PCR-SSP与血清学技术用于ABO血型分型的比较

目的 探讨ABO血型基因分型技术应用于临床检验的可行性.方法 随机抽样100例江西健康汉族个体,并收集20例正反定型不符的标本,采用血清学和序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)鉴定血型.结果 100例健康个体的基因分型结果与血清学分型结果一致,19例正反定型不符标本的基因分型结果准确.分型结果表明江西地区以O型为多,100例健康个体中,O型36例(36%),A型32例(32%),B型24例(24%),AB型8例(8%),基因频率:p(A)基因为0.225 3,q(B)基因为0.175 3,r(O)基因为0.599 8,且符合Hardy-Weinberg平衡.结论 基因分型技术应用于临床检验具有可行性,在鉴定疑难血型方面可以作为血清学分型的补充.     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的研究中国汉族人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用PCR-SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1、B、A101(A267c)和A102/103(A467r)四种等位基因,其基因频率分别为0.5827、0.1846、0.0096、0.2231.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A201O1,其余均为A102/A103O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟三人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论ABO RCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势.研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异.     

血型血清学和PCR-SSP方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用

目的探讨血型血清学技术和聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用。方法采用血型血清学方法对14例ABO疑难血型标本做正反定型(必要时进一步做吸收放散试验),同时采用PCR-SSP方法对其做ABO基因分型。结果 14例ABO疑难血型标本的血清学检测:Bx型3例,B(A)、AB3型各2例,Bend、B3、AxB、ABx和Bel型各1例;另有2例为AB型伴抗原减弱(不排除疾病等因素影响)。PCR-SSP方法分型:得到7例ABO亚型基因,分别为Bx02O01、B(A)02O02、AB305、AB303、ABw12、Bw12O02和Bw12O01;7例正常的ABO基因,AB1、B1O01各3例,B1O02型1例。结论 PCR-SSP方法在疑难血型鉴定中的应用有助于输血前检查中ABO血型血清学结果的补充。     

基因分型结合血清学方法鉴定ABO血型亚型

目的准确鉴定红细胞ABO亚型。方法采用血清学方法鉴定12例ABO血型正反定型不符标本,结合PCR-SSP基因定型方法作检测鉴定,并对其中9例作基因测序确定基因型。结果 ABO基因分型结果与血型血清检测结果一致率为66.67%(8/12);其余不相符的4例:2例为B(A),1例为Cis AB,1例为新基因(新基因血型血清学结果不确定,PCR-SSP结果为A1/O02,测序结果为A102/O02型)。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于ABO亚型鉴定及ABO血型的正确定型。     

DNA序列分析法对新的B（A）型等位基因的检测分析

目的：对一ABO血型血清学定型违反一般血型遗传规律的家系进行研究,探讨B（A）血型的鉴定方法和新的B（A）型等位基因检测方法。方法：用血清学血型方法、PCR-SSP法和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法对B（A）血型和B（A）型等位基因进行检测。结果：该家系中血型血清学定型为AB型的成员DNA序列分析测定基因型为B（A）/O型,而PCR-SSP法检测AB型成员的基因型为O/O型。结论：应采用DNA序列分析法才能准确测定汉族人群中B（A）血型,而用PCR-SSP法检测可能引起误诊。     

一例B(A)血型的血清学及分子生物学鉴定

摘要：目的?对1例血型血清学正反定型不符的标本进行ABO血型鉴定。方法?运用血型血清学方法鉴定标本ABO血型；用PCR-序列特异性引物(SSP)基因定型和ABO基因直接测序的方法确定该标本的基因型。结果?血型血清学检测结果表现为B(A)亚型的特点；PCR-SSP分型结果定为B(A)04/O1型；测序发现标本ABO基因的第6和第7外显子存在变异：第6外显子存在261delG、297A>G；第7外显子存在526C>G、640A>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A，判断该样本血型为B(A)04/O01血型。结论?该血型血清学初步鉴定为B(A)的标本用PCR-SSP法和ABO基因直接测序法确认为B(A)04/O01型。     

PCR-SSP基因分型技术在ABO疑难血型定型中的应用

目的 研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PC-SSP)基因分型技术在ABO疑难血型鉴定中的应用.方法 收集8例来自广东省肇庆市无偿献血者的ABO疑难血型样本,采用正反定型实验、吸收放散试验等一系列血型血清学方法进行检测;提取基因组DNA,并用PCR-SSP基因分型技术,特异性扩增ABO基因片段,根据有无PCR产物以及产物长度,判断样本的基因型.结果 通过凝胶电泳检测PCR反应的特异性产物,判断样本1～6号ABO基因型为A/O型,样本7,8号为B/O型.8例疑难ABO基因分型结果与其血型的血清学分型结果吻合.结论 ABO疑难血型定型的解决是一个复杂的难题,而PCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,对于解决ABO疑难血型鉴定非常有用.     

幼儿罕见Ax14亚型血清学及基因检测结果分析

目的对ABO正反定型不符的幼儿标本进行血清学鉴定和基因检测分析。方法常规血清学检测,PCR-SSP进行ABO基因初步分型,再使用ABO血型-A亚型基因分型试剂盒进行A亚型分型鉴定。结果血清学结果显示标本正定型为A型(抗A:1+~W),反定为O型(Ac2+,Bc4+);PCR-SSP A亚型分型鉴定结果显示标本基因型为Ax14/O2型。结论疑难血型鉴定有时需要结合血清学和分子生物学方法才能准确定型,此例血清学正反定型不符标本表型为Ax,其基因型为Ax14/O2。     

ABO亚型B(A)04鉴定及家系调查

目的对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析。方法采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,同时采用PCR-SSP方法检测红细胞ABO血型基因及ABO cisAB与B(A)血型基因分型,并分析血型遗传规律。结果该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A)04/O2型。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础。     

罕见B(A)血型的鉴定

目的观察2例罕见B(A)血型的血清学特征并研究其分子机制。方法用血型血清学鉴定2例献血者标本ABO血型,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型和直接测序确定其基因型。结果 2例献血者血型血清学检测结果均表现为B(A)亚型的特点。标本1基因分型为BO2,测序结果为第7外显子B基因发生640AG突变,符合B(A)04/O02的基因型特点;标本2基因分型为BO1,测序结果为第7外显子B基因发生700CG突变,符合B(A)02/O01的基因型特点。结论2例标本均为B(A)表现型,基因型分别为B(A)04/O02和B(A)02/O01。     

2例B(A)血型的鉴定

目的 对2例标本B(A)血型进行鉴定.方法 运用血型血清学、PCR-序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)基因定型和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法,对2例标本的B(A)血型和B(A)型等位基因进行检测.结果 2例标本血清学定型分别为A2B和AxB,PCR-SSP法初筛均为B/O基因型,DNA序列分析测定标本1基因型为B(A)02/O02型,标本2基因型为B(A) 02/O01型.结论 采用DNA序列分析法才能准确测定华北地区汉族人群中B(A)血型,PCR-SSP法可能引起差错.     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的 研究中国汉族人群ABO基因多态性，并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题：方法 快速盐析法提取外周血中的DNA，采用聚合酶链反应—序列特异性引物(PCR—SSP)基因方法对ABO血型定型，并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，用PCR—SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因：结果 在中国汉族符合Hardy—Weeinberg平衡的随机群体(260人)中，检出O1、B、A101(A267c)和A102／103(A467r)四种等位基因，其基因频率分别为、0.5827,0．1．846、0.0096、0.2231：在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中，只有2例基因分型确定为A201O1，其余均为A102／A103O1型，在一家系疑难血型鉴定中，兄弟三人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论 ABO RCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显著优势：研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异。     

聚合酶链式反应-特异性序列引物基因定型在新生儿溶血病ABO血型定型中的应用

目的研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PCR-SSP)基因定型在新生儿溶血病(CHDN)ABO血型定型中的应用。方法收集20例来自广东省肇庆市第一人民医院新生儿溶血病(HDN)的样本,对这些样本进行ABO血型鉴定等一系列血型血清学方法进行检测,然后用PCR-SSP基因定型技术进行样本的基因分型。结果与其血型的血清学分型结果进行比较,新生儿溶血病ABO血型的定型是新生儿输血的必要保障,而PCR-SSP基因分型较血型血清学方法更快捷、准确。结论 PCR-SSP基因正型技术将不再局限于疑难血型的鉴定中,并会越来越多地应用于HDN的鉴定中。     

B(A)04亚型血清学与分子生物学鉴定及与其他AB亚型的鉴别要点

目的对3例血清学定性为A_(weak)B亚型的血标本进行ABO基因检测,探讨其分子遗传学特点,并探讨B(A)亚型与CisAB、A亚B型的鉴别要点。方法用PCR-SSP对常规血清学方法定型困难的3例标本进行ABO基因分型,并对其ABO基因第6、7外显子扩增后进行直接测序及单倍型测序,确定其基因型。结果 3例标本血型血清学结果均为A_(weak)B型,存在不规则抗A抗体。基因分型均为B(A)04型,其B等位基因在第7外显子存在nt640AG突变,标本1为B(A)04/O02,标本2、3为B(A)04/O01。结论当血清学检测结果正反定型不一致时,应采用分子诊断技术进行辅助诊断,并采用配血相合输血策略,可确保临床输血安全。     

罕见B（A）血型的检测及其安全输血探讨

本研究探讨稀有B（A）血型的遗传特性、鉴定方法和输血策略.采用血型血清学方法、PCR-SSP方法基因定型和ABO血型第6、7外显子直接测序的方法进行B（A）血型鉴定,并分析该家系的血型遗传特点和分子机制;同时对B（A）型献血者和用血者进行配合性试验和临床输血研究.结果表明,该家系调查发现3例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B（A）04/O01型,1袋B（A）型红细胞输注给1例B型患者后临床有轻度的输血反应,B（A）型患者输注O型洗涤红细胞后患者未出现输血反应.结论：对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,B（A）型血液不能给B型或AB型患者输注,B（A）血型患者输血时应采取配合性成分输血或自身输血.     

中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位一所市级血液中心输血医学研究所.对象选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

筛选试剂红细胞的血型基因分型方法建立和应用

目的建立重要的红细胞血型的基因分型技术用于筛选抗原谱合理的试剂红细胞。方法首先建立检测红细胞血型系统Rh CE、Kidd、MNS、Duffy、Diego、Lutheran、Colton、Lutheran和Kell等的聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型技术;对于无法获得相关血型试剂的Diego和Colton血型系统,采用测序方法验证该技术检测血型的准确性,其他6个血型系统则用血清学方法验证该技术检测血型的准确性;最后应用该方法对82名O型固定献血者的8个血型系统做基因分型。结果血型基因PCR-SSP分型技术的结果,与血清学和测序检测结果比较,完全一致。所建立的血型基因分型技术对82名O型献血者8种红细胞血型检测,筛选出13位可能适合提供试剂红细胞的献血者。结论成功建立了分型准确、方便、经济的红细胞血型基因PCR-SSP技术,用于从大量献血者中筛选出抗原谱合理的试剂红细胞。     

中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景:ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的:研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计:随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位:一所市级血液中心输血医学研究所.对象:选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法:快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标:260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果:在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论:ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

B亚型新等位基因803delC的分子生物学研究

目的 分析研究1例新的B亚型等位基因血清学特点和分子生物学机制。方法 应用血清学方法检测患者ABO血型。应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)检测ABO血型基因。应用Sanger基因序列分析检测ABO基因1～7外显子编码区域,确定基因突变位点。结果 血清学鉴定患者正定型为O型,反定型为B型。PCR-SSP基因分型结果为A/O型,存在A基因,与血清学结果不符。进一步Sanger双链测序结果显示该标本在ABO~*B.01/ABO~*O.01.01的基础上,第7外显子803位置缺失C碱基。该突变最终导致多肽链上发生p.Ala268Gly和p.Phe269Ser的氨基酸替换,并且从269位置开始产生新的开放阅读框,新的开放阅读框第20号氨基酸为终止密码子,导致B基因表达终止。进一步ABO基因克隆测序证明该突变点位于ABO~*B.01基因上,该突变已提交NCBI数据库,收录编号为OR343908。结论 在中国人群中发现1种新的导致B变异型的ABO等位基因,基因检测方法可辅助鉴定血清学正、反定型不符的疑难血型。     

疑难ABO血型标本的表型与相应等位基因的检测

目的探讨分析疑难ABO血型标本与其等位基因的检测,为临床遇到的疑难ABO血型标本提供可靠的血型鉴定方法。方法选取2013年8月到2014年8月期间在笔者就职医院各科室送检的临床病人血液样本9例,首先按照常规血型检测技术进行ABO血型血清学试验,确定ABO正反定型,再采用盐酸胍/蛋白酶K裂解提取法对ETDA抗凝处理后的静脉外周血进行DNA提取,再使用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对9例血样进行ABO血型基因分型检测。结果 9例临床病人血清学表型为:AxB 2例、AB亚1例、A亚B亚1例,Ax 2例,B亚3例,9例患者基因型分别为为:A/B 4例,A/O 2例,B/O 3例,通过PCR-SSP检测所得基因型与血清学表型结果相一致。结论利用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对血清学方法鉴定ABO血型结果为正反不定型的疑难血型标本进行基因型检测,能准确地确定患者的血型抗原,为临床疑难ABO血型患者制定安全有效的用血方案提供保障。