调控涎腺细胞分泌的受体及其信号转导的研究进展

涎腺细胞膜表面的受体及其所介导的信号转导通路是调控涎腺分泌的重要途径。本文概要介绍了毒蕈碱型胆碱受体、α1-肾上腺素受体、β-肾上腺素受体及辣椒素受体在正常颌下腺的表达及其对唾液分泌的调控作用,重点介绍了作者所进行的涎腺细胞受体对失神经支配的移植颌下腺分泌调控作用的研究结果。     

异丙肾上腺素对SD大鼠原代颌下腺细胞增殖的影响

目的研究异丙肾上腺素对颌下腺细胞增殖的影响,为体外构建组织工程化涎腺提供充足的种子细胞。方法采用不同的方式加入异丙肾上腺素后,用Brdu标记阳性的细胞比率及绘制生长曲线的方法,检测颌下腺细胞的增殖能力。结果体外培养条件下,颌下腺细胞保持了对肾上腺素能受体刺激的反应,但与给药浓度及方式有关。结论异丙肾上腺素能在一定作用时间和浓度条件下促进颌下腺细胞的增殖,能为体外构建组织工程化涎腺提供种子细胞。     

AQP6和AQP5在人下颌下腺上的免疫组化定位

目的检测水通道蛋白亚型AQP6和AQP5在人下颌下腺的分布情况。方法对源自10例行颈淋巴清扫术患者的正常颌下腺组织,通过免疫组织化学染色方法,标记确定人下颌下腺组织中AQP6和AQP5的分布情况。结果 AQP6在部分颌下腺腺泡细胞质中表达。AQP5在浆液性腺泡和粘液性腺泡顶膜以及分泌小管均有表达,而闰管和纹状管未见表达。结论 AQP6在部分颌下腺腺泡细胞中表达,与AQP5相协调,参与唾液中水和阴离子的分泌调节。     

涎腺疾病

水通道蛋白-1，5在干燥综合征小鼠下颌下腺中的表达;：17β-雌二醇对涎腺黏液表皮样癌高转移细胞Mc3黏附、侵袭和移动力的影响;治疗角结膜干燥症自体颌下腺移植的血管处理;雌二醇对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖和转移作用的研究;异丙肾上腺素对SD大鼠原代颌下腺细胞增殖的影响     

唾液分泌相关的涎腺受体

所谓受体，是细胞膜上或细胞内能识别生物活性分子（激素、神经递质、生长因子、细胞因子、药物、毒物等）并与之特异结合，将生物活性分子产生的信息传递到效应器，引起各种生物学效应的生物大分子。受体的化学本质是蛋白质，在细胞膜表面的受体大多是糖蛋白。涎腺的腺泡细胞和导管细胞膜上都有大量的受体分布，但是由于腺泡细胞是液体和蛋白质分泌的主要细胞，所以大多数的受体研究都集中在腺泡细胞上。英国学者Garrett将分布在涎腺上的受体分为四大类：经典的神经递质受体、非肾上腺素能和非胆碱能受体、其他潜在的神经递质受体以及涎腺上的其他因子受体。     

下颌下腺细胞裂解液诱导骨髓间充质干细胞向涎腺细胞转分化的实验研究

目的：用下颌下腺细胞裂解液体外诱导骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSCs），观察BM—MSCs能否表达涎腺细胞的特异性分泌蛋白-α-淀粉酶。方法：分离并培养新生SD大鼠的下颌下腺细胞（submandubular gland cells，SMGCs），测定各代腺泡细胞分泌α-淀粉酶的量，取分泌量显著一代制成下颌下腺细胞裂解液；自新生SD大鼠股骨、胫骨中分离出BM—MSCs，培养至第3代时用含下颌下腺细胞裂解液的培养基培养1周，细胞免疫组织化学法鉴定诱导后的BM—MSCsa--淀粉酶的表达。结果：细胞免疫组化可检测到所培养的下颌下腺细胞中含α-淀粉酶，淀粉酶试剂盒测定结果显示，P2、P3代SMGCs分泌的α-淀粉酶较其它各代明显（P〈O．01）。经下颌下腺细胞裂解液诱导BM—MSCs后，可见下颌下腺腺泡样细胞，免疫组化显示其表达淀粉酶，而对照组未表达淀粉酶。结论：下颌下腺细胞裂解液能体外模拟下颌下腺细胞微环境诱导BM—MSCs转分化为具有分泌α-淀粉酶蛋白能力的下颌下腺腺泡样细胞，为解决涎腺组织工程中种子细胞的来源提供一条新途径。     

体外培养人牙周膜成纤维细胞雌激素受体表达的实验研究

目的观察雌激素受体在体外培养的人牙周膜成纤维细胞中的表达，为探讨雌激素对牙周组织的作用提供依据。方法用免疫细胞化学法对原代细胞爬片雌激素受体（estrogen receptors，ER）-α、β行SABC染色；用反转录聚合酶链反应法检测ER-α、ER-βmRNA在人牙周膜成纤维细胞中的表达；用Western blot法检测ER-α、ER-β蛋白的表达。结果ER-α和ER-β在人牙周膜成纤维细胞中均有表达，ER-β表达强于ER-α。分别计算ER-α、ER-β对应蛋白条带灰度值与内参β-肌动蛋白条带灰度值的比值，得到A组细胞ER-α、ER-β相对灰度值的均值为（0．80±0．08）和（1．05±0．11），B组细胞则为（0．95±0．09）和（1．13±0．10），ER-α和ER-β相比差异有统计学意义（P〈0．05），说明ER-β的条带较ER-α对应的蛋白条带浓，即ER-β蛋白的相对丰度大于ER-α。但对于同一受体亚型，无论是ER-α或ER-β，A、B组间蛋白条带灰度值差异均无统计学意义（P〉0．05），说明雌激素非处理组和经雌激素处理组在ER蛋白表达水平上无明显差异。结论雌激素可能通过其受体ER-α、ER-β对人牙周膜成纤维细胞的生物学性状产生影响。     

β-肾上腺素受体对颌下腺功能调控的研究进展

根据与不同肾上腺素类药物的亲合力,可将肾上腺素受体（adrenoceptor,AR）分为α-AR和β-AR两型,α-AR介导内脏器官和皮肤血管收缩以及腺体分泌;β-AR介导心率加快、支气管扩张和脂肪细胞分解。     

bFGF及其受体FGFRS在成年大鼠唾液腺中的免疫组化定位和mRNA表达

目的 本文研究碱性成纤维细胞生长因子[basic fibroblast growth factor(bFGF)]和成纤维细胞生长因子受体1、2、3和4(FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)在大鼠唾液腺中分布及表达特点。方法 应用免疫组化和RT-PCR的方法研究bFGF和FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4在成年大鼠腮腺和颌下腺中的免疫组化定位和mRNA表达。结果 bFGF和FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4在成年大鼠腮腺和颌下腺的各级腺管上皮细胞均有较强的特异性免疫染色。在成年大鼠腮腺和颌下腺可以检测到bFGF和FGFR1，FGFR2，FGFR3mRNA表达。结论 成年大鼠腮腺和颌下腺是合成、分泌bFGF的重要源泉。     

自体颌下腺移植治疗角结膜干燥症实验研究

目的 通过兔自体颌下腺移植试验，研究自体颌下腺移植治疗角结膜干燥症的可行性，移植术中、术后可能发生的问题及解决方法。方法 健康大耳白家兔20只，分成2组。试验组功除泪腺，通过血管吻合移植自体颌下腺至左颞部，导管植入外下穹隆结膜；对照组仅切除泪腺，不移植颌下腺。术后观察2个月，于术后1、2、3、4及8周分别进行施墨试验、移植眼泪液唾液淀粉酶测定、移植颌下腺造影、移植腺体及角膜组织病理学检查。结果 对照组兔术后施墨试验滤纸条长度低于术前，移植组施墨试验滤纸条长度高于术前。移植眼唾液淀粉酶浓度高于术前。移植腺体造影可清楚显示移植颌下腺完好的导管及腺泡结构，组织病理学观察，移植成功腺体结构正常，移植侧角膜无受破坏现象。结论 自体颌腺移植可适当增加角结膜干燥症兔泪液量，移植腺体分泌的唾液不会对眼部结构造成破坏，是治疗角治膜干燥症的有效方法。施墨试验及唾液淀粉酶浓度测定对壑移植腺体是否成活及移植腺体功能具有重要意义。移植颌下腺造影是检查移植腺体结构及功能的一种较好方法。     

小型猪颌下腺自体再植的实验研究

目的 在小型猪体内建立颌下腺自体再植模型，并观察再植后颌下腺的组织学变化。方法 小型猪8只(16侧颌下腺)分为三组：第一组，4侧颌下腺移植到自体腹股沟区；第二组，6侧颌下腺原位再植到颌下区，导管外置于皮肤；第三组，6侧颌下腺原位再植到颌下区，导管开口于口腔前庭。术后以导管口分泌情况及移植腺体病理检查确定手术效果。结果 第一组术后腺体全部发生血栓，腺体未能成活。第二组腺体成活有分泌3例，导管阻塞3例。第三组术后腺体成活有分泌5例，导管阻塞1例。病理检查结果显示成活腺体术后一周内，部分浆液细胞和粘液细胞可见明显的凋亡和变性。结论 小型猪领下腺不适合移植到腹股沟区。采用自体原位再植可成功建立小型猪颌下腺再植模型，其中导管开口于皮肤手术操作相对简单，适于短期观察。导管开口于口腔前庭的远期效果优于导管外置，适于长期观察。移植后腺细胞凋亡及变性可能是自体颌下腺移植术后发生休眠期时腺体分泌减少、变粘稠的病理学基础。     

交感神经系统-肾上腺素能受体对骨改建的调节作用

骨组织终生处于改建中,交感神经系统(SNS)对骨组织和骨细胞的神经支配是其调控骨代谢的组织学基础。肾上腺素能受体与其对应的配体结合后,激活多条信号转导通路,完成其对成骨细胞和破骨细胞的调控,调节骨代谢。对于成骨细胞,SNS既可以通过激活α1受体促进骨形成,也可以通过激活β2受体抑制骨形成;对于破骨细胞,SNS既可直接作用于破骨前体细胞,促进其分化成熟,还可以通过调节成骨细胞分泌促破骨因子核因子-κB受体活化因子配体,间接促进破骨细胞活性。在骨生理病理改建方面,SNS通过调控破骨活动参与牙槽骨在力学刺激下的骨改建。SNS与骨质疏松症的发生发展密切相关,阻断SNS信号对预防骨质疏松等以病理性骨量丢失为特征的疾病具有重要的临床意义。     

心血管疾病患者在用局麻作牙齿治疗时的超声心动图研究

目前,几乎所有用于牙齿治疗的局麻药都含有儿茶酚胺类,因为这类物质具有收缩血管的特性。肾上腺素、去甲肾上腺素、苯肾上腺素均有不同程度的肾上腺素能α-受体和β-受体的促效作用,使心率、喷血量和心排出量增加,从而心肌耗氧量亦增加。这些作用对心血管疾病患者不利,可引起严重问题。但是,局麻时不用儿茶酚胺类药,因镇痛不完全而导致疼痛,使内源性儿茶酚胺分泌增加,对心血管疾病患者产生相同的交感神经兴奋改变。     

铜离子对牙各矿化成分破骨细胞性吸收的体外调控

目的研究铜离子对破骨细胞体外吸收人牙磨片功能的影响。方法体外分离、培养兔破骨细胞，与玻片和灭活人牙磨片共同培养，加入不同浓度的铜离子。抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定玻片上的破骨细胞，显微摄影分析破骨细胞吸收造成的牙磨片上的吸收陷窝，原子吸收分光光度法测定溶出的钙，并将实验组上清液中钙离子浓度与对照组相比，定义为矿化组织吸收指数，以评价破骨细胞的功能。结果体外成功分离培养出多核的、抗酒石酸酸性磷酸酶染色（＋）的破骨细胞。破骨细胞吸收牙磨片时，首先在接近牙骨质或牙本质的部位开始形成吸收陷窝；破骨细胞在牙磨片上形成的吸收陷窝与骨片相比，数量较少，体积较小，多为正圆形；吸收深度较浅，常为大面积的浅吸收。（1×10^-14）～（1×10^-4）mol／L铜离子均能抑制矿化组织吸收，实验组矿化组织吸收指数均小于1。培养第3天，1×10^-10mol／L铜离子与对照组相比，其抑制效果差异有统计学意义（P〈0．05）。培养第7天，1×10^-4mol／L、（1×10^-10）～（1×10^-12）mol／L铜离子均能显著抑制矿化组织吸收（P〈0．05），但各浓度之间相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论一定浓度的铜离子可以抑制破骨细胞在牙磨片上的吸收。     

SD大鼠下颌下腺主导管结扎损伤及再通后的组织学观察

目的:建立主导管结扎的SD大鼠下颌下腺组织损伤模型,观察主导管结扎及再通后腺体的组织学变化。方法:双重结扎SD大鼠下颌下腺主导管。部分腺体在6 d后摘取;其他腺体于6 d后松开结扎使再通,并于4、6、12、24 d后处死动物,取出腺体。通过HE及免疫组织化学染色观察其组织化学变化。结果:主导管结扎6 d后,腺体中腺泡消失,导管样结构增生,导管细胞表达CK19;在增生导管及周围见α6β1、LN阳性细胞。松开结扎再通的导管在6 d后有成熟的腺泡细胞出现,24 d后有大量成熟腺泡形成,Amylases、PAS(periodic acid-schiff)、AQP-5均在腺泡细胞中表达。结论:导管结扎损伤后腺体腺泡萎缩,导管上皮增生。松开结扎再通后腺泡细胞再生、功能恢复。     

产气荚膜梭菌肠毒素对鼠颌下腺紧密连接蛋白表达影响的研究

目的 观察产气荚膜杆菌肠毒素对鼠颌下腺上皮细胞形态及细胞间紧密连接蛋白表达影响。 方法 制备提纯气荚膜杆菌肠毒素羧基段184-319残基短肽片段,并灌注大鼠颌下腺3h,行H.E及免疫荧光组织化学染色,观察腺泡及导管细胞形态及紧密蛋白ZO-1及Claudin-4表达变化。 结果 成功提纯产气荚膜杆菌肠毒素短肽片段,未观测到上皮坏死,未观察到紧密连接ZO-1及Claudin-4表达变化。 结论 未发现产气荚膜杆菌肠毒素短肽片段对上皮细胞及其细胞间紧密连接的破坏作用,为进一步研究细胞间涎腺分泌机理提供基础。     

水通道基因治疗小型猪腮腺放射损伤的研究

目的研究腺病毒介导水通道基因对小型猪腮腺放射损伤的治疗效果及其相应表达关系.方法19只实验用小型猪一侧腮腺给予20Gy放射剂量照射,照射后17周,转导不同浓度的水通道蛋白基因、荧光素酶基因和病毒缓冲液,分析唾液流率变化和目的基因表达.结果109pfu AdCMVhAQP1转导后3天和7天腮腺唾液流率明显增加,分别恢复到放射前腮腺唾液流率81±18%(P=0.024)和69±20%(P=0.058),14天下降到转导前水平,对照组均未见腮腺唾液流率明显变化.转导109pfu AdCMVhAQP1组免疫组织化学显示,AQP1主要表达在导管上皮,Western blotting分析有外源性水通道蛋白表达,而对照组未见AQP1表达.结论109pfu AdCMVhAQP1明显增加小型猪腮腺放射损伤唾液流率,转导的水通道基因具有潜在治疗涎腺放射损伤的临床应用价值.     

转化生长因子β1对口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞纤维黏连蛋白基因EDA片段调节作用的探讨

目的探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）对口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞中纤维黏连蛋白（fibronectin，FN）基因EDA片段的调节作用。方法应用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR），分别从蛋白及mRNA水平观察口腔鳞癌及腺样囊性癌高、低转移潜能细胞中加入外源性TGF-β1后FN基因EDA片段的表达变化情况。结果3株细胞加入TGF-β1组与未加TGF-β1组EDA片段蛋白表达阳性细胞率比较显示，口腔鳞癌细胞株（Tca83）阳性细胞率由15．4±4．1增加到50．7±10．5，差异有统计学意义（P〈0．01），腺样囊性癌低转移株（SACC-83）阳性细胞率由71．9±4．8增加到86．1±5．5，差异也有统计学意义（P〈0．05），但腺样囊性癌高转移株（SACC-LM）阳性细胞率由93．3±2．4增加到94．1±3．4，差异无统计学意义（P〉0．05）。3株细胞加入TGF-β1组EDA^＋ mRNA表达较未加TGF-B1组明显升高，而EDA-mRNA的表达下降。且差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论高浓度TGF-β1可以影响口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞中FN基因EDA片段的剪切并促进EDA片段的表达，可能成为影响肿瘤细胞黏附能力及肿瘤侵袭和转移的相关因素。