不同代次免髓核细胞的形态学特征和生物学性状

背景：椎间盘退变是个慢性、复杂的过程，然而椎间盘退变其发生机制尚未完全阐明，很难自行修复。近年来研究细胞移植治疗椎间盘退行性变尚处在实验室阶段。研究髓核细胞的生物学性状可为研究椎间盘退变机制、组织工程构建椎间盘、基因治疗等提供理论依据。目的：研究兔不同代次髓核细胞的生物学特性，旨在找出合适的种子细胞去治疗椎间盘退变性疾病。方法：从新西兰大耳白兔椎间盘髓核组织中，分离并培养髓核细胞同时进行培养传代，对原代及第3，4代髓核细胞进行苏木精一伊红染色观察细胞形态学变化；甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达；反转录PCR法测定Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平，观察各代髓核细胞生物学特性的变化。结果与结论：兔椎间盘髓核细胞可以在体外培养并进行传代，原代髓核细胞一般需7d左右贴壁，形状呈类圆形或多角形，原代和第3代髓核细胞都呈圆形或多角形，活力较强，苏木精-伊红染色后细胞核被染成均一蓝黑色，胞浆呈现淡粉色；髓核细胞经过甲苯胺蓝染色后，胞浆内呈现天蓝色，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色后，胞浆内表现为黄褐色沉淀。到第4代细胞出现退变，Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平较前几代细胞显著下降。前3代的髓核细胞代谢旺盛，表型一致，聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达正常，传第4代后髓核细胞开始出现衰老、退变。