C518大鼠膝关节正常和退变软骨细胞形态特征观察

目的对C518大鼠膝关节正常和退变软骨细胞形态特征进行观察。方法选取C518大鼠膝关节软骨细胞株,对其进行复苏、培养、诱导退变等处理后,绘制正常和退变软骨细胞的生长曲线,再通过HE染色和甲苯胺蓝染色对比观察C518大鼠膝关节正常和退变软骨细胞形态特征。结果正常的软骨细胞在繁殖速度、繁殖数量上都优于退变的软骨细胞。退变软骨细胞呈长梭形和多角形,细胞核变形、萎缩。正常软骨细胞的HE染色细胞质呈紫红色,细胞核呈紫蓝色,核仁呈深紫色;甲苯胺蓝染色细胞质呈淡蓝色,细胞核呈蓝色,细胞核仁呈深蓝色。退变软骨细胞HE染色和甲苯胺蓝染色中细胞质、细胞核、核仁的着色均相应变浅。结论 C518大鼠膝关节退变软骨细胞的病理变化可见细胞形态呈长梭形和多角形,随着退变加剧,增殖速度放缓、数量减少,同时出现衰老、死亡。退变软骨细胞HE染色和甲苯胺蓝染色中细胞质、细胞核、核仁的着色均变浅,说明退变软骨细胞中的蛋白聚糖含量在减少。     

pH值对硼砂甲苯胺蓝染色的影响

目的探讨不同pH值的缓冲液对硼砂甲苯胺蓝染色的影响。方法将血涂片分为两组,第1组用硼砂甲苯胺蓝染色10min,第2组采用瑞氏染色10min,为对照组,每组由9张血涂片组成,每张血涂片染色时采用不同pH值的缓冲液,观察染色效果。结果第1组与单纯用硼砂甲苯胺蓝染色相比,血涂片加用缓冲液后再用硼砂甲苯胺蓝染色效果更好,细胞结构清晰,随缓冲液pH值增高,细胞胞质与细胞核着色逐渐加深,当pH值大于9时,核浆对比不再清晰。pH值为4～11之间,淋巴细胞核仁均清晰可见,pH越低核仁越清晰。第1组成熟淋巴细胞核仁立体感强,第2组成熟淋巴细胞核仁不清晰,无法与异染色质相鉴别。结论硼砂甲苯胺蓝染色效果与缓冲液的pH值密切相关,硼砂甲苯胺蓝染色可使部分成熟淋巴细胞核仁显色。     

显示细胞DNA和RNA的甲基绿-派洛宁技术的改进

核酸染色应用较广泛,临床上多用于免疫性疾病,肿瘤的诊断和研究,显示细胞DNA和RNA的甲基绿-派洛宁技术是最常用的方法之一,它们具有相对的特异性。由于这种技术在染色时出现的易变性和反复无常,效果不一致,是比较难掌握的染色技术。本文结合我们的研究工作,采用改良的Kurnick(1     

明视野显微镜下特异性区分斑马鱼视网膜细胞核的方法

目的 结合 JB-4塑胶树脂包埋和福尔根染色寻找一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法。方法 分析 JB-4切片厚度、盐酸水解程度及 Schiff 反应条件对细胞核染色的影响;观察不同切片厚度对细胞核可分辨度的影响;比较福尔根染色与亚甲天蓝 II 及核固红染色对细胞核观察的影响。结果 盐酸浓度越高、浸润时间越长,染色程度越强;盐酸浓度越低、浸润时间越短,染色程度越弱。低浓度的盐酸可以通过延长浸润时间而提高染色强度。染色强度随着 Schiff 浸润时间的延长而增加,2 h 达到最强染色。在2μm 组织切片中单个细胞核比在3μm组织切片、4μm 组织切片及6μm 组织切片中显示出更清晰的核边界。与亚甲天蓝 II 和核固红染色相比,福尔根染色特异性和稳定性更强。结论 通过本实验结果分析发现了一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法,这个简单可靠的染色方法可以用于细胞计数。     

改良骨髓铁染色方法在临床中的应用

目的 探讨改良骨髓铁染色方法的临床应用价值.方法 对健康者、缺铁性贫血和溶血性贫血患者骨髓涂片采用常规铁染色方法及改良铁染色方法进行染色,观察细胞内、外铁.结果 细胞外铁经酸性亚铁氰化钾染色后可直接进行观察;细胞内铁经甲基绿复染后观察效果优于核固红.结论 改良铁染色方法易于观察细胞内、外铁,适于临床常规应用.     

显示细胞DNA和RNA的甲基绿-派洛宁技术的改进

核酸染色应用较广泛,临床上多用于免疫性疾病,肿瘤的诊断和研究,显示细胞DNA和RNA的甲基绿-派洛宁技术是最常用的方法之一,它们具有相对的特异性.由于这种技术在染色时出现的易变性和反复无常,效果不一致,是比较难掌握的染色技术.本文结合我们的研究工作,采用改良的Kurnick(1955)法取得较好的效果,报道如下.     

大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

背景:国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究,需要用不同的染色方法对研究结果进行分析,但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少.目的:探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点.方法:取正常大鼠膝关节软骨,行苏木精-伊红、番红O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色,观察软骨结构. 结果与结论:苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线,分别为蓝色、红色和蓝色,番红O和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强,番红O染色对潮线的观察优于其他染色方法.苏木精-伊红染色关节软骨4层结构清晰,软骨细胞呈柱状排列,基质呈均匀呈嗜碱性染色.番红O染色显示4层结构层次清楚,基质深层染色最红.阿尔辛蓝染色显示,pH 1.0时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色,pH 2.5时阿尔辛蓝染色较深.甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色.番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色,深层颜色较深,软骨细胞周围蓝染;番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明.提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构,但以番红O染色显示软骨各层和潮线结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚.     

Feulgen染色用于精子形态观察

目前精子形态观察多采用瑞氏染色法，染色效果欠佳，影响形态观察。我们在试验中发现Feul吕en染色对精子形态染色效果好，现介绍如下。1试剂与方法1．1试剂①1mol／LHCI；②Schiff试剂；③10g／L淡绿。1．2方法将液化精液涂片，吹干。95％乙醇固定10min，1mol／LHCI（60”C）水解5～8min，Schiff试剂染20min（室温），淡绿复染10s。水洗，晾干后镜检。2结果精子形态清晰，核染成紫红色，尾部成淡绿色；红、白细胞清晰可见；精子正面呈卵圆形，侧面呈锥体形，核染色强度由前向后渐增。3讨论3．l＆色原理精子核由结合蛋白的DNA构成，利…     

固蓝BB盐的浓度对特异性酯酶染色灵敏度的影响

氯醋酸AS-D萘酚酯酶(SE)染色对确诊急性粒细胞白血病具有重要价值。固蓝RR盐的浓度可对SE染色灵敏度产生大的影响[1]。本文的目的是探讨pH7.4时,常用偶联剂固蓝BB盐的不同浓度对SE染色灵敏度的影响,以确定固蓝BB盐的实际有效浓度。1材料与方法1.1实验步骤与孵育液配制参照文献[1,2]设计本实验操作步骤。取同一病人的骨髓片4张,经4℃保存的FAB固定液[1,2]固定30s～1min后,水洗晾干,分别浸入含固蓝BB盐[2]4种不同浓度的孵育液中。于37℃中温育30min[1],水洗后用苏木素复染细胞核。孵育液配制如下:每份取0.067mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.…     

自体血清培养新西兰大白兔关节软骨细胞

目的：改进与探讨新西兰大白兔软骨细胞体外培养的方法。方法：取3月龄新西兰大白兔自体血,制备自体血清备用,无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法,分离关节软骨细胞并应用新西兰大白兔自体血清进行原代、传代培养;采用形态学观察,甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对膝关节软骨细胞进行鉴定,MTT法检测软骨细胞的增值能力;结果：倒置显微镜下见原代软骨细胞2 h后开始贴壁,8 h可形成单层,24 h即可传代。第1~5代细胞表型稳定,增殖力良好。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞核呈深染色,细胞质呈淡蓝色;免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色表达,MTT检测显示前5代软骨细胞增值能力强,无明显差异;结论：结果表明自体血培养的前5代新西兰大白兔节软骨细胞均可用于膝骨关节炎的研究。     

不同代次免髓核细胞的形态学特征和生物学性状

背景：椎间盘退变是个慢性、复杂的过程,然而椎间盘退变其发生机制尚未完全阐明,很难自行修复。近年来研究细胞移植治疗椎间盘退行性变尚处在实验室阶段。研究髓核细胞的生物学性状可为研究椎间盘退变机制、组织工程构建椎间盘、基因治疗等提供理论依据。目的：研究兔不同代次髓核细胞的生物学特性,旨在找出合适的种子细胞去治疗椎间盘退变性疾病。方法：从新西兰大耳白兔椎间盘髓核组织中,分离并培养髓核细胞同时进行培养传代,对原代及第3,4代髓核细胞进行苏木精一伊红染色观察细胞形态学变化;甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达;反转录PCR法测定Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平,观察各代髓核细胞生物学特性的变化。结果与结论：兔椎间盘髓核细胞可以在体外培养并进行传代,原代髓核细胞一般需7d左右贴壁,形状呈类圆形或多角形,原代和第3代髓核细胞都呈圆形或多角形,活力较强,苏木精-伊红染色后细胞核被染成均一蓝黑色,胞浆呈现淡粉色;髓核细胞经过甲苯胺蓝染色后,胞浆内呈现天蓝色,通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色后,胞浆内表现为黄褐色沉淀。到第4代细胞出现退变,Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平较前几代细胞显著下降。前3代的髓核细胞代谢旺盛,表型一致,聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达正常,传第4代后髓核细胞开始出现衰老、退变。     

脊髓缺血再灌注损伤中即早基因表达及细胞凋亡的研究

目的细胞凋亡是受一些基因控制的,很多因素可激活这些基因而导致细胞凋亡。研究脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。方法制作SCII动物模型,采用光镜、荧光显微镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术,研究SCII后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。结果缺血30min,血灌流量平均下降85.37%,再灌流即刻血灌流量迅速升高,再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min,血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平,以后逐渐降低。缺血的部分再灌注后出现“二次瘫痪”现象。荧光染色发现缺血再灌注后脊髓神经细胞有凋亡的形态学改变:如核固缩、边聚等。实验组动物脊髓神经细胞核中出现棕色c-fos和c-jun的阳性表达产物,对照组仅有轻微c-fos和c-jun表达。结论脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤。脊髓缺血再灌注后c-fos和c-jun的表达均增加,而且在SCII后细胞死亡以凋亡为主,c-fos和c-jun可能参与了I/R损伤诱导的神经细胞凋亡。     

基因防龋疫苗构建及其在哺乳动物细胞中的表达特征

背景葡聚糖结合蛋白B(gbpB)具有良好的免疫原性,但能否作为免疫防龋的候选基因疫苗有待研究.目的观察gbpB真核表达质粒在哺乳动物细胞COS-7的表达情况.设计设立对照的实验研究.地点和对象实验在解放军第四军医大学口腔医学院牙体病科完成,对象为Pbs-gbpB质粒(本实验室构建).干预通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-gnpB,脂质体转染法将其转染至COS-7细胞.免疫组化SABC法检测,DAB显色.主要观察指标转染后细胞胞浆、胞核着色情况.结果pcDNA3.1(+)-gbpB质粒转染的细胞胞浆中呈棕黄色染色,胞核中无着色,pcDAN3.1(+)空载体转染的细胞胞浆及胞核无着色,空白对照组也无着色.结论质粒pcDNA3.1(+)-gbpB转染COS-7后能够在细胞内翻译、表达,表达的蛋白质位于胞浆中,可与抗GbpB抗体特异性结合,具有抗原性,可作为基因疫苗.     

静脉注射托烷司琼对椎管内麻醉后感觉、运动神经阻滞的影响

目的探讨静脉注射托烷司琼对椎管内麻醉后感觉、运动神经阻滞的影响。方法椎管内麻醉下行经尿道电切术患者60例,随机均分为实验组和安慰剂组。实验组于麻醉前15 min静脉注射托烷司琼,安慰剂组静脉注射安慰剂。记录麻醉的最高脊髓水平、起效时间、运动神经阻滞水平、消退时间以及术中、术后感觉。同时记录不良反应。结果实验组平均手术时间明显低于安慰剂组。实验组感觉神经阻滞时间明显高于安慰剂组;2组运动神经阻滞时间、麻醉起效时间和运动、感觉恢复时间无统计学差异(P>0.05)。结论静脉注射托烷司琼不影响重比重布比卡因椎管内麻醉的起效时间、麻醉深度及维持时间,能够安全用于预防和处理麻醉相关的恶心、呕吐等不良反应。     

Induction of high mobility group box-1 in dorsal root ganglion contributes to pain hypersensitivity after peripheral nerve injury

Pro-inflammatory cytokine high mobility group box-1 (HMGB-1) is involved in inflammation in the central nervous system, but less is known about its biological effects in the peripheral nervous system. In the present study, the role of HMGB-1 in the primary afferent nerve was investigated in the context of the pathophysiology of peripheral nerve injury-induced pain hypersensitivity. Real-time PCR confirmed an increase in HMGB-1 mRNA expression in the dorsal root ganglion (DRG) and spinal nerve at 1 day after spinal nerve ligation (SNL). Induction of HMGB-1 mRNA was observed in both injured L5 and uninjured L4. Immunohistochemistry for HMGB-1 revealed that SNL-induced HMGB-1 expression in the primary afferent neurons and satellite glial cells (SGCs) in the DRG, and in Schwann cells in the spinal nerve. Up-regulation of HMGB-1 was associated with translocation of its signal from the nucleus to the cytoplasm. Injection of HMGB-1 into the sciatic nerve produces transient behavioural hyperalgesia. Neutralizing antibody against HMGB-1 successfully alleviated the mechanical allodynia observed after SNL treatment. Receptor for advanced glycation end products (RAGE), one of the major receptors for HMGB-1, was expressed in the primary afferent neurons and SGCs in the DRG, as well as in Schwann cells in the spinal nerve. These results indicate that HMGB-1 is synthesized and secreted into the DRG and spinal nerve, and contributes to the development of neuropathic pain after nerve injury. Blocking HMGB-1/RAGE signalling might thus be a promising therapeutic strategy for the management of neuropathic pain.     

胃扩张模型大鼠迷走神经背核胃相关神经元对不同针刺穴位的反应

背景：课题组的前期工作主要围绕孤束核在接受胃伤害性刺激和针刺穴位反应中所扮演的角色展开研究,而迷走神经背核与孤束核、最后区一起作为迷走神经复合体中不可或缺的组成部分,在调节胃功能中发挥了重要的作用。目的：观察针刺“足三里”、“内关”、“脾俞”、“肾俞”等不同神经节段穴位对胃扩张模型大鼠迷走神经背核胃相关神经元的影响。方法：在成功构建大鼠胃扩张造模的基础上,采用神经电生理学的方法,运用细胞外记录技术,找出迷走神经背核胃相关神经元,予以手针刺激“足三里”、“内关”、“脾俞”、“肾俞”等不同神经节段穴位各15s,记录来自体表的刺激对迷走神经背核胃相关神经元的影响。结果与结论：24只大鼠共记录到90个神经元放电,90个下丘脑室旁核神经元中与胃扩张相关的神经元有54个,54个胃扩张相关神经元中,对针刺足三里、内关、脾俞、肾俞有反应的神经元个数分别为44,39,38,27,有反应的神经元出现比例分别为82%,72%,70%,50%。提示针刺不同神经节段穴位均能不同程度地激活迷走神经背核参与调节胃运动。     

蛛网膜下腔移植SPIO标记的MSCs在大鼠脊髓损伤模型的MR活体示踪研究

目的 将超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)标记的骨髓间充质干细胞BMSCs通过蛛网膜下腔置管移植到脊髓损伤大鼠模型,以磁共振成像(MRI)观察其迁移和分布.方法 用携带绿色荧光蛋白的腺病毒(AD5/F35-EGFP)和SPIO标记分离纯化后的BMSCs,免疫荧光和普鲁士蓝染色显示标记效果.制作大鼠脊髓损伤模型,并将蛛网膜下腔置管成功的10只SD大鼠随机分为2组,将标记细胞(实验组,n＝5)和未标记细胞(对照组,n＝5)经蛛网膜下腔移植到模型鼠.在移植前、移植后3、7、14天用3T MRI对移植细胞进行活体示踪,并与损伤脊髓组织切片GFP表达进行对照.结果 AD5/F35-EGFP和SPIO可以高效地标记BMSCs,标记细胞表达绿色荧光,普鲁士蓝染色显示BMSCs胞质内出现蓝色铁颗粒,标记对细胞增殖活力没有明显的影响.蛛网膜下腔移植标记细胞到大鼠脊髓损伤模型,MRI显示损伤区域逐渐增强的T2低信号,组织切片荧光检查与MRI结果一致,未标记细胞组MRI无明显低信号改变.结论 SPIO纳米颗粒可有效标记BMSCs.蛛网膜下腔移植的BMSCs可迁移到脊髓损伤区域;利用MRI可对移植细胞进行活体示踪.     

Schwann细胞与筋膜共同培养的实验研究

目的 探讨Schwann细胞与筋膜共同培养的方法，为神经缺损修复提供实验基础。方法 将Schwann细胞与筋膜共同培养，免疫组织化学双染、相差显微镜连续观察及间接免疫荧光染色显示Schwann细胞胶质特异性标记蛋白S-100表达和BrdU掺入。结果 相差显微镜下可见筋膜周围有大量Schwann细胞，且生长迅速，胞体呈梭形，核为椭圆形，胞体两侧有两个细长的突起，并呈平行排列，少见成纤维细胞。形态学连续观察和S-100间接免疫荧光染色都显示BrdU掺入。筋膜BrdU和S-100免疫组织化学双染可见筋膜上有大量的BrdU和S-100双染阳性的Schwann细胞，胞核为深蓝色，胞浆红褐色。结论 在筋膜上有大量具有增殖活性的Schwann细胞，该筋膜可望用于修复神经缺损。     

罗哌卡因对腰硬联合麻醉下子宫全切术患者运动神经阻滞的影响

目的研究罗哌卡因对腰硬联合麻醉下子宫全切术患者运动神经阻滞的影响。方法收集2014年1月至2015年12月内蒙古自治区妇幼保健医院子宫肿瘤患者108例,将患者随机分为罗哌卡因组和左旋布比卡因组。主要观察指标为术中平均动脉压(MAP)、感觉神经阻滞时间、运动神经阻滞时间和Bromege评分。结果与左旋布比卡因组相比,罗哌卡因组患者运动神经阻滞时间显著缩短[(154.83±35.12)min vs.(190.24±33.06)min,P0.001],Bromege评分显著降低[(2.46±1.06)分vs.(2.89±0.79)分,P=0.02]。两组患者术中各个时间点的MAP、感觉神经阻滞时间、恶心、呕吐和头痛等并发症差异无统计学意义(P0.05)。结论与左旋布比卡因相比,罗哌卡因在腰硬联合麻醉下子宫全切术中是安全有效的,显著降低了患者运动神经阻滞时间。