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牙龈卟啉单胞菌FtsZ的C末端在FtsZ-FtsA相互作用中起着关键作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌FtsZ与FtsA之间相互作用的功能区域。方法:通过缺失诱变法构建了C末端缺失变异型的PgFtsZ(ZΔC01,ZΔC02,ZΔC03),并表达和纯化了这些蛋白质,同时进一步通过免疫印迹法来鉴定这些C末端缺失变异型的PgFtsZ。然后,通过overlay assay法,以牛血清白蛋白为阴性对照,检测了这些C末端缺失变异型及野生型PgFtsZ和PgFtsA相互作用的特性。结果:野生型PgFtsZ与PgFtsA表现出极强的结合特性,然而去除C末端的73个氨基酸残基的ZΔC01,则表现出极弱的结合特性,或者当进一步去除C末端的128和177个氨基酸残基的ZΔC02和ZΔC03,同ZΔC01一样也表现出与PgFtsA极弱的结合特性。结论:PgFtsZ和PgFtsA相互作用的功能区域位于PgFtsZ的C末端。 相似文献
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目的:探讨牙龈卟啉单胞菌FtsZ(PgFtsZ)第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂过程中的作用。方法:通过site—directed mutagenesis技术,采用megaprimer方法,使用三个引物进行两轮的PCR,构建Pg—FtsZ第322位甘氨酸的点变异型质粒pYW9(ZG322P,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由脯氨酸取代的点变异型基因)和pYW10(ZG322H,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由组氨酸取代的点变异型基因),然后将质粒pYW9、pYW10和pEZ1(携带野生型PgFtsZ的基因)分别转化到Escherichia coli BL21(DE3)pLysS中进行表达、分离和纯化目的蛋白质。同时将载体pET3a也转化到E.coli BL21(DE3)pLysS中作为阴性对照。进一步通过免疫印迹法鉴定构建的点变异型ZG322P和ZG322H。E.coli的形态通过显微镜观察。结果:野生型PgFtsZ的过表达导致E.coli细胞分裂的明显抑制,含质粒pEZl的E.coli和仅含有载体作为对照的E.coli相比延长大约20倍。然而点变异型ZG322P和ZG322H的过表达并未引起E.coli细胞分裂的抑制,即含质粒pYW9的E.coli和含质粒pYW10的E.coli表现出正常的形态,与仅含有载体作为对照的E.coli细胞的形态相似。免疫印迹分析表明野生型PgFtsZ、点变异型ZG322P、ZG322H在相同位置出现阳性带,并且表达水平相似。结论:牙龈卟啉单胞菌FtsZ第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂中起着重要的作用。 相似文献
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目的:研究小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1在成骨分化过程中,牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对EphA2表达的影响。方法:使用终浓度1mg/L的Pg-LPS与MC3T3-E1共培养,分别在第3、7、14天3个时间点,采用RT-PCR和Western-Blot技术测定EphA2的表达和成骨相关基因的表达,并通过PNPP法测定碱性磷酸酶活性。结果:RT-PCR结果提示,在第3天和第7天,实验组比对照组EphA2基因表达分别增高4.5倍和1.3倍,两组之间存在显著差异(P〈0.05)。同时成骨标志物ALP和Sp7基因表达降低,与对照组相比差异有显著性,但Runx2和ColⅠ基因的表达则无明显差异。但是在第14天,实验组和对照组之间EphA2和成骨相关基因表达均无显著性差异。Western-Blot结果提示,在第7天实验组比对照组EphA2蛋白表达增加。结论:Pg-LPS对前成骨细胞系MC3T3-E1细胞,在成骨分化的早期和中期能够促进EphA2的表达,但是在成骨分化晚期对EphA2的表达则无明显作用。 相似文献
4.
目的:初步探究Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)在慢性牙周炎诱发大鼠肝脏炎症中的作用。方法:将24只雄性Wistar大鼠随机分成两组,对照组和牙周炎组每组各12只,2%戊巴比妥钠麻醉下检测牙龈出血指数、牙周探诊深度及松动度;将20μL牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS)(1 g/L)注射到大鼠双侧上颌第一磨牙龈沟及第一二磨牙龈间隙内,隔1 d注射1次,每周3次,连续6周。对照组不做处理。最后一次注射Pg-LPS 12 h后,2%戊巴比妥钠麻醉下检测牙周探诊深度、牙龈出血指数及松动度等3项牙周指标后将大鼠处死,取其上颌骨及肝脏,采用组织学方法、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、Western blot分别检测肝组织炎症反应情况及TLR4、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和蛋白表达水平。结果:牙周炎组大鼠牙周探诊深度、牙龈出血指数及松动度均重于对照组;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色结果显示慢性牙周炎大鼠肝组织内肝索结构紊乱,汇管区可见大量淋巴细胞浸润,大量肝细胞呈空泡样改变;qRT-PCR结果显示慢性牙周炎组大鼠肝组织TLR4、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平较对照组升高;Western blot结果显示TLR4蛋白表达与基因表达一致。结论:TLR4在慢性牙周炎诱发大鼠肝脏炎症性改变的过程中发挥着重要的作用。 相似文献
5.
病原相关分子模式(PAMP)和损伤相关分子模式(DAMP)是与免疫学息息相关的两个分子.DAMP是组织或细胞受到损伤和低氧等因素刺激后释放到细胞间或血液循环中的一类物质;PAMP则是病原体上的分子结构.两者均被模式识别受体(PRR)识别引起免疫应答.目前,已经有研究表明,DAMP和PAMP与慢性炎症疾病和自身免疫性疾病有关.本文就PAMP和DAMP分子在免疫炎症反应中的作用作一综述. 相似文献
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牙龈卟啉单胞菌是牙周炎的主要致病菌,其侵袭牙周组织后引起大量炎症细胞浸润,并调控巨噬细胞极化,从而引发牙周组织的炎症反应.巨噬细胞具有很强的可塑性,在不同的微环境下可分化为具有不同表型和功能的细胞,此过程被称为巨噬细胞的极化.极化的巨噬细胞能够释放大量促炎因子,导致牙周组织的炎症反应,在牙周炎的发生、发展过程中起重要作用;同时又能产生某些杀菌物质,发挥其抗病原微生物的功能.本文就近年来巨噬细胞极化在牙周炎发生、发展过程中的作用进行综述. 相似文献
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有关牙周炎病因的关键致病菌假说近年来引起学者们的关注,该假说认为牙龈卟啉单胞菌在牙周炎的发病过程中发挥着重要作用,是牙周炎的关键致病菌.牙龈素是牙龈卟啉单胞菌产生的重要致病因子之一,它可以协助牙龈卟啉单胞菌逃逸巨噬细胞、中性粒细胞及补体系统的杀伤作用.本文就牙龈素促进牙龈卟啉单胞菌免疫逃逸的机制相关研究进展作一综述,对这一机制的深入了解有助于进一步理解牙龈素的致病机制,同时也可以为牙周炎的防治探索新的途径. 相似文献
8.
在细菌细胞分裂过程中 ,一系列的相关蛋白质参与这一过程 ,其中FtsZ(filamentoustemperature sensitiveproteinZ)通过在未来细菌细胞分裂的中点处聚合成FtsZ环发挥着极其重要的作用。在本实验中 ,我们探讨了牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)的FtsZ(PgFtsZ)的体外聚合特性 ,以期为研制和开发干扰Pg菌细胞分裂的抗菌剂奠定实验基础。1.材料和方法 :(1)PgFtsZ的C末端缺失变异型质粒 pYW 1和 pYW 4在以前的实验中构建。(2 )PgFtsZ的N末端缺失变异型质粒的构建 :使用相同的downstream引物和两个不同的upstream引物 ,通过PC… 相似文献
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本文利用放射免疫技术对20例患急慢性炎症牙髓及16例正常牙髓的前列腺素E_2(PGE_2)进行测定。其结果是急慢性牙髓炎组PGE_2含量分别为正常对照组9.07倍及5.20倍,经统计学处理差别非常显著,而且急性牙髓炎是慢性牙髓炎组的1.74倍,经统计学处理差别显著,说明PGE_2这种炎症介质在牙髓炎中同样发挥其致炎作用,尤其是在急性牙髓炎中。 相似文献
10.
目的 牙周炎和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展与活性氧(ROS)的大量积累密切相关。ROS参与调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子-κB(NF-κB)信号分子的激活,当该信号分子被ROS过度激活后可引发机体内环境紊乱。因此,本研究旨在探究ROS/JNK/NF-κB信号分子在牙周炎诱导肝损伤中的作用机制。 方法 将12只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,在牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙颈部进行钢丝结扎构建牙周炎模型,8周后检查大鼠牙周临床指标并处死,Micro-CT重建牙槽骨三维结构并分析牙槽骨吸收情况,组织病理学分析牙周及肝组织的病理改变,MitoSOX red试剂检测肝组织中ROS含量,生化试剂盒检测肝功指标和氧化应激生物标志物,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝组织中NF-κB、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、JNK、NF-κB、Bax、Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测肝细胞凋亡。 结果 Micro-CT结果显示,牙周炎组大鼠牙槽骨骨质吸收明显,且釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离明显大于对照组。组织病理学结果显示,牙周炎组大鼠牙周组织内可见大量炎症细胞浸润和牙槽骨明显吸收;肝组织结构破坏,可见大量气球样变和红色脂滴形成。MitoSOX red染色结果显示牙周炎组肝组织中ROS含量明显升高。生化检测结果显示,牙周炎组血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量升高;肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)含量降低,丙二醛(MDA)含量升高。qRT-PCR和Western blot结果显示,牙周炎组肝组织中IL-6、TNF-α、Bax和NF-κB mRNA及P-JNK/JNK、NF-κB、Caspase-3和Bax蛋白表达水平较对照组显著上升,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降。TUNEL染色结果显示牙周炎组肝组织中凋亡细胞数量明显增多。 结论 ROS/JNK/ NF-κB信号分子通过调控细胞凋亡参与牙周炎诱导肝损伤。 相似文献