Graves病患者血清25(OH)D水平及其与甲状腺激素和自身抗体的相关性

目的 探讨25-羟维生素D[25(OH)D](一种评价体内维生素D水平的主要指标)水平对Graves病(GD)患者甲状腺激素及自身抗体的影响.方法 对30例GD病患者的血清25(OH)D、促甲状腺素受体抗体(TRAb)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平进行检测,并与20例健康人群的25(OH)D水平作对照.分析GD患者血清25(OH)D水平与FT3、FT4、TSH、TRAb的相关性.结果 GD组血清25(OH)D水平明显低于对照组(P＜0.01).30例GD患者中,维生素D缺乏和不足28例(93.33％),其中维生素D缺乏患者的血清25(OH)D、TSH水平均较维生素D不足患者明显下降(P均＜0.01),TRAb、FT3及FT4均较维生素D不足患者明显上升(P＜均0.01).GD患者血清25(OH)D 水平与TSH呈正相关(r=0.381,P＜0.05),与FT4(r=-0.64,P＜0.01)、FT3(r=-0.73,P＜0.01)、TRAb(r=-0.58,P＜0.01)均呈负相关.结论 GD患者普通存在维生素D缺乏和不足,其水平与甲状腺激素水平及甲状腺自身免疫反应密切相关.     

Graves'病患者血清TSH受体抗体检测的临床意义

目的探讨Graves'病(GD)患者血清TSH受体抗体(TRAb)检测的临床意义.方法采用电化学发光法及ELSIA法分别为47例GD患者、29例经治疗后症状缓解的患者及38例对照组分别进行FT3、FT4、sTSH及TRAb的测定.结果 GD甲亢组、GD治疗缓解组的TRAb浓度与对照组的TRAb浓度有显著性差异(P<0.01),且CD甲亢组与GD治疗缓解组的TRAb浓度也存在显著性差异(P<0.01).结论血清TRAb的检测对GD的诊断及疗效观察均有一定的临床意义.     

莲房原花青素对人肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用

目的：通过莲房原花青素（LSPC）抑制人肝癌细胞HepG2的生长及诱导其凋亡探讨原花青素抗肿瘤作用的分子机制。方法：以四甲基噻唑蓝(MTT)来分析不同浓度LSPC对人肝癌细胞HepG2的存活率的影响；用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡；通过RT-PCR分析LSPC引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平的变化。结果：原花青素可诱导HepG2细胞凋亡，药物组的生长明显受到抑制（P<0.05），且还呈浓度依赖性。生长抑制损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平随着LSPC浓度增加表达量也增加。结论：原花青素可抑制人肝癌细胞HepG2凋亡，具有抗肿瘤的药理作用。     

Graves眼病患者促甲状腺激素受体抗体的测定及意义

目的探讨血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)的测定对Graves眼病(GO)的意义。方法选取Graves病(GD)患者共138例:无突眼(GD)患者78例;GD合并突眼(GO)患者60例,其中GO组又分为两个亚组:非浸润性突眼患者35例,浸润性突眼患者25例。分别测定各组血清TSH、FT4、FT3、TRAb水平并计算TRAb阳性率。结果 (1)GD组与GO组治疗前血清TSH、FT4、FT3、TRAb水平比较,无显著性差异(P>0.05)。(2)GD组治疗前后TRAb水平及阳性率比较,均有显著性差异(P<0.05);GO组治疗前后TRAb水平及阳性率比较,无显著性差异(P>0.05);治疗后血清TRAb水平GO组明显高于GD组(P<0.05)。(3)浸润性突眼组TRAb水平高于非浸润性突眼组(P<0.05)。结论测定血清TRAb对GO的诊断具有一定的临床意义;当甲状腺功能亢进症状缓解后,GO患者血清TRAb水平较GD患者下降缓慢。     

Graves′病患者血清TSH受体抗体检测的临床意义

目的探讨Graves'病(GD)患者血清TSH受体抗体(TRAb)检测的临床意义.方法采用电化学发光法及ELSIA法分别为47例GD患者、29例经治疗后症状缓解的患者及38例对照组分别进行FT3、FT4、sTSH及TRAb的测定.结果 GD甲亢组、GD治疗缓解组的TRAb浓度与对照组的TRAb浓度有显著性差异(P<0.01),且CD甲亢组与GD治疗缓解组的TRAb浓度也存在显著性差异(P<0.01).结论血清TRAb的检测对GD的诊断及疗效观察均有一定的临床意义.     

重型肝炎患者血浆对HepG2细胞的损伤作用

目的观察重型肝炎患者血浆(severe hepatitis plasma,SHP)对HepG2细胞的损伤,为保持生物人工肝反应器内肝细胞材料活力研究提供实验依据,以期提高生物人工肝的临床治疗效果.方法复苏培养HepG2细胞,通过MTT法测细胞活力、检测LDH漏出量和细胞凋亡率及观察形态变化四个方面了解SHP对HepG2细胞的损伤情况.结果①所有浓度SHP培养的HepG2细胞活力都下降,100%SHP组下降幅度最大;②HepG2细胞在SHP作用下乳酸脱氢酶(LDH)漏出量与对照组相比有显著性差异,并且差异随时间延长加大;③不管灭活与否、浓度高低,SHP培养的HepG2细胞凋亡率都远高于对照组,最高为灭活前100%SHP组;④SHP可致HepG2细胞形成膜大疱,高浓度时致较多细胞死亡.结论SHP能够损伤HepG2细胞,在生物人工肝的临床应用中,有必要对反应器中的肝细胞采取防护措施.     

miR-29a靶向调控IFITM3表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)靶向调控干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞株LO2中miR-29a的表达水平;采用脂质体法将miR-29a minmic及阴性对照转染至HepG2细胞,并分为过表达组和对照组,转染48 h后用QRCR法检测两组miR-29a水平;采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖及凋亡情况; Western blotting检测各组Bax、caspase-3凋亡相关基因及IFITM3的表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a对IFITM3的靶向调控作用。结果肝癌HepG2细胞miR-29a水平低于正常LO2细胞(P 0. 05);过表达组HepG2细胞miR-29a表达低于对照组(P 0. 05);过表达组HepG2细胞增殖率低于对照组(P 0. 05),凋亡率及Bax、caspase-3、IFITM3表达高于对照组(P 0. 05); miR-29a可显著抑制野生型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P 0. 05),但其对突变型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性无显著影响(P 0. 05)。结论 miR-29a在肝癌中表达降低,可靶向调控IFITM3表达,抑制肝癌细胞生长、增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

Graves'病患者血清TSH受体抗体检测的临床意义

目的探讨Graves'病(GD)患者血清TSH受体抗体(TRAb)检测的临床意义。方法采用电化学发光法及ELSIA法分别为47例GD患者、29例经治疗后症状缓解的患者及38例对照组分别进行FT3、FT4、sTSH及TRAb的测定。结果GD甲亢组、GD治疗缓解组的TRAb浓度与对照组的TRAb浓度有显著性差异(P<0.01),且GD甲亢组与GD治疗缓解组的TRAb浓度也存在显著性差异(P<0.01)。结论血清TRAb的检测对GD的诊断及疗效观察均有一定的临床意义。     

重组腺病毒r-caspase3的靶向性实验研究

目的:观察构建靶向性反向半胱氨酸蛋白酶3(r-caspase3)重组腺病毒对AFP表达阳性肝癌细胞凋亡诱导的效果和特异性.方法:采用AFP表达强阳性细胞HepG2、表达弱阳性细胞7721、正常肝细胞L-02以及AFP表达阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231,分别感染构建之重组腺病毒Ad-r-caspase3、Ad-E(AFP)P(ALB)/r-caspase3及Ad-P(ALB)/r-caspase3,SRB染色测定O.D值,计算细胞死亡率和IC50;流式细胞术检测细胞凋亡指数.结果:HepG2、7721细胞对各腺病毒敏感程度为Ad-E(AFP)P(ALB)/r-caspase3>Ad-PALB/r-caspase3>Ad-r-caspase3;流式细胞术检测结果显示重组腺病毒Ad-E(AFP)P(ALB)/r-caspase3具有极强的凋亡选择性,AFP表达越强,凋亡指数越高.结论:靶向性 Ad-E(AFP)-P(ALB)/r-caspase3重组腺病毒具有肝细胞性肝癌凋亡选择性,同AFP表达呈正相关.     

肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2放射敏感性体外实验研究

目的：探讨体外培养的人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株LO2的放射敏感性。方法采用6-MVX线分次照射细胞,进行克隆形成实验,流式细胞仪测细胞凋亡。结果 HepG2的细胞存活曲线较陡峭,细胞凋亡率升高幅度较达。结论 HepG2与LO2有不同的放射生物学特性,相比而言HepG2的放射敏感性较高。     

Graves病患者抗甲状腺药物治疗停药后复发相关临床因素分析

目的分析Graves病(Graves'disease,GD)患者抗甲状腺药物(antithyroid drugs,ATD)治疗停药后复发的相关临床因素。方法对66例行ATD治疗且达到停药标准的GD患者进行随访,根据停药后3年内是否复发分为复发组(n=28)和未复发组(n=38)。比较两组性别、年龄、甲状腺功能亢进家族史、初诊或复发、甲状腺大小、是否加用左甲状腺素(L-thyroxine,L-T4)、治疗中及停药后是否食用无碘盐、基线及停药时促甲状腺激素受体抗体(thyroid stimulating hormone antibodies,TRAb)水平等的差异。结果 (1)临床特点:相对于未复发组,复发组年龄较小(P<0.05);家族史阳性率高(P<0.01);复发就诊患者比例及甲状腺Ⅲ度肿大比例高(均P<0.01);基线及停药时TRAb水平显著升高(P<0.01);治疗中及治疗后食用无碘盐者比例显著降低(P<0.01)。两组在甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibodies,TGAb)及甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid perioxidase antibodies,TPOAb)水平、ATD种类及是否加用L-T4方面无显著差异(P>0.05)。(2)Logistic回归分析显示停药后未食用无碘盐及基线高水平TRAb是复发的独立危险因素。结论 GD患者ATD治愈后复发受多种临床因素影响;长期无碘盐摄入及根据TRAb水平调整ATD疗程可能减少停药后复发的机会。     

X射线对体外培养星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的：观察X射线照射对培养星形胶质细胞（AS）增殖的影响,为X射线的广泛应用提供理论依据。方法：将体外培养80%汇合的AS,在AS无血清培养基继续培养48h后分为对照组和放疗组,对照组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,放疗组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,并同时给与X射线照射,利用western印迹分析各组PCNA、p53、cyclinE的表达。结果：X射线照射后能降低S期细胞比率,呈剂量依赖性,但并不增加AS的凋亡率。通过对AS无血清培养48h后,大部分细胞周期同步于G0期,对照组更换培养基后12h出现PCNA、cyclinE表达水平增高;放疗组p53表达水平较对照组显著增高,PCNA、cyclinE表达水平较对照组显著降低。结论：X射线照射可以通过调控细胞周期有效抑制AS的增生。     

胡椒碱对人肝癌HepG2细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的 探讨胡椒碱(piperine)对人HpeG2肝癌细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为肝癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的HpeG2细胞,采用MTT比色法检测不同浓度胡椒碱对体外培养的HepG2细胞和新分离的外周血白细胞的增殖抑制作用.Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,采用流式细胞术测定胡椒碱对HepG2细胞的凋亡.结果 胡椒碱对HepG2细胞增殖的抑制率随着浓度的升高而增加,半量抑制浓度(IC50)为15.13±3.21 μmol/L,低于其对外周血白细胞的抑制率(64.52±5.32 μmol/L).Hoechst 33258染色后,胡椒碱处理癌细胞组表现出典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测20 μmol/L的胡椒碱处理HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率由对照组的2.89%上升到了21.76%.结论 胡椒碱具有抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于肝癌治疗的潜在价值.     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA（siRNA）和氟尿嘧啶（5-FU）联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降（F=326.78,q=5.78～7.12,P〈0.05）。5-FU＋siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高（F=1 293.24,q=15.31～82.26,P〈0.01）。5-FU＋siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13 568.68,q=110.47～327.16,P〈0.01）。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

低浓度紫杉醇通过上调Bim表达诱导HepG2细胞凋亡

目的探讨低浓度紫杉醇诱导肝癌细胞HepG2凋亡的机制。方法采用MTT还原法检测细胞增殖;采用流式细胞术分析细胞凋亡与细胞周期;采用免疫印迹技术检测细胞内Bim等凋亡相关信号分子的表达。结果紫杉醇对HepG2细胞90%的抑制浓度为9.50nmol/L;3,6和12nmol/L的PTX分别可诱导6.1±2.3%,17.2±4.1%和6.9±2.9%发生凋亡。3-12nmol/L紫杉醇对Bcl-2和Bax表达无影响,但细胞内促凋亡分子Bim表达增加,同时促进Bim降解的Erk1/2磷酸化(活化相关位点)下降。结论低浓度紫杉醇通过上调Bim表达诱导HepG2细胞凋亡。     

碘131治疗后Graves眼病预后与促甲状腺激素受体抗体水平变化的关系

目的 探讨碘131（131I）治疗后Graves眼病（GO）预后与血清促甲状腺激素受体抗体（TRAb）水平变化之间的关系。 方法 选择2011年5月－12月初发Graves病患者238例,分为GO组124 例和非GO组114 例,分别检测131I治疗前及131I治疗后2、3、6个月甲状腺功能和TRAb,GO患者131I治疗前和治疗后6 个月进行临床活动度评分（CAS）。 结果 131I治疗前各组TRAb水平差异无统计学意义（P＞0.05）,TRAb水平与GO CAS评分之间无相关;131I治疗后6个月所有患者TRAb水平显著增加;非GO组有5例新发GO,新发GO组与其他患者的TRAb水平分别为（58.7 ± 77.9）、（61.9 ± 81.1）U/L,差异无统计学意义（P＞0.05）;GO组又分为GO无变化29例,GO加重17例,GO缓解78例,三组患者TRAb水平分别为（53.5 ± 77.6）、（66.2 ± 89.9）、（66.8 ± 42.2）U/L,差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 131I治疗后患者TRAb水平显著增加,但TRAb水平的变化和GO预后无关,TRAb与GO的关系还需要进一步研究。     

脂联素影响体外培养肝细胞乙醛氧化酶1表达的研究

目的研究脂联素(APN)对饱和脂肪酸(SFA)孵育HepG2细胞及HL-7701肝细胞乙醛氧化酶1(AOX1)分泌的影响,探讨APN对非酒精性脂肪肝脏病变(NAFLD)的治疗效果及机制。方法用100μmol/LSFA孵育细胞得到脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,同时设立细胞对照组(未经100μmol/L SFA孵育)。然后采用不同浓度APN(0.5、1.0、1.5、2.5μg/mL)孵育脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,将未经APN孵育的细胞作为对照。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2种细胞AOX1基因表达,运用免疫印迹法检测2种细胞AOX1蛋白表达。结果与未经100μmol/L SFA孵育的对照组比较,经100μmol/L SFA孵育过的HepG2细胞及HL-7701细胞的AOX1基因及蛋白表达均明显增加(P<0.05),且HepG2细胞组明显高于HL-7701细胞组(P<0.05)。加入APN孵育细胞后,2种细胞AOX1基因及蛋白表达均明显低于未经APN孵育的对照组(P<0.05);并且随APN浓度升高,降幅增加。当APN浓度达到1.5μg/mL时,细胞AOX1表达的降低不再随APN浓度的增加而发生明显变化。在APN浓度相同的条件下,HepG2细胞组中AOX1基因及蛋白表达降低的幅度明显高于HL-7701细胞组。结论 APN能有效降低脂肪化肝脏细胞AOX1基因及蛋白表达,能很好的保护肝脏细胞,避免肝脏细胞发生NAFLD。     

阻断血管内皮生长因子与表皮生长因子受体协同信号影响HepG2肝癌细胞生长的实验研究

目的探讨阻断血管内皮生长因子（VEGF）与表皮生长因子受体（EGFR）协同信号对HepG2肝癌细胞生长的影响。方法体外培养HepG2肝癌细胞株,分别将含不同浓度（10-2、10-3、10-4、10-5μg/μL）抗VEGF抗体与抗EGFR抗体的培养液与HepG2肝癌细胞共同培养12、24、4-8h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）比色法计算细胞生长抑制率。以抗体的不同浓度对HepG2肝癌细胞抑制率作图,得到剂量反应曲线。结果抗VEGF抗体和抗EGFR抗体对HepG2肝癌细胞生长的抑制均呈浓度依赖性,并且有一定的量效关系。结论阻断VEGF与EGFR协同信号可抑制HepG2抗体肝癌细胞的增殖,具有剂量依赖性,可诱导细胞凋亡。     

Th1／Th2细胞因子检测在自身免疫性甲状腺疾病中的诊断价值

目的研究Th1／Th2细胞因子在自身免疫性甲状腺疾病（AITD）中的诊断价值。方法选择Grave病（GD）21例、甲亢甲炎（GDⅢ）11例、桥本甲亢（HTL）11例、桥本甲状腺炎（HT）16例、20名正常人，通过酶免法检测血清Th1型细胞因子γ干扰素（IFN-γ）和Th2型细胞因子白细胞介素-4（1L-4）的含量。结果IFN-γ水平HT〉HTL〉GDm〉GD，IL-4水平GD〉GDⅢ〉HTL〉HT。GDⅢ和HTL组IFN-γ和IL-4水平均有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。结论Th1／Th2细胞因子失衡反映了AITD的病理改变和免疫功能紊乱，与甲状腺自身抗体检测相结合可成为AITD辅助诊断的指标。     

利用细胞块检测少精子症精液增殖与凋亡的研究

目的探讨原因不明少精子症睾丸生精细胞增殖与凋亡的病理生理机制。方法39例原因不明少精子症患者留取精液,制备细胞块切片,采用免疫组化技术观察牛精细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及P16的表达;采用原位3’羟基末端标记法（ISEL）观察生精细胞凋亡。15例正常精液作为对照。结果原因不明少精子症患者精液细胞块PC—NA增殖指数（16．6±7．1）％,明显低于对照组的（35．1±5．7）％,P〈0．001;P16蛋白表达阳性率（17．4±8．9）％,明显高于对照组的（6．2±2．1）％,P〈0．01;生精细胞凋亡指数（1．9±1．1）％,明显高于对照组的（0．3±0．1）％,P〈0．01,差别均有显著性意义。结论原因不明少精子症患者精子减少的主要原因之一是生精细胞增殖能力减少及凋亡增加造成增殖与凋亡平衡失调,此种失衡可能与P16蛋白的异常表达有关。精液细胞块监测生精细胞可以作为一种监测少精子症患者的非创伤性指标。