过量氟对大鼠切牙骨涎蛋白表达的影响

目的:研究过量氟对牙硬组织发育过程中骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)时空表达的影响,从蛋白水平上探讨氟牙症的发病机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)和实验组(100mg/LF-)2组。饲养8周后处死动物,通过免疫组织化学染色观察并比较BSP在对照组与实验组大鼠牙胚上皮中的表达,采用计算机图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行计算机图像分析,采用SASv6.12统计软件对2组图像分析结果进行t检验。结果:对照组,各期成釉细胞排列均匀整齐,细胞形态正常,成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞中BSP表达为阳性;实验组,大鼠切牙成釉细胞由原有的高柱状变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,大鼠牙胚上皮中BSP表达显著低于对照组,P<0.01。结论:氟化物能抑制大鼠牙胚上皮BSP的表达,提示氟可能通过抑制BSP在牙胚发育过程中的表达,从而抑制牙胚上皮细胞(成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞)的增殖分化及随后的基质合成与分泌,导致氟斑牙的形成。     

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：观察牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化，探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期组织标本，采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果：DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞，在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性，在成釉细胞中有一过性表达，即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达，但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论：观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞和成釉细胞的分化及牙本质形成过程。     

高氟环境对小鼠牙齿发育中E-钙黏附素表达的影响

目的:探讨E-钙黏附素在正常牙齿发育以及高氟环境中牙齿发育的表达变化,从细胞黏附分子与发育学角度揭示氟牙症发病机制.方法: 建立小鼠急性氟中毒动物模型,采用免疫组织化学方法,观察E-钙黏附素在正常及高氟环境中下颌第一磨牙牙胚发育的钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期的表达.结果:钟状形态发生期实验组和对照组成釉细胞E-钙黏附素的表达水平无差异;钟状分化、分泌期实验组E-钙黏附素的表达水平显著低于对照组;钟状成熟期实验组E-钙黏附素的表达水平低于对照组.结论:过量氟摄入后影响牙胚成釉细胞E-钙黏附素的表达,导致釉质发育紊乱,形成多孔的结构.这可能是氟牙症的发病机制之一.     

TGF-?TGF-?TGF-?蛋白在人牙胚表达的免疫组化研究

目的：探讨TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在人牙齿发育过程中的作用。方法：采用SP免疫组化方法,检测正常引产的胎龄为4～7个月的胎儿颌骨组织切片中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在牙胚中的分布。结果：TGF-β1、TGF-β3主要在成釉细胞及成牙本质细胞表达,TGF-β2主要在内釉细胞及成釉细胞表达;TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在釉结均呈阳性表达。结论：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3是人牙齿发育过程中重要的调节因子,参与牙胚细胞分化、基质形成及牙齿形态形成。     

钟状期成釉细胞的体外生长研究

目的:通过对乳牙牙胚成釉细胞的体外培养生长情况的研究,了解成釉细胞的生长和分化过程.方法:解剖分离因疾病原因引产遗弃的19周胎儿下颌骨,半侧固定后拍摄数字X线影像,连续切片HE染色;另半侧未固定的组织分离乳牙牙胚成釉器,胶原酶消化法制成细胞悬液,采用差速贴壁和无血清培养基选择性培养成釉细胞.培养的乳牙胚成釉细胞通过细胞角蛋白14免疫细胞染色鉴定,并以RT-PCR方法检测釉质基质蛋白的表达.结果:X线影像显示牙胚冠部有硬组织形成,组织学乳牙牙胚处于钟状期,可见分化的成釉细胞分泌大量细胞外基质,釉牙本质界处釉质已矿化.无血清培养基中牙源性上皮的生长分化良好,细胞角蛋白14染色阳性,RT-PCR显示有釉蛋白、釉原蛋白和成釉蛋白的表达.结论:采用无血清培养基可以选择性的培养乳牙胚钟状期成釉细胞,能够较好反映成釉细胞的生长分化状态.钟状期分化的成釉细胞进入细胞外基质分泌活跃期,并在釉牙本质界处最早出现釉质的矿化.     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞增殖与凋亡的影响

目的　研究氟牙症的发生机制。方法　选择 2 0只Wistar大鼠 ,随机分为 2组 :Ⅰ组 (对照组 )和Ⅱ组 (5 0mg/LF-)。 8周后处死动物 ,利用磨片、HE染色、核仁形成区嗜银染色 (AgNORs)和原位细胞凋亡检测 (TUNEL)技术观察过量氟对大鼠切牙形态及机能的影响。结果　Ⅱ组大鼠切牙釉质生长线明显 ,分泌期成釉细胞嗜伊红颗粒蓄积 ,分泌前期成釉细胞AgNORs颗粒数低于Ⅰ组 ,差异有显著性 (P <0 0 0 1) ,成釉细胞凋亡增多 ,并伴有凋亡现象向分泌期迁移。结论　过量氟可抑制成釉细胞增生 ,促进成釉细胞凋亡 ,为氟牙症发生的一种机制     

原癌基因c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：通过观察原癌基因c—jun、c—fos在大鼠牙胚发育过程中时空表达的特点，探讨它在牙胚发育中的作用。方法：制备大鼠牙胚发育各期组织标本，采用免疫组化的方法观察c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同阶段的表达情况，并对结果进行图像分析和统计学分析。结果：c-jun在大鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达，在钟状晚期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达，成釉细胞中亦有表达；c-fos在大鼠牙胚的蕾状期呈阴性表达，帽状期表达于内釉、外釉上皮和星网层，以内釉上皮层表达最强。钟状期表达于成熟的成牙本质细胞，且随着硬组织的形成、矿化，表达逐渐减弱。结论：观察到c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞、成釉细胞的分化和牙本质形成的过程。     

Shh在鼠磨牙牙胚发育晚期的基因表达

目的：观察信号分子Sonic hedgehog(Shh)在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育晚期的基因表达，探讨其在成釉细胞、成牙本质细胞分化中的作用。方法：制备昆明小鼠磨牙牙胚发育晚期(E16．5—P1．5)标本，用原位杂交法分析Shh mRNA在牙胚中的表达和分布。结果：Shh mRNA在牙胚发育晚期的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达，在成牙本质细胞层表达较弱。结论：在牙胚发育晚期，Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径，参与了成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的：观察Cbfal蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法：用自制的Cbfal多克隆抗体，采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果：Cbfal蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛，在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，而在钟状晚期，Cbfal在牙乳头表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性。结论：Cbfal可能在小鼠牙胚发育，尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。     

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目的探讨氟斑牙的发病机制及褪黑素是否对氟斑牙的发生有拮抗作用。方法 2009年3—10月于中国医科大学公共卫生学院将40只Wistar大鼠随机分为6组,包括阴性对照组、低氟组、高氟组、低氟+褪黑素组、高氟+褪黑素组。建立氟斑牙动物模型,制作切片后行HE染色,光镜下观察各组大鼠切牙成釉细胞形态。结果单纯给氟组大鼠。出现牙面粗糙、棕白色相间横纹、白垩色改变,高氟组大鼠的氟斑牙改变较低氟组的改变典型;成釉细胞扭曲变形,正常的高柱状形态丧失,胞内出现空泡等。注射褪黑素组与单纯给氟组的切牙一般状态及成釉细胞形态、排列未见明显差异。结论氟对大鼠切牙的成釉细胞有毒性效应,饮水氟含量高所致氟斑牙症状加重。褪黑素对氟斑牙的发生是否有拮抗作用有待进一步研究。     

氟对大鼠氟斑牙形成和成釉细胞DNA损伤的研究

目的：研究在氟中毒引起氟斑牙时,氟对大鼠切牙成釉细胞DNA损伤的影响。方法：给雄性SD大鼠饮用含10、50、100mg/LNaF的高氟水120d,制备氟斑牙模型,用单细胞凝胶电泳检测DNA的损伤。结果：雄性SD大鼠饮用高氟水后,血清氟含量较对照组显著增高,P〈0.05。饮水氟含量与血清氟含量的相关系数为0.9153（P〈0.05）,具有较好的剂量-效应关系,大鼠切牙呈现典型的氟斑牙改变。在50mg/LNaF的剂量条件下,大鼠切牙成釉细胞彗星长与对照组比较,P〈0.05。在100mg/LNaF的剂量条件下,彗星长、Olive尾距、尾分布距与对照组比较,P〈0.05,而尾长值虽比对照组增加,但P〉0.05。低剂量染氟组（10mg/LNaF）大鼠切牙成釉细胞DNA损伤情况与对照组比较,没有显著性差异（P〉0.05）。结论：在氟中毒引起氟斑牙的过程中,大鼠切牙成釉细胞发生明显的DNA损伤。     

孕鼠急性氟中毒对胎鼠牙胚造釉细胞影响的超微结构研究

目的 :建立孕鼠急性氟中毒动物模型 ,观察孕鼠急性氟中毒对胎鼠牙胚造釉细胞的影响。方法 :孕 14d的C5 7BL/6J鼠 ,实验组腹腔注射 10mg/kg·wt氟化钠 ,对照组注射等量生理盐水。每天注射一次 ,直至孕 2 0d。麻醉下处死孕鼠 ,取出胎鼠 ,分离下颌第一磨牙 ,进行光镜超微结构切片观察。结果 :孕鼠大剂量的氟可以引起胎鼠造釉细胞下囊腔的形成。囊腔上方的造釉细胞严重受损 :核上区线粒体明显肿胀或溶解 ,囊壁的造釉细胞细胞质和细胞核显示各种程度改变 ,细胞核染色质浓缩 ,凋亡小体出现 ,胞浆从细胞中脱出进入囊腔 ,囊腔中可见细胞及细胞碎片 ,异常分泌的釉基质 ,吞噬细胞 ,托马斯突变短或消失 ,囊腔下方的釉质分泌减少或终止。结论 :大剂量的氟不仅能引起发育中的鼠牙胚氟斑牙的形成 ,而且也能引起胎鼠牙胚氟斑牙的形成。氟引起胎鼠牙胚造釉细胞下囊腔的形成 ,囊腔上方的造釉细胞是以细胞凋亡的方式进行退变的。     

Effects of sodium fluoride on the actin cytoskeleton of murine ameloblasts

Fluoride is associated with a decrease in the incidence of dental caries, but excess fluoride can lead to enamel fluorosis, a defect that occurs during tooth enamel formation. In fibroblasts, the Arhgap gene encodes a RhoGAP, which regulates the small G protein designated RhoA. Fluoride treatment of fibroblasts inactivates RhoGAP, thereby activating RhoA, which leads to elevation of filamentous actin (F-actin). Since RhoA is a molecular switch, our hypothesis is that in ameloblasts, fluoride may alter the cytoskeleton through interference with the Rho signaling pathway. Our objective was to measure the effects of sodium fluoride on F-actin using tooth organ culture and confocal microscopy. The results indicated that cellular responses to fluoride include elevation of F-actin in ameloblasts. It was concluded from immunohistochemistry, RT-PCR and confocal approaches that the components of the Rho pathway are present in ameloblasts, and that the response to fluoride involves the Rho/ROCK pathway.     

不同浓度氟化物对体外培养成釉细胞活性的影响

目的建立大鼠成釉细胞原代培养技术,观察不同浓度氟化钠对成釉细胞活性的影响,为研究氟斑牙的形成提供依据。方法取10¹5 d的Wistar大鼠磨牙牙胚组织进行原代培养,通过酶消化法,分离培养成釉细胞。加入不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L)的氟化钠作用于成釉细胞,分别培养24、48、72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞的活性情况。结果①当氟化物浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有促进作用,且随着时间的增加而增强。②当氟化物浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有抑制作用,随着氟化钠浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且抑制作用随着时间的延长愈发明显。结论不同浓度的氟化物对体外培养成釉细胞的活性具有促进和抑制双向作用。     

Fluoride down-regulates the expression of matrix metalloproteinase-20 in human fetal tooth ameloblast-lineage cells in vitro

Fluoride is associated with a decrease in the incidence of dental caries, but excessive fluoride intake during tooth enamel formation can result in enamel fluorosis. Fluorosed enamel has increased porosity, which has been related to a delay in the removal of amelogenin proteins as the enamel matures. This delay in protein removal suggests that fluoride may affect either the amount or the activity of enamel matrix proteinases. In this study, we investigated the role of fluoride in the synthesis and secretion of matrix metalloproteinase-20 (MMP-20), the proteinase primarily responsible for the initial hydrolysis of amelogenin during the secretory stage of enamel formation. Cultured human fetus tooth organ ameloblast-lineage cells were exposed to 10  µ M fluoride and analyzed for synthesis of MMP-20. Immunoblotting showed that 10  µ M NaF down-regulated the synthesis of MMP-20 by 21% compared with control cells, but did not alter the amount of amelogenin or kalikrein-4 (KLK-4) synthesized by the cells. Real-time polymerase chain reaction (PCR) showed that 10  µ M NaF down-regulated MMP-20 mRNA expression to 28% of the levels found in the non-treated cells. These in vitro results suggest that fluoride can alter the expression of MMP-20 by ameloblasts, resulting in a disturbance of the balance between MMP-20 and its substrate that may contribute to the retention of amelogenins in the formation of fluorosed enamel.     

饮水型氟中毒动物模型建立及硬组织形态学改变的研究

目的建立慢性饮水型氟中毒动物模型并观察其硬组织形态学改变。方法 48只Wistar大鼠随机分成4组,建立氟中毒动物模型。染氟组分别饮用含氟化钠浓度为50、100、150 mg/L的自来水,对照组饮用常规自来水。8周后取大鼠切牙及股骨,通过组织HE染色方法观察各组大鼠切牙成釉细胞和大鼠骨组织形态学改变,采用氟离子选择电极测定各组大鼠血氟、牙氟及骨氟浓度。结果实验组大鼠切牙出现不同的氟牙症表现。各染氟组大鼠血氟(F=11.234,P<0.05),牙氟(F=275.148,P<0.05),骨氟(F=217.337,P<0.05)含量显著高于对照组,且随浓度增加而增加,各组间均具有显著差异。HE染色发现实验组大鼠切牙成釉细胞排列不规则呈多层,高柱状细胞结构变矮或消失,少量细胞发生扭曲,且随氟浓度增加以上病理学改变加重。大鼠股骨HE染色发现实验组骨组织出现骨小梁增多,排列致密等骨硬化性表现,骨骺板增厚,增殖层软骨细胞排列紊乱,随浓度的增加以上病理学改变加重。结论长时间饮用高浓度含氟水可引起慢性氟中毒,硬组织出现氟斑牙和氟骨症的病理学改变。     

不同质量浓度氟对大鼠切牙成釉细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的研究不同质量浓度氟对大鼠切牙生长过程中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。3组分别为低剂量氟组（F-质量浓度60 mg·L-1,13只）、高剂量氟组（F-质量浓度120 mg·L-1,13只）和对照组（蒸馏水,14只）。10周后取材,采用苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色的方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞的形态及TGF-β1表达的影响。结果实验组大鼠切牙均出现典型的氟斑牙症状,牙面出现白垩色改变,釉质表面有横纹。HE染色结果显示成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变。免疫组织化学染色结果显示TGF-β1在分泌期和成熟期成釉细胞均为强阳性表达,在星网状层、中间层均为阳性表达,在新形成的釉基质中呈阳性表达。2个实验组TGF-β1的表达强度明显低于对照组（P<0.01）,2个实验组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论氟可能通过抑制TGF-β1的表达而干扰了成釉细胞的分化和基质分泌,造成釉质发育障碍。     

Fluorides and dental fluorosis

This paper attempts to review present knowledge on the ingestion and metabolism of fluoride in relation to the occurrence of endemic dental fluorosis, a condition caused by an excessive intake of fluoride during tooth formation. The clinical appearance of dental fluorosis is characterized by lustreless opaque white patches in the enamel which may become striated, mottled and/or pitted. The opaque areas may become stained yellow to dark brown. The affected teeth may show a pronounced accentuation of the perikymata and, in more severe cases, multiple pits and larger areas of hypoplasia of the enamel appear so that the normal morphology of the tooth is lost. Due to the universal presence of fluoride in water, soil and the atmosphere it is not surprising that humans are exposed to various levels of fluoride intake , not only through food and water, but in industrial and pharmaceutical products and other sources. Water-borne fluoride, however, has been said to represent the largest single component of this element's daily intake, except where unusual dietary patterns exist. The daily amount of fluoride intake through water varies with climate (maximum daily temperature) and age. It has been postulated that significant changes in patterns of food and beverage ingestion, because of changes in available products and the ways in which they are marketed as well as many foods and beverages being processed in fluoridated communities, may have caused a change in the prevalence and severity of dental fluorosis over the past 30 years. Since fluoride remains pre-eminent among the measures available for increasing the resistance of teeth to caries attack, continued and renewed research on the ingestion and metabolism still has high priority.