P27kip-1和细胞凋亡的研究进展

CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors,CDKI)p27Kip-1除了参与细胞周期调节,广泛抑制多种细胞周期蛋白-CDK复合物的活性外,它还参与细胞的凋亡、分化、细胞-细胞间黏附等多种生物功能的调节作用。本文对p27Kip-1和凋亡调节的研究进展作一综述。     

奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制

目的研究奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制。方法用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平处理A549细胞,MTT测定细胞增殖情况,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的奥氮平处理A549细胞,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平作用后的A549细胞增殖能力和克隆形成能力均明显低于0μM作用组(P0.05)。A549细胞经半数抑制浓度的奥氮平作用后,细胞G0/G1期比率升高,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、p27蛋白水平升高,CDK4、Cyclin D1蛋白水平降低,与未经奥氮平处理的细胞比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论奥氮平可以在体外抑制肺癌A549细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与下调CDK4、Cyclin D1蛋白,促进Cleaved Caspase-3、p27蛋白表达有关。     

超声联合微泡抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的观察超声联合微泡对血管平滑肌细胞(VSMCs)周期分布及细胞周期调节蛋白激酶(CDK2)和抑制物p27表达的影响,探讨超声联合微泡抑制VSMCs增殖的作用机制。方法体外培养的VSMCs经血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激后,以低频连续波超声(频率1MHz、声强为0.3W/cm2)联合脂质微泡(1μl/ml)辐照VSMCs60s。分别用流式细胞仪、免疫细胞化学法检测细胞周期分布和细胞周期调控蛋白CDK2、p27的表达。结果与对照组比较,PDGF-BB刺激组细胞G0～G1期细胞比例下降而S期细胞比例增高(P<0.01),CDK2表达上调而p27表达降低(P<0.01);与PDGF-BB组相比,超声联合微泡组G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P<0.01),CDK2表达下调而p27表达增高(P<0.01)。结论超声联合微泡下调CDK2蛋白和上调p27蛋白的表达,阻滞细胞周期进程,可能是抑制VSMCs增殖的机制之一。     

CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响

目的:研究CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响。方法:以人髓原细胞白血病细胞株HL-60为研究对象,通过调节胞内CDK1表达来研究TRF1表达及其变化对细胞增殖和周期的影响。实验分为对照、shRNA-NC、CDK1-shRNA、pcDNA和pcDNA-CDK1共5组。采用RT-PCR检测各组细胞中CDK1表达;集落形成检测细胞增殖;Western blot检测CDK1、PLK1、Aurora B、TRF1及周期蛋白p53、p27和cyclinA的表达。结果:与对照组相比,CDK1-shRNA组中PLK1、Aurora B磷酸化水平及TRF1表达显著下调(P0.05),细胞集落形成率显著下降,周期相关蛋白p53和p27表达显著升高而cyclinA表达则显著下降(P0.05)。这表明,干扰CDK1表达可抑制HL-60细胞增殖并延长其进入有丝分裂的时间,从而延长细胞周期。而与对照组相比,pcDNA-CDK1组中CDK1过表达则使PLK1、Aurora B磷酸化水平及TRF1表达显著上升(P0.05),克隆形成率显著升高,周期相关蛋白p53和p27显著下降且cyclinA表达显著上调(P0.05)。这表明,CDK1过表达可刺激不良反应发生,从而促进HL-60细胞的增殖并缩短细胞周期。结论:敲除CDK1可抑制PLK1和Aurora B磷酸化并负向调节TRF1,从而抑制白血病细胞的增殖。     

基因FoxM1介导DFOG抑制人乳腺癌细胞生长和诱导凋亡的研究

目的探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)对人乳腺癌细胞生长、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞。平皿集落形成法测定DFOG对乳腺癌细胞集落形成率的影响;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及分析细胞周期分布;Western blotting分析转录因子FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin、p27kip1表达。结果 DFOG以浓度依赖的方式抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,并且伴随G2/M期细胞周期阻滞。DFOG能下调FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin表达,上调p27kip1蛋白表达。通过siRNA干扰技术下调FoxM1表达能增强DFOG对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。结论 DFOG显著抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,下调FoxM1表达可能是其作用机制之一。     

p27^kip1、Skp2与肿瘤

细胞周期的运行受多种因素所调控。有两个主要调控点 :一个处于G1/S转折点 ,是控制细胞进入S期的控制点(G1期检测点 ) ,另一个处于G2 /M转折点 ,是控制细胞进入M期的控制点 (G2 期检测点 )。参与细胞周期调控的主要因子有 :周期蛋白 (cyclin) ,周期蛋白依赖性激酶 (cyclindepen dentkinase,CDK ) ,周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CKI)。CDK与cyclin CDK复合物正性催化细胞周期过程 ,而CKI通过与cyclin ,CDK或cyclin CDK复合物结合抑制并阻断细胞周期进程。p2 7kip1就是一种新发现的CKI ,p2 7kip1活性的改变影响细胞周期进程 ,进而…     

P27kip1在恶性肿瘤中的调控及其作用

P27kip1蛋白属于细胞周期调控蛋白Cip/Kip家族,是细胞周期负性调控因子,在人体多种恶性肿瘤细胞增值、分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用,因此与p27kip1蛋白相关的研究成为近年研究热点,目前认为,p27kip1基因是一种抑癌基因,细胞内的许多蛋白及因子可以在各种水平参与p27kip1基因表达的调控.现就p27kip1的生物学功能及在恶性肿瘤中的调控及其作用研究进展进行综述.     

Skp2和p27kip1在浆液性卵巢肿瘤组织中的表达与临床意义

p27基因是近年来发现的一种抑癌基因,目前认为其编码的产物p27kip1蛋白为一种细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂,可以通过多种方式参与细胞周期调控,阻止细胞从G1期到S期的转变,最终抑制细胞分裂、增殖,促进细胞分化、凋亡.Skp2作为泛素蛋白酶体途径的底物识别序列,因能泛素化降解p27kip1而与肿瘤关系密切.二者的异常表达与肿瘤组织发生发展以及生物学行为有着密切的关系,是判断肿瘤恶性程度、转移与预后的重要参考指标.     

EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期调节蛋白p27 mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0/G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期调节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

肿瘤标志物JAB1、Akt和p27kip1的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

细胞周期调控异常是肿瘤发生发展的重要机制之一,很多肿瘤标志物的异常表达均能影响细胞的正常增殖从而导致肿瘤的发生。C-JUN激活区结合蛋白1（JAB1）通过与多种蛋白相互作用,参与多种信号途径,在人多种癌症中JAB1表达增高,同时介导p27kip1出核转运及泛素化降解从而降低其在胞浆中的水平,促进肿瘤细胞增殖;Akt在细胞浆的表达增高,使p27kip1磷酸化并抑制p27kip1进入细胞核发挥其生物学功能,Akt也可能参与p27kip1的出核转运及蛋白降解,促进p27kip1降解,进而影响细胞周期的调控,促进肿瘤细胞增殖;抑癌基因p27kip1在肿瘤中表达降低,促使肿瘤细胞增殖;在JAB1介导的p27kip1出核转运中可能有Akt的参与;在HER2介导的PI3K/Akt/p27通路中又有JAB1的参与,三者相互作用形成复杂的网络,共同调节信号转导,促进肿瘤的发生发展。     

p16基因与口腔鳞癌发生发展关系的研究

对于抑癌基因来说，除了p53在口腔鳞癌发生中有重要作用，p16的异常改变与口腔鳞癌的发生也有密切关系。p16又称多种肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor，MTS)，是第一个发现的最直接抑制肿瘤细胞发生的细胞固有成分，它是通过直接、专一地抑制细胞周期CDK4＼CDK6起作用的基因，它属于细胞周期蛋白依赖性抑制因子(CKI)的一种：CKI是一类小分子蛋白质，     

肿瘤细胞分化与凋亡的相关基因与信号传导分子的研究进展

肿瘤发生与发展是一个多因素作用、多基因参与和经过多个阶段才最终形成的极其复杂的生物学现象。癌基因、抑癌基因的发现和细胞信号传导通路的阐明,极大地丰富了人们对细胞癌变机制的认识。目前,研究肿瘤信号传导机制,选择性阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号传导通路,破坏其自控性生长调节机制,正在成为极具吸引力的研究热点。本文就细胞分化相关基因、细胞凋亡相关基因及信号传导分子的研究进展,做一综述。1细胞分化相关基因及信号传导分子p21、p27是调控细胞周期并与细胞分化密切相关的基因,同属于细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因…     

EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCS）对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法（MTT）观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞周期调节蛋白p27mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0／G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期词节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0／01期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

对肿瘤细胞中p27kip1蛋白功能的再认识

p27kip1(以下简称p27)蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点.传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子(cyclin dependent kinase inhibitor,CDKI),参与细胞周期的负性调控,在多种肿瘤细胞内存在p27蛋白低水平表达,且错位分布于细胞核外.     

三氧化二砷阻滞人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期作用及其相关机制

本研究探讨As2O3 对人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期的影响及相关的分子机制,为As2O3临床应用于Burkitt淋巴瘤的治疗提供依据。以人Burkitt淋巴瘤Namalwa细胞株为模型,用不同浓度As2O3作用不同时间,以MTT法、流式细胞术、RQ—PCR和Western—blot分别检测As2O3对细胞增殖、增殖周期和凋亡发生及细胞周期重要调节基因CyclinE、CDK2和P2I表达的影响。结果表明：As2O3显著抑制Namalwa细胞的生长增殖,并显示明显的浓度和时间依赖性;As20,明显阻滞Namalwa细胞于G1期,并显示明显的量效关系;As2O3诱导Namalwa细胞凋亡,呈现明显的作用浓度和作用时间依赖性;As2O3明显下调Namalwa细胞CyclinE、CDK2基因的转录及蛋白表达,明显上调CDK抑制蛋白P2j基因的转录及蛋白表达,且呈现出浓度依赖性。结论：As2O3明显抑制人Burkitt淋巴瘤细胞株Namalwa的生长增殖,此作用与As2O3阻滞细胞周期于G1期及诱导细胞凋亡有关,而As2O3对细胞周期的阻滞与其下调细胞周期的重要驱动基因CyclinE和CDK2的表达、上调CDK抑制因子P2I基因的表达密切相关。     

ASPP家族及其与p53相互作用的研究进展

p53是一个肿瘤抑制蛋白，它通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞，同时还会因为DNA的损伤增多，诱导细胞发生细胞凋亡。p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚，而最近发现的p53凋亡刺激蛋白-ASPP蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。ASPP蛋白家族与p53的作用主要是特异性增强p53的细胞凋亡功能，而对p53的细胞生长停滞功能则没有作用。ASPP蛋白家族增强p53的细胞凋亡功能是通过增强p53的促凋亡基因启动子与DNA的结合而促进细胞凋亡，现就此作一综述。     

RASSF1基因与肿瘤的关系

RASSF1基因位于染色体3p21．3，其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因，在多种实体肿瘤中表达异常，参与细胞周期和细胞凋亡的调控，并抑制细胞生长，但作用机理尚未阐明。     

RNA特异性干扰bcr-abl融合基因联合p27基因克隆对K562细胞的影响

本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern blot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株。流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%)。MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p0.01和p0.05)。结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡。RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。     

CDK2、p21和p27在生长激素腺瘤中的表达及CDK2抑制剂的体外应用

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期调节因子p21和p27在生长激素腺瘤中的表达水平,观察CDK2抑制剂环O6-己基甲基鸟嘌呤(O6)对GH3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法构建包含3例垂体和46例腺瘤标本的组织芯片,按Knosp分级将肿瘤分为侵袭组(n=15)和非侵袭组(n=31),免疫组织化学技术分析CDK2、p21和p27的蛋白水平,结合随访信息分析其与临床特性的关系。GH3细胞分为O6组(0. 4μmol/L和4μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO),细胞增殖实验MTS法检测细胞活力; Annexin V实验检测细胞凋亡; Brdu实验检测细胞周期,Western blotting实验检测CDK2、p21和p27变化。结果腺瘤标本中CDK2、p21和p27的H-score评分分别为(104. 8±28. 3)分、(195±39. 2)分、(158. 8±32. 3)分,CDK2在侵袭组表达较非侵袭组明显增高[(140±31. 7)分vs.(87. 8±26. 7)分],p21[(152. 3. 1±35. 2)分vs.(215. 7±41. 2)分]和p27[(118. 1±28. 4)分vs.(173. 7±34. 3)分]则明显降低(P 0. 05)。O6处理GH3细胞后,细胞活力与DMSO组相比,不同剂量O6处理组细胞活力分别为DMSO组的(84. 5±7. 6)%和(76. 2±7. 1)%(24 h)、(75. 7±7. 3)%和(69. 6±6. 2)%(48 h)、(70. 2±6. 4)%和(61. 3±5. 5)%(72 h)。处理24 h后,O6组Annexin V阳性细胞分别为(8. 86±1. 78)%(P 0. 05)和(19. 36±4. 20)%(P 0. 01),而DMSO组为(3. 35±0. 73)%,PI阳性则分别为(3. 82±0. 53)%(P 0. 05)、(10. 14±2. 65)%(P 0. 01)和(1. 34±0. 33)%。Brdu实验显示,O6将GH3细胞阻滞在G1期,分别为(50. 4±4. 1)%和(59. 4±4. 7)%(P 0. 05),DMSO组为(45. 7±3. 7)%。同时,蛋白印迹实验显示,O6处理后p21和p27呈现升高趋势(P 0. 05)。结论 CDK2、p21和p27表达与生长激素腺瘤侵袭密切相关,其抑制剂O6-己基甲基鸟嘌呤诱导GH3细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

细胞周期蛋白D1与肺癌的发生发展

1引言大量研究表明,癌变是一个有遗传因素和环境因素共同参与的多因素、多步骤的发展过程,一般可分为启动、发展和演进3个阶段,涉及多种基因(包括癌基因、抑癌基因及维持基因组稳定的基因)突变的累积。细胞周期的正负调节相关基因及其作用机制大体上属于癌基因和抑癌基因的领域。细胞周期的转换受严格的分子机制调节,包括细胞周期蛋白(cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclindependentkinase,CDK)和CDK抑制因子(CDKin-hibitor,CDKI),其调节失控导致人类疾病,包括恶性肿瘤的发生。细胞周期蛋白是一组在细胞周期调控中起关键作用的蛋…