软骨细胞中内质网应激信号通路的研究进展

内外环境多种刺激均可导致内质网中未折叠蛋白的积聚,引起细胞内的应激反应,改变细胞的功能和存活状态,这个过程称为内质网应激（ERS）。软骨细胞是关节软骨内唯一的细胞成分,低糖性损伤、白细胞介素-1β和一氧化氮以及一些药物均能使其发生ERS。ERS可引发蛋白激酶R样内质网调节激酶（PERK）、肌醇需酶（IRE）1和活化转录因子（ATF）6三条主要的信号通路构成未折叠的蛋白反应（UPR）。UPR中多种信号分子对软骨细胞的生长、程序性死亡以及软骨的炎症都有重要的影响,本文就ERS信号通路机制、PERK信号通路、IRE1信号通路和ATF6信号通路等研究进展作一综述。     

内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR-26a-5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD-L1表达

目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法 本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）和实时荧光定量PCR实验（RT-qPCR）检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白，包括蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）和葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达水平；以500 U/mL干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h，诱发HN4细胞产生内质网应激反应，收集HN4细胞分泌的外泌体，通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类，预测miRNA的靶基因，将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达，以WB...     

内质网应激与细胞凋亡研究进展

内质网应激主要表现为蛋白质合成障碍,会扰乱细胞稳态并最终导致细胞凋亡。该机制在神经变性性疾病、糖尿病、心血管类疾病及细胞肿瘤类疾病等领域研究进展迅速,在口腔疾病领域研究相对滞后。深入研究内质网应激机制在口腔疾病中发挥的作用,有助于该类疾病的预防与治疗。现就内质网应激机制作一阐述。     

内质网应激诱导的TRB3在人舌体鳞状细胞癌细胞中抑制AKT磷酸化

目的:研究在人舌体鳞状细胞癌发生内质网应激后,TRB3与AKT磷酸化的关系。方法:在人舌体鳞癌细胞Tca8113及CAL-27中,使用毒胡萝卜素或衣霉素诱导内质网应激,采用腺病毒质粒转染及短发夹RNA干扰技术验证TRB3与AKT磷酸化的关系。结果:Tca8113及CAL-27细胞通过毒胡萝卜素或衣霉素诱导24h后,TRB3mRNA及蛋白表达升高。在Tca8113细胞中,通过腺病毒质粒转染上调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达下降;通过短发夹RNA干扰下调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达升高。结论:在人舌体鳞癌细胞发生内质网应激后,TRB3蛋白表达上调并且抑制AKT磷酸化。     

氟化物诱导成釉细胞发生内质网应激的机制

氟斑牙是在牙齿发育阶段机体摄入过量的氟所引起的牙釉质发育不全,为慢性氟中毒病初期最典型的症状,其流行趋势具有一定的地域性,常发生于6岁前有高氟区定居史的患者。内质网是机体蛋白质加工、合成、运输的重要场所,也是细胞内重要的钙储存库之一。当细胞处于病毒感染、营养剥夺、钙超载、氧化应激等环境时,会造成内质网功能障碍,折叠蛋白能力下降,最终使未折叠蛋白在内质网内积聚产生内质网应激。研究发现,氟斑牙的形成可能与成釉细胞发生内质网应激有关。本文就氟化物诱导成釉细胞蛋白酶分泌减少、钙超载和氧化应激这3个因素导致内质网应激进行综述。     

内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用初探

目的:初步探讨内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用。方法:利用光学显微镜和透射电镜观察牙周组织中的凋亡细胞,免疫组化染色法检测慢性牙周炎患者及牙周健康者牙周组织中GRP78和CHOP的分布及含量变化。结果:慢性牙周炎组内浆细胞呈现凋亡状态,且GRP78和CHOP在慢性牙周炎组中的阳性表达明显高于正常组(P<0.05)。结论:内质网应激参与了慢性牙周炎的病理生理过程。     

内质网应激在牙周炎影响全身疾病过程 中的作用

牙周炎是发生在牙周组织的慢性感染性疾病,其发病机制及对全身系统疾病的影响一直是学术界关注的热点问题。许多学者认为,牙周炎不仅是一种常见的口腔疾病,更是全身疾病的潜在危险因素之一,但是目前关于牙周炎诱发全身系统疾病的具体机制尚不明确,可能与牙周致病菌、炎症因子及内质网应激等有关。近年来的研究发现,内质网应激是介导细胞凋亡的重要通路之一,并且与全身疾病密切相关。有研究显示,内质网应激在牙周炎诱导全身疾病过程中存在调控作用,但是目前关于内质网应激在牙周炎影响全身疾病过程中的作用研究较少,需要进一步探索。本文就内质网应激在牙周炎影响全身系统疾病中的研究进展进行综述,旨在探究牙周炎和全身系统疾病的内在联系,以期为牙周炎与其相关全身系统疾病的防治提供新的思路。     

咬合干扰对大鼠髁突软骨细胞内质网应激及凋亡的影响

目的:探讨咬合干扰致大鼠髁突软骨退变过程中内质网应激及凋亡相关分子的表达情况。方法:30只8周龄SD大鼠,采用大鼠上颌第一磨牙粘接不良修复体造成咬合干扰大鼠模型,4、8、12周后取颞下颌关节,甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,透射电镜观察超微结构,免疫组织化学染色检测GRP78、Caspase-12的表达情况。结果:实验组髁突软骨基质降解、细胞密度降低,内质网膨胀、断裂;GRP78阳性细胞率较对照组显著增多(P<0.05),Caspase-12阳性细胞率在8、12周时明显增加(P<0.05)。结论:咬合干扰后大鼠髁突软骨细胞发生内质网应激及内质网凋亡,可能是髁突软骨退变的重要机制之一。     

过量氟对成牙本质细胞内质网应激作用的动物实验研究

目的：观察不同浓度氟化物对大鼠切牙成牙本质内质网伴侣分子表达的影响,探讨氟对成牙本质细胞的损伤机制。方法：随机分组的30只大鼠分别饮用氟化钠浓度为0、75、150×10^6的自来水,建立慢性氟中毒模型,采用SP免疫组化法检测大鼠成牙本质细胞中Grp78,xBP-1和Caspase-12的表达。利用MetaMorph显微图像分析软件采集数据并使用spss13．0软件分析。结果：随氟化物浓度增加,成牙本质细胞GRP78、xBP-1、Caspase—12的表达强度增加,且各组问具有显著差异（P〈0．05）。结论：一定浓度的氟化物可以引起成牙本质细胞内质网应激,Grp78和xBP-1过表达,高强度的内质网应激会诱导成牙本质细胞通过活化Caspase-12导致成牙本质细胞凋亡。     

牙龈卟啉单胞菌来源的脂多糖通过X盒结合蛋白1调控脂肪细胞胰岛素信号通路的机制研究

探讨内质网应激（ERS）关键信号分子X盒结合蛋白1（XBP1）在牙周炎致病菌牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）来源的脂多糖（LPS）刺激下对脂肪细胞胰岛素信号通路的影响。     

沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC9和SCC25中,采用qRTPCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果。通过CCK8实验检测沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响;运用Transwell法检测沉默calnexin对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果qRTPCR显示calnexin siRNA能够有效沉默calnexin的表达;Western blot实验进一步证实calnexin siRNA对calnexin的沉默效果。CCK8实验显示沉默calnexin表达的第4天,第5天能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);Transwell实验提示沉默calnexin的表达能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移(P<0.001)。结论沉默calnexin可抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

内质网应激分子在慢性氟中毒大鼠成釉细胞中的表达

目的 研究不同浓度的氟化物对大鼠成釉细胞内质网应激分子表达的作用,探讨氟牙症形成的机制.方法 选择30只Wistar大鼠,随机分成A、B、C3组,并分别饮用氟浓度为0、75、150mg/L的自来水,8周后处死动物,并制备下颌切牙切片,通过HE染色、免疫组化、透射电镜、TUNEL检测等实验方法,观察3组大鼠成釉细胞内质网应激分子的表达及细胞凋亡情况.结果 随着氟浓度的升高,内质网应激分子GRP78 A组为阳性表达,B、C组为强阳性表达（F=27.42,P＜0.05）;XBP-1 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=139.7,P＜0.05）;Caspase-12 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=43.91,P＜0.05）;CHOP A组为阴性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=19.61,P＜0.05）;TUNEL检测显示氟浓度为150mg/L组成釉细胞凋亡数量显著高于75mg/L组和自来水组（F=124.02,P＜0.05）.利用MetaMorph显微图像分析软件对结果进行分析,用spss13.0软件包进行统计处理.结论 大鼠饮用高浓度的氟化水可激活内质网应激分子,导致成釉细胞产生内质网应激,并最终诱导细胞发生凋亡.     

氟对大鼠成釉细胞GRP-78和caspase-12表达的影响

目的研究GRP-78和caspase-12在氟致大鼠成釉细胞内质网应激和细胞凋亡中的作用,探讨氟所介导的内质网应激是否导致细胞凋亡。方法应用CCK8和流式细胞术观察不同浓度的氟对成釉细胞活性及凋亡数量的影响,以实时定量PCR和Western印迹法检测氟对内质网伴侣分子GRP-78和caspase-12基因和蛋白表达的影响,应用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着氟浓度的不断增加,大鼠成釉细胞活性呈逐渐下降趋势,流式细胞术同样显示发生凋亡的细胞数量逐渐上升;实时定量RT-PCR和Western印迹结果显示,GRP-78和caspase-12的表达量随着氟浓度增加而增加。结论过量氟介导了大鼠成釉细胞内质网应激,并且通过内质网应激,引起细胞凋亡。     

氟对大鼠切牙成釉细胞内质网伴侣分子表达的影响

目的：研究不同浓度氟化物对大鼠切牙成釉细胞的影响,探讨内质网应激在氟斑牙形成中的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。观察大鼠切牙成釉细胞的形态学和GRP78、XBP-1、CRT和caspase-12表达的改变,采用MetaMorph显微图像分析软件和SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：随着饮水氟离子浓度的升高,切牙逐渐出现氟斑牙症状。免疫组化结果显示,CRT(F=11.72,P<0.05)、GRP78(F=27.42,P<0.05)、XBP-1(F=139.7,P<0.05)、caspase-12(F=43.91,P<0.05)表达随氟离子浓度的升高而升高,且各组间均具有显著性差异。结论：成釉细胞在一定浓度的氟化物作用下,其CRT、GRP78、XBP-1和caspase-12 均过表达,表明成釉细胞处于内质网应激状态,且caspase-12是导致细胞凋亡的重要途径。     

口腔鳞癌细胞体外侵袭与血管内皮生长因子和明胶酶-A表达的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)和明胶酶 -A(matrixmetalloproteinase -2 ,MMP -2 )的表达与口腔鳞癌转移的相关性及VEGF和MMP -2的关系。方法 :应用Boyden小室体外侵袭实验比较口腔鳞癌细胞系TSCCa和转移癌细胞系GNM的体外侵袭力 ;采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测两细胞系中VEGF和MMP -2mRNA表达情况 ,同时用酶联免疫吸附实验 (ELISA)的方法定量测定口腔鳞癌TSCCa细胞系和颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF和MMP -2的活性。结果 :Boyden小室体外侵袭实验表明转移癌细胞系GNM的体外侵袭力较强 ,其穿膜细胞相对百分率为 (40± 3.6 ) %,而口腔鳞癌细胞系TSCCa体外侵袭力相对较弱 ,其穿膜细胞相对百分率为 (16± 3.2 ) %,两者差异具有显著性 (P <0 .0 5 ) ;RT -PCR结果显示GNM细胞VEGF和MMP-2mRNA表达水平均较TSCCa细胞高 (P <0 .0 5 ) ;ELISA法显示颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF和MMP-2的活性显著高于口腔鳞癌细胞系TSCCa(P <0 .0 5 )。结论 :口腔鳞癌细胞体外侵袭力与VEGF和MMP -2的表达正相关 ;在口腔鳞癌侵袭转移中 ,VEGF与MMP -2可能具有某种内在联系 ,有可能作为反映口腔鳞癌侵袭转移的生物学指标。     

体外氧糖剥夺培养条件促进人牙髓细胞内质网应激的研究

目的 通过氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)体外模拟细胞缺血缺氧,观察人牙髓细胞(hu-man dental pulp cells,hDPCs)内质网应激变化,为缺血缺氧条件调控hDPCs的机制研究提供依据.方法 应用无糖DMEM培养液联合低氧培养(体积分数2％O2)构建hDPCs...     

内质网应激关键因子PREK在应力加载下成肌细胞凋亡中的作用及机制

目的 研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)在这一过程中的作用及机制。方法 构建L6细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,频率10个循环/min,每循环包括3 s拉伸及3 s舒张,加力时间为2、6、12、24 h,以不加力组为对照组。应用DAPI染色观察各组细胞凋亡情况;应用实时荧光定量PCR检测各组PERK、CHOP mRNA的表达;应用Western免疫印迹检测各组PERK、p-PERK的表达变化。加入PERK抑制剂后重复实验,检测各组细胞凋亡情况,PERK、CHOP mRNA 的表达变化及p-PERK的蛋白表达变化。采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。结果 DAPI染色显示,L6大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h时达到凋亡最大值。PERK被抑制后,加力组的细胞凋亡程度与对照组无显著差别。RT-PCR 结果显示,随着加力时间的延长,CHOP mRNA 的表达逐渐增加;PERK mRNA 表达无差异。Western免疫印迹结果显示,p-PERK蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高,总蛋白PERK的表达无明显变化;加入PERK抑制剂后,CHOP的mRNA表达与对照组无显著差异,p-PERK蛋白表达与对照组无显著差异。结论 内质网应激关键因子PERK参与了周期性应力条件下的成肌细胞凋亡,其作用机制可能与PERK磷酸化有关。     

KLF4对口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨KLF4对人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖抑制作用.方法 构建KLF4慢病毒表达载体,并转染人口腔鳞癌细胞系CAL27,转染不含KLF4开放读码框的慢病毒载体LV105作为对照.采用RT-PCR、免疫细胞化学法对KLF4表达进行鉴定.MTT实验、流式细胞术检测KLF4对口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖抑制作用.结果 RT-PCR、免疫细胞化学实验均表明实验组细胞KLF4的表达明显高于对照组(P＜0.01).MTT实验结果表明与对照组CAL27/LV105组相比,CAL27/KLF4能够抑制细胞的增殖能力(P＜0.01).CAL27/KLF4主要通过使细胞周期中的G2/M期阻滞来抑制CAL27细胞的增殖(P＜0.01).结论 KLF4转染能够抑制口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖能力,可能在口腔鳞状细胞癌中作为抑癌基因发挥作用.     

TNP-470作用于体外培养GNM细胞系的形态学研究

目的:观察TNP-470作用于体外培养的人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞系GNM后的形态学改变,探讨TNP- 470的作用机理。方法:利用体外培养技术,采用相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察法,观察TNP-470对GNM细胞形态及超微结构的影响。结果:TNP-470(2Lg/ml)作用于GNM细胞48 h,大量细胞变圆、细胞膜皱缩,并出现较多悬浮死亡细胞。作用72 h后,扫描电镜下可见细胞表面的微绒毛数量减少、长度变小、细胞一端有较大的球状突; 透射电镜下可见GNM细胞大量坏死、线粒体和内质网破坏。结论:TNP-470对GNM细胞具有明显杀伤作用;TNP- 470可使GNM细胞线粒体和内质网发生破坏,这可能是其具有直接癌细胞毒作用的机制之一;TNP-470可使GNM 细胞膜表面结构发生改变。