黄芪甲苷调控LC3/mTOR自噬通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨LC3/mTOR自噬通路调控黄芪甲苷在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用和意义。方法将50只成年雄性Wistar大鼠构建大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型,随机分为对照组、模型组、雷帕霉素(RAPA)组、3-MA组、黄芪甲苷(AST)组。采用灌胃方法在造模前分别灌注雷帕霉素,3-MA和黄芪甲苷。按Longa评分标准进行神经功能缺陷评分;计算梗死灶体积和HE染色观察脑损伤情况;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测mTOR、LC3、Beclin-1、ATG5、SQSTM1/p62和Caspase-3mRNA和蛋白质表达。结果与模型组相比,RAPA组、3-MA组、AST组Longa评分显著降低,梗死面积(%)显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。黄芪甲苷治疗后,大鼠Longa评分最低,梗死面积(%)最少,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,AST组mTOR、p62和Caspase-3mRNA和蛋白质水平显著降低,LC3和Beclin-1mRNA和蛋白质水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论黄芪甲苷可以有效治疗和缓解大鼠MCAO,LC3/mTOR自噬通路在此过程中发挥重要的作用。     

内皮素A受体拮抗剂BQ123对腺嘌呤诱导慢性肾贫血模型大鼠的肾保护作用及机制研究

目的研究内皮素A受体拮抗剂BQ123对腺嘌呤诱导慢性肾贫血模型大鼠肾功能的保护作用并探讨其作用机制。方法采用腺嘌呤诱导法制备慢性肾贫血模型大鼠,随机分为空白对照组、模型组、西他生坦组(50 mg/kg)、BQ123低(5μg/kg)、中(25μg/kg)、高(75μg/kg)剂量组,模型组及空白对照组给予等量生理盐水灌胃。连续用药10周,检测各组大鼠肾功能,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化,透射电子显微镜观察肾组织中细胞自噬小体数量,蛋白印迹(WB)法检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin1、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、雷帕霉素(mTOR)、p-Akt、p-mTOR蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肾组织出现水肿、纤维化、萎缩等病理损伤,组织病理评分明显升高,肾功能显著下降,血液中血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平显著升高,自噬小体数目明显减少,LC3-Ⅱ、Beclin蛋白表达显著下调,p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显上调;与模型组比较,BQ123低、中、高剂量组大鼠肾组织病理变化均显著改善,组织病理评分明显降低,肾功能显著恢复,自噬小体数目显著增多,LC3-Ⅱ、Beclin蛋白表达显著上调,p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著下调,均呈剂量依赖效应。结论 BQ123可能通过抑制Akt/mTOR信号通路激活促进自噬小体的形成,发挥对腺嘌呤诱导的慢性肾贫血大鼠肾功能的保护作用。     

自噬相关基因及蛋白在急性脊髓损伤后大鼠膀胱表达的实验研究

目的 观察自噬相关基因、蛋白在急性期脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌组织中的表达。 方法 选取24只雄性Wistar大鼠并随机分为模型组（12只）及对照组（12只）。模型组采用改良Allen′s法建立脊髓损伤模型,对照组仅予以椎板切除处理。于术后6h对2组大鼠进行BBB运动评分,采用尼氏染色观察2组大鼠脊髓形态学变化,采用Western blotting和免疫荧光染色法检测膀胱平滑肌细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62表达,采用RT-PCR检测膀胱平滑肌自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达。 结果 模型组大鼠下肢运动功能BBB评分较对照组明显降低（P<0.05）。尼氏染色观察可见模型组神经元及尼氏小体数量减少;Western blotting染色提示模型组LC3-Ⅱ表达较对照组增高（P<0.05）,P62表达较对照组降低（P<0.05)。免疫荧光染色法提示模型组膀胱平滑肌LC3阳性细胞率较对照组增高（P<0.05),P62阳性细胞率较对照组降低（P<0.05）。RT-PCR检测发现模型组LC3及Beclin1 mRNA水平较对照组升高(P<0.05）,P62 mRNA水平较对照组降低(P<0.05）。 结论 自噬在急性脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌中表达活跃,可能与脊髓损伤后神经源性膀胱发病机制有关。     

黄芪甲苷通过调节细胞自噬增强贝伐单抗在肺癌细胞系A549中抗肿瘤作用机制的研究

目的:验证黄芪甲苷可以通过调节细胞自噬增强贝伐单抗对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响,讨论黄芪甲苷在A549中的抗肿瘤作用机制。方法:MTT方法检测黄芪甲苷单药以及与贝伐单抗联合应用对A549细胞增殖能力的影响。Western blot方法分别检测黄芪甲苷以及贝伐单抗处理A549后自噬相关蛋白P62和LC3的表达水平。RT-PCR方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞内侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达情况。ECIS方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞黏附与迁移能力的变化。结果:MTT检测结果显示,100 mg/L的黄芪甲苷与750 mg/L的贝伐单抗联合应用对A549细胞的活力有显著的抑制作用,两药联合应用组与对照组相比差异有统计学意义,P值为0.0009。Wester n blot检测结果显示,黄芪甲苷能够通过影响自噬通路P62和LC3的表达从而抑制自噬的发生。RT-PCR方法显示黄芪甲苷能显著抑制侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达,黄芪甲苷组与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0.0001和0.001。ECIS结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。结论:体外研究结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移和侵袭,这一过程是通过抑制细胞自噬的发生,而贝伐单抗有较弱的促进自噬发生的作用,当两者联合时较单用贝伐单抗更强的抗肿瘤细胞增殖的作用。     

犀角地黄汤对缺血性脑卒中再灌注大鼠模型自噬水平的调节机制分析

目的探讨犀角地黄汤对缺血性脑卒中(AIS)再灌注大鼠模型自噬水平的调节机制。方法无特定病原级雄性大鼠60只,随机分为假手术组(A组,只分离颈总动脉不插入线栓)、AIS再灌注组(B组,构建AIS再灌注模型)、AIS再灌注+犀角地黄汤组(C组,于构建AIS再灌注模型前30 min经腹腔注射10 mg/kg犀角地黄汤)、AIS再灌注+犀角地黄汤+JNK抑制剂组(D组,于构建AIS再灌注模型前30 min经腹腔注射10 mg/kg犀角地黄汤和JNK抑制剂),每组各15只。于建模后24 h麻醉大鼠取脑组织做切片,分别进行神经功能评分、自噬超微结构观察、Western Blot检测自噬蛋白Beclin 1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达、TTC测定大鼠脑梗死体积、TUNEL染色法检测细胞凋亡率。结果构建AIS再灌注模型后,与A组大鼠比较,其余组大鼠神经功能均出现异常,自噬泡增加,Beclin 1、LC3蛋白表达增加。与B组比较,C组大鼠神经功能评分、自噬水平、脑梗死体积、Beclin 1、LC3蛋白表达、神经细胞凋亡率降低(P <0. 05);与C组比较,D组大鼠自噬水平显著降低,神经功能进一步改善(P <0. 05)。结论 AIS再灌注后神经细胞损伤严重、自噬水平升高,犀角地黄汤可通过激活JNK通路显著降低自噬水平而降低神经功能损伤,这可能为AIS再灌注后神经损伤提供新的治疗靶点。     

脓毒症急性肾损伤大鼠肾小管细胞结构及Beclin1表达的变化

[目的]观察脓毒症急性肾损伤大鼠肾小管细胞自噬微细结构及自噬相关蛋白Beclin-1表达变化.[方法]取18只SD大鼠,其中12只采用盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)制备脓毒症急性肾损伤模型(脓毒症组),6只为假手术组.采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测大鼠肾组织Beclin1表达变化,采用光学和透射电镜技术观察两组大鼠肾组织细胞结构的变化.[结果]脓毒症组急性肾损伤24h后,近髓质和髓质外带的近端小管出现大量散在的自噬细胞;自噬细胞皱缩,核染色质固缩边聚,多数自噬颗粒脱落到小管腔内随尿液排出;Beclin1蛋白在脓毒症组肾脏组织中的表达明显高于假手术组.[结论]大鼠脓毒症急性肾损伤24h后,肾组织Beclin1蛋白表达增高,部分近端小管细胞发生自噬.     

组织型激肽释放酶通过诱导自噬对缺血性脑卒中发挥保护作用

目的：通过在体实验研究组织型激肽释放酶（TK）对缺血性卒中的神经保护作用是否与诱导保护性自噬有关。方法：成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水（NS）组、TK组、3-MA组和3-MA+TK组，每组11只。假手术组和NS组分别于侧脑室注射NS,TK组和3-MA组分别于侧脑室注射TK和自噬抑制剂3-MA,3-MA+TK组先注射3-MA,30 min后再注射TK。各组完成侧脑室给药后，采用线栓法建立永久性大脑中动脉缺血模型（p MCAO）。在缺血后12 h，采用Longa评分法评估各组大鼠的神经功能。完成神经损伤评分后，TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积，免疫印迹实验检测各组自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平。结果：NS组大鼠缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ较假手术组表达升高，p62水平降低（均P<0.01）。与NS组相比，TK组缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ表达增高，p62水平降低（均P<0.01），大鼠神经功能损伤较轻、脑梗死体积明显缩小（均P<0.01）；与TK组比较，3-MA组缺血脑皮质LC3-Ⅱ的表达降低和p62的水平水平较高，大鼠神经功能损伤较重、脑梗死体积较大（均P<...     

A型核纤层蛋白编码基因LMNA调控IOP1表达机制的初步研究

目的探讨A型核纤层蛋白编码基因(LMNA)与唯铁脱氢酶编码基因1(IOP1)在细胞自噬中潜在的调控关系。方法在人胚胎肾细胞(HEK293T)中分别转染靶向LMNA基因和IOP1基因的siRNA,首先通过RT-PCR和Western Blotting检测LMNA基因和IOP1基因的表达水平,进而检测自噬相关标志物的表达水平,包括LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白比值、p62蛋白、ATG5-ATG12复合体、ATG5、ATG12和FOXO3a。结果在HEK293T中干扰LMNA基因的表达,IOP1基因的mRNA和蛋白水平表达水平下降,自噬标志物LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白比值上调;在HEK293T中下调IOP1的表达,不影响LMNA基因的表达水平,自噬标志物LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白比值、FOXO3a、ATG5、ATG12、ATG5-ATG12复合体水平升高,p62蛋白水平略有降低。结论 LMNA基因可以调控IOP1基因的表达,进而参与调控细胞自噬过程。     

β-榄香烯注射液联合甲磺酸阿帕替尼 对乳腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的探究β-榄香烯注射液(ELE)联合甲磺酸阿帕替尼(APA)对乳腺癌细胞生长的抑制作用。方法正常培养乳腺癌细胞MB-468作空白对照组,用0. 05 mg/ml ELE单独或联合1μmol/L APA处理MB-468细胞,分别作ELE组、APA组和ELE+APA组。采用MTT法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Bax、Bcl-2、Beclin1、p62、LC3的表达;用自噬抑制剂3-MA处理MB-468细胞,并进行ELE单独或联合APA干预,细胞分组为:对照组,3-MA组,ELE+APA组和3-MA+ELE+APA组,采用Western blot检测LC3的表达。结果与对照组相比,ELE组、APA组和ELE+APA组细胞增殖活性、Ki67、PCNA、p62的表达显著下调,凋亡率、Caspase-3、Bax/Bcl-2、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著上调;加入自噬抑制剂3-MA后,3-MA+ELE+APA组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著下调,p62的表达显著上调。结论 ELE联合APA对乳腺癌细胞MB-468生长有明显的抑制作用,可能与降低MB-468细胞增殖活性、促进其凋亡和自噬有关。     

大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响

目的观察大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠50只分为假手术组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、3-MA对照组、灯盏生脉胶囊(DZSM)组和DZSM对照组,每组10只。除假手术组外,其他大鼠线栓法制作大脑中动脉阻塞1 h再灌注模型。3-MA组和3-MA对照组造模前1 h立体定位侧脑室内注射3-MA或生理盐水,DZSM组和DZSM对照组从造模后4 h起每天予DZSM 20 mg/kg或生理盐水灌胃,共3 d。再灌注3 d后,各组采用Longa评分检测,免疫荧光染色和Western blotting检测脑组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1表达,化学荧光法检测DZSM组和DZSM对照组活性氧水平。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注后LC3、Beclin1表达显著增加(P0.001),尤其在梗死灶周边的皮层和纹状体区。3-MA组LC3、Beclin1阳性细胞计数均显著少于3-MA对照组(均P0.001),Longa评分显著低于3-MA对照组(P0.001)。DZSM组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达显著低于DZSM对照组(均P0.001),活性氧水平、Longa评分也显著低于DZSM对照组(P0.001)。结论抑制局灶性脑缺血再灌注后自噬反应可保护神经功能。DZSM胶囊的作用机制包括抑制自噬反应。     

氙气后处理对脊髓缺血再灌注损伤的效果：Akt信号通路和自噬机制

目的 探讨氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后自噬的影响及其与苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的关系。方法 30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和氙气后处理组(Xe组),每组10只。后两组通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。于再灌注1 h时,Xe组经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余两组吸入50%氮气+50%氧气混合气1 h。再灌注4 h时,对大鼠行BBB评分和斜板试验后,收集L_3-5脊髓,Nissl染色计数正常神经元数量,Western blotting检测脊髓组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、自噬蛋白[p62、Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ]的表达,逆转录实时定量聚合酶链反应检测脊髓组织中p62、Beclin 1和LC3Ⅱ mRNA的表达。结果 与Sham组相比,I/R组后肢BBB评分明显降低(P <0.01),斜板试验最大倾斜度明显减小(P <0.01),正常神经元数量明显减少(...     

过表达DcR3对肝癌细胞自噬功能的影响

目的 初步探讨过表达肝癌诱骗受体3(DcR3)对肝癌细胞自噬功能的影响.方法 构建慢病毒载体DcR3稳定转染HepG2细胞株,转染72 h后收集细胞,做进一步处理.以感染空载慢病毒作为对照组(LV-NC组),以感染DcR3过表达慢病毒作为实验组(LV-DcR3组),采用免疫印迹试验(Western blot)检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3B(LC3B)Ⅱ/LC3BⅠ比例、程序性死亡受体1(Beclin1)]的相对表达水平,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LC3B和Beclin1 mRNA相对表达水平.结果 与LV-NC组相比,LV-DcR3组LC3B和Beclin1 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05),进一步研究发现LV-DcR3组LC3BⅡ/LC3BⅠ比例和Beclin1蛋白的相对表达水平显著下降(P<0.05).结论 DcR3可抑制肝癌细胞发生自噬.     

脊髓活性氧激活自噬参与调节2型糖尿病神经病理性疼痛

目的:探讨脊髓中活性氧(reactive oxygen species, ROS)是否通过激活自噬参与大鼠2型糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain, DNP)的形成和发展。方法:清洁级雄性SD大鼠高脂高糖喂养8周,后链脲佐菌素(streptozocin, STZ)单次小剂量(35 mg/kg)腹腔注射,注射后3 d血糖≥16.7 mmol/L为成功诱导2型糖尿病发生;注射后14 d行为学测定痛阈下降至基础值的85%以下,即为成功制备出大鼠2型DNP模型,否则为2型糖尿病不痛组(PL组)。将造模成功的2型DNP大鼠随机分为3组,每组10只:DNP组、DNP+ROS清除剂组(DNP+PBN组)和溶剂对照组(SC组)。另取10只正常SD大鼠为对照组(C组),普通饲料喂养,给予PBN后3 d、7 d、14 d时测定所有组别大鼠的机械缩足反应阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL),随后处死大鼠,取脊髓腰膨大L4-L6,用免疫印迹法测定脊髓中Beclin 1、LC3II/LC3I和p62的表达水平;用流式细胞仪测定脊髓组织中活性氧(ROS)的含量。结果:与C组和PL组比较,DNP组和SC组于模型制备成功后3 d、7 d和14 d时MWT下降,TWL缩短,脊髓ROS、Beclin 1和LC3II/LC3I表达上调(P <0.05),而p62表达下降(P <0.05);与DNP组比较,DNP+PBN组在3 d、7 d和14 d时MWT升高、TWL延长,脊髓Beclin 1和LC3II/LC3I表达下降(P <0.05),而p62表达上调(P <0.05);DNP组与SC组各指标比较差异均无统计学意义。结论:脊髓ROS通过激活自噬参与调节2型糖尿病神经病理性疼痛的产生和维持。     

血必净注射液减轻脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的作用及机制

目的 研究血必净注射液调控自噬对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及机制.方法 将80只BALB/c雄性小鼠随机分为对照组、模型组、血必净组、血必净+3-甲基腺苷(3-methyladenosine,3-MA)组,每组各20只.对照组进行假手术,后3组采用盲肠穿孔术建立脓毒症ALI模型,血必净组给予10 mL/kg血必净注射液腹腔注射,血必净+3-MA组给予10 mL/kg血必净注射液及10 mg/kg自噬抑制剂3-MA腹腔注射.观察4组小鼠造模后72h的累积生存率并检测肺组织病理改变、肺湿重/干重比、炎症因子[肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18]含量、自噬小体数目、自噬基因[微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1]的蛋白表达水平.结果 对照组72 h累积生存率为100％,肺湿重/干重比为3.89±0.85,TNF-α、IL-1β、IL-18含量分别为(0.83±0.14) ng/mg、 (0.74±0.15) ng/mg、 (84.51±13.25) pg/mg,自噬小体数目为(0.41±0.09)个/视野,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1分别为0.20±0.04、0.17±0.03.模型组小鼠肺组织出现典型的ALI病理改变,72 h累积生存率(50％)低于对照组(P＜0.0S),肺湿重/干重比(6.77±0.94),TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(3.15±0.76)ng/mg、(2.88±0.62) ng/mg、 (274.62±45.58) pg/mg],自噬小体数目[(3.14±0.55)个/视野],以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.69±0.09、0.35±0.06)均高于对照组(P＜0.05).血必净组小鼠肺组织ALI病理改变减轻,72 h累积生存率(75％)高于模型组(P＜0.05),自噬小体数目[(5.77±0.75)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.98±0.13、0.62±0.08)高于模型组(P＜0.05),肺湿重/干重比(4.23±0.76)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(1.52±0.32) ng/mg、 (1.29±0.30) ng/mg、 (121.36±26.51) pg/mg]低于模型组(P＜0.05).血必净+3-MA组小鼠肺组织ALI病理改变加重,72 h累积生存率(55％)低于血必净组(P＜0.05),自噬小体数目[(0.78±0.16)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.37±0.05、0.32±0.05)低于血必净组(P＜0.05),肺湿重/干重比(6.31±0.91)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(2.88±0.56) ng/mg、 (2.41±0.58) ng/mg、 (252.35±37.65) pg/mg]高于血必净组(P＜0.05).结论 血必净注射液能够减轻脓毒症诱导的小鼠ALI,激活自噬是与之相关的分子机制.     

黄芪甲苷对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及P-Cx43表达水平的影响

目的探讨黄芪甲苷对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及磷酸化缝隙连接蛋白43(P-Cx43)表达水平的影响。方法选取SD雄性大鼠63只,采用腹主动脉缩窄法建立慢性心力衰竭模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、曲美他嗪组、黄芪甲苷组,各21只;对照组21只接受假手术。黄芪甲苷组给予60 mg/kg黄芪甲苷,1次/d,灌胃给药;曲美他嗪组给予10 mg/kg盐酸曲美他嗪,1次/d,灌胃给药;模型组和对照组分别给予20 mg/kg蒸馏水,1次/d,灌胃;各组大鼠连续给药4周。对大鼠心脏功能、血流动力学指标、心脏重量/体质量比(HW/BW)、左心室重量/体质量比(LVW/BW)、心肌细胞凋亡指数(AI)、心肌组织P-Cx3表达水平进行检测。结果治疗后,与模型组比较,各组大鼠LVEF水平较高,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠IVSd、LVEDd、LVEDs水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组,差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平较高,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠LVEDP水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠HW/BW、LVW/BW水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠心肌细胞AI较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠心肌组织P-Cx3表达水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05)。结论黄芪甲苷能够明显改善慢性心力衰竭大鼠心脏功能及血流动力学指标,抑制心肌细胞凋亡,该作用可能与下调心肌组织P-Cx3表达有关。     

运动预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠自噬相关蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的 研究运动预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)表达及细胞凋亡的影响,探讨其心肌保护相关作用机制。方法 36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n= 12)、模型组(n= 12)和运动预处理组(n = 12)。运动预处理组造模前给予4周运动预处理训练。结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注。再灌注1 h后,Western blotting检测心肌缺血区Beclin 1、LC3蛋白表达;TUNEL染色观察心肌缺血区细胞凋亡情况,计算心肌细胞凋亡指数。结果 与模型组相比,运动预处理组心肌缺血区LC3-Ⅰ蛋白表达上升,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下降(P< 0.05),心肌缺血区凋亡细胞指数减少(P< 0.05)。结论 运动预处理能上调心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌缺血区LC3-Ⅰ表达,下调Beclin 1、LC3-Ⅱ表达,抑制心肌细胞凋亡。     

黄芪甲苷对心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡及P-Cx43表达影响的实验研究

目的探讨黄芪甲苷对心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡及磷酸化缝隙连接蛋白43(P-Cx43)表达影响。方法选取SD雄性大鼠90只,采用腹主动脉缩窄法建立CHF模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、曲美他嗪组、黄芪甲苷组,各21只,对照组21只接受假手术。黄芪甲苷组给予60 mg/kg黄芪甲苷,1次/d,灌胃给药;曲美他嗪组给予10 mg/kg盐酸曲美他嗪,1次/d,灌胃给药;模型组和对照组分别给予20 mg/kg蒸馏水,1次/d,灌胃。对各组大鼠心脏功能、血流动力学指标、心脏重量/体质量比(HW/BW)、左心室重量/体质量比(LVW/BW)、心肌细胞凋亡指数(AI)、心肌组织P-Cx3表达水平进行检测。结果治疗后,与模型组比较,各组大鼠LVEF水平较高,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠ⅣSd、LVEDd、LVEDs水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组,差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平较高,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠LVEDP水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠HW/BW、LVW/BW水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠心肌细胞AI较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05);各组大鼠心肌组织P-Cx3表达水平较低,且黄芪甲苷组曲美他嗪组(P0.05)。结论黄芪甲苷能够明显改善心力衰竭大鼠心脏功能及血流动力学指标,抑制心肌细胞凋亡,该作用可能与下调心肌组织P-Cx3表达有关。     

自噬在机械通气致大鼠脑组织神经元凋亡中的作用

目的探讨自噬在机械通气致大鼠脑组织神经元凋亡中的作用。方法健康成年雄性Wistar大鼠24只,采用随机数字表法平均分为4组:对照组(C组)、机械通气组(MV组)、机械通气+6-氨基-3-甲基嘌呤处理组(3MA组),机械通气+雷帕霉素处理组(R组)。C组气管插管后保留自主呼吸,不行机械通气; MV组、3MA组、R组均行机械通气。3MA组及R组于机械通气前15 min分别腹腔注射自噬抑制剂3-MA 30 mg/kg及自噬激动剂雷帕霉素1 mg/kg,C组于MV前15 min腹腔注射等量生理盐水。于机械通气结束时处死大鼠取脑组织,光镜下观察病理学结果。采用TUNEL法检测海马神经元凋亡情况,计算凋亡指数;采用Western blot检测Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3、LC3 I、LC3Ⅱ、p62的表达,并计算Bax/Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ比值。结果与C组相比,MV组、3MA组和R组病理学损伤严重,海马神经元凋亡指数和Bax/Bcl-2比值升高,海马活化型Caspase-3表达上调,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达上调,p62表达下调(P 0. 05);与MV组比较,3MA组病理学损伤减轻,海马神经元凋亡指数和Bax/Bcl-2比值降低,海马活化型Caspase-3表达下调,Beclin-1、LC3Ⅱ/I表达下调,p62表达上调(P 0. 05);与MV组比较,R组大鼠海马神经元凋亡指数和Bax/Bcl-2比值升高,海马活化型Caspase-3表达上调,Beclin-1、LC3Ⅱ/I表达上调,p62表达下调(P 0. 05)。结论长时间大潮气量机械通气致大鼠脑组织神经元凋亡的机制与自噬有关。     

Nucleostemin表达下调对p53缺失型HL-60细胞自噬活性的影响

目的:结合前期基因芯片和生物信息学分析结果,探讨下调Nucleostemin(NS)表达对p53缺失型白血病HL-60细胞自噬活性的影响,为更深入研究NS非p53依赖性信号通路的关键节点提供依据。方法:在NS-RNAiGV248重组慢病毒载体下调NS表达的基础上,采用吖啶橙染色、Western blot和透射电镜技术,检测HL-60细胞自噬活性的变化。结果:重组慢病毒载体成功抑制了HL-60细胞中NS蛋白的表达;与空白对照组(3.1±0.28)%和阴性对照组(6.2±0.64)%相比,实验组HL-60细胞内酸性小体数量(22.4±0.76)%明显增高(P0.05);与阴性对照组(1.010±0.039)和空白对照组(0.608±0.008)相比,实验组HL-60细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.537±0.072)明显增高(P0.05);与阴性对照组(4.2±1.2)和空白对照组(2.3±0.5)相比,实验组中HL-60细胞内自噬性结构的数量(8.7±3.1)明显增高(P0.05)。结论:下调NS蛋白的表达可以增强p53缺失型HL-60细胞的自噬活性。     

自噬蛋白Beclin1及炎症因子表达在脓毒症急性肾损伤中的作用

目的探讨自噬蛋白Beclin1及炎症因子表达在脓毒症急性肾损伤（AKI）中的作用。 方法选择2017年1月至2019年6月南京医科大学附属南京医院ICU收治的86例脓毒症患者,根据患者入ICU时是否合并AKI,将86例患者分成AKI组（33例）和非AKI组（53例）。记录所有患者入ICU时血清胱抑素C、肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素6（IL-6）、IL-10以及入ICU时和第7天外周静脉血自噬蛋白Beclin1及P62的表达水平。采用Pearson相关分析脓毒症患者自噬蛋白Beclin1与胱抑素C、IL-6的相关性。 结果AKI组脓毒症患者入ICU时和第7天Beclin1蛋白水平均较同时间点非AKI组显著升高（t = 5.213、7.144,P = 0.007、0.002）,P62蛋白水平均较同时间点非AKI组显著降低（t = 4.618、7.223,P = 0.025、0.003）;AKI组患者第7天Beclin1蛋白水平较入ICU时显著升高（t = 4.865,P = 0.006）,而P62蛋白水平较入ICU时显著降低（t = 5.996,P = 0.006）。AKI组患者入ICU时血清胱抑素C [（2.4 ± 0.5）mg / L vs.（1.3 ± 0.4）mg / L]及IL-6 [（613 ± 163）ng / L vs.（269 ± 124）ng / L]表达水平均显著高于非AKI组患者（t = 10.459、11.068,P均< 0.001）。Pearson相关分析结果显示,脓毒症患者自噬蛋白Beclin1表达水平与血清胱抑素C（r = 0.949,P = 0.001）、IL-6（r = 0.824,P = 0.012）均呈正相关。 结论脓毒症患者发生AKI与自噬蛋白Beclin1及炎症因子异常表达有关。