注射MSC因操作简单、侵入性少,已广泛应用于OA治疗研究.该文就动物模型与临床研究中直接关节腔内注射MSC治疗OA研究进展及未来治疗策略作一综述.     

间充质干细胞治疗男性不育的研究进展

间充质干细胞(MSC)是一类具有自我更新、多向分化能力和低免疫原性的多功能细胞,近年来已被广泛应用于生命科学和医学领域。男性不育的病因复杂,目前尚未有理想的治疗手段。MSC的多向分化潜能及旁分泌特性为男性不育患者的康复带来了新的希望。MSC根据其来源不同,可分为骨髓MSC、脂肪MSC和脐带MSC等。这些类型的MSC已经开展了大量的体内外研究,并取得了令人满意的结果。众多研究表明MSC在特殊条件诱导下或移植入睾丸后,能够分化为生殖细胞。同时,MSC体内移植后能分泌营养因子,改善局部生精微环境并重塑精子发生过程。本文将对MSC在男性不育领域的研究进展和应用前景作一综述。     

间充质干细胞在移植治疗中的研究进展

间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中一种重要的、具有多向分化潜能的非造血干细胞.体外研究表明,MSC在类似Dexter型的基质培养体系中,具有支持长期培养启动细胞的功能,体内MSC的共输注可促进造血干细胞的植入,加速移植受者的造血重建.同种异体MSC的共输注可抑制同种异体免疫反应,延长移植物的存活时间,降低移植物抗宿主反应.所以人类MSC具有广泛的临床应用前景.     

间充质干细胞在移植治疗中的研究进展

间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中一种重要的、具有多向分化潜能的非造血干细胞.体外研究表明,MSC在类似Dexter型的基质培养体系中,具有支持长期培养启动细胞的功能,体内MSC的共输注可促进造血干细胞的植入,加速移植受者的造血重建.同种异体MSC的共输注可抑制同种异体免疫反应,延长移植物的存活时间,降低移植物抗宿主反应.所以人类MSC具有广泛的临床应用前景.     

改善成骨微环境促进间充质干细胞成骨分化研究进展

间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能,适宜的成骨微环境可促进MSC的成骨分化。因此,改善成骨微环境,促进MSC成骨分化在骨组织工程及再生医学领域拥有广阔的应用前景。该文主要从调节细胞因子及支架支持从而改善细胞外基质(ECM),调节血管生成因子、基因重组细胞移植及人工支架预血管化从而改善局部血液循环,改善MSC与其他细胞间的相互作用3个方面对改善成骨微环境促进MSC成骨分化的研究进展进行综述。     

兔骨髓间充质干细胞向雪旺细胞体外分化的实验研究

目的 研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCS)体外分化为雪旺细胞(schwann cells,SCS)的可行性,并对其功能进行检测.方法 取第3代生长状态良好的MSC,诱导组经β-巯基乙醇和维甲酸序贯诱导4 d后用含富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)的培养基培养7 d,荧光染色对SC标志物S-100进行鉴定,并于第4、7、9和11天在换液前收集培养液,ELISA法检测神经生长因子(never growth factor,NGF)的含量,并和空白对照组比较.结果 体外诱导的MSC发生形态改变并表达S-100蛋白,诱导组在第4、7、9、11天时NGF的含量分别为[(254±25)pg/ml,-x±s,下同]、(372±31)pg/ml、(485±29)pg/ml、(534±32)pg/ml,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MSC体外能诱导分化为SC,且具有分泌NGF的功能.