我国237例未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者中原发性基因型耐药监测和病毒亚型分析

目的 分析237例HIV/AIDS患者中原发性耐药的发生率和病毒亚型分布情况.方法 从河南、云南、上海等20个地区采集237例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者血浆HIV-1进行基因测序,通过病毒亚型分析软件REGA HIV-1 Subtyping Tool确定测序样本的HIV-1亚型,并与斯坦福大学HIV耐药数据库比对确定测序样本HIV-1耐药相关突变位点.采用b-DNA方法检测患者血浆病毒载量,采用流式细胞仪检测CD4+ T淋巴细胞计数.结果 237例未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者感染的HIV-1毒株分布为A1、B、C、CRF01-AE、CRF02-AG、CRY7-BC、CRF08-BC、CRF12-BF、G等9个不同亚型,可能的感染时间分布在1990-2006年.237例患者中仅有3例分别对核苷类逆转录酶抑制剂高度耐药、蛋白酶类抑制剂低度耐药和非核苷类逆转录酶抑制剂高度耐药,原发性耐药的发生率为1.3%(3/237).结论我国部分地区未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者中HIV-1原发性基因型耐药的发生比例处于较低水平,病毒亚型分布在9个亚型.     

定量检测HIV-1病毒载量室内质量控制的建立和应用

随着我国人类免疫缺陷综合征（AIDS）患者治疗人数的逐年增加。原用于科研定量检测1型人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus-1,HIV-1）的病毒载量的方法已广泛应用于全国各地AIDS抗病毒治疗定点医院的临床实验室。我们利用西门子拜尔HIV-1病毒载量检测试剂盒内剩余标准品制备质控品,建立室内质量控制方法。     

治疗前血浆和全血干血斑样品HIV-1 Pol区基因型耐药检测结果比较

目的比较治疗前静脉血浆和全血干血斑(DBS)人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Pol区基因型耐药检测结果的差异,并分析DBS样品用于HIV-1基因型耐药检测的可行性。方法采集44例HIV-1感染者治疗前静脉全血,分别制备全血DBS样品和血浆样品,提取RNA,检测病毒载量。采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增Pol区基因序列,对PCR产物进行Sanger测序,采用Sequencher 5.4.5软件对序列进行清理和拼接,采用BioEdit 7.2软件对参考株序列和样品序列进行比对、系统进化树分析及基因型耐药分析。结果治疗前44例血浆样品检出率100.0%,DBS样品检出30例,检出率为68.2%;24例血浆样品平均病毒载量达到5.02×10⁵IU/mL,中位数为1.76×10⁵IU/mL,DBS样品平均病毒载量为1.46×10³IU/mL,中位数为7.95×10²IU/mL;44例患者HIV-1亚型主要为流行重组株(CRF)07-BC(24/44)、CRF01-AE(16/44);血浆和DBS样品序列相似值100%26例(26/30),相似值99%3例(3/30),相似值97%1例(1/30),其中有6例发生不同程度的耐药突变,DBS样品耐药结果与血浆符合率100%,但在其他位点的突变存在差异。结论治疗前全血DBS样品耐药结果及序列与血浆样品具有高度的一致性,全血DBS样品可用于耐药性检测、HIV-1亚型分析,但检出率比血浆低。     

乙型肝炎病毒基因型和亚型与病毒感染相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型和亚型与慢性乙型肝炎（CHB）发病的关系。方法对454例CHB患者,定量PCR方法检测HBV DNA为阳性,再以型特异性引物PCR法检测HBV基因型及其亚型。结果 （1）454例HBV DNA阳性的CHB患者其中HBV B基因型68例（14.9%）;其中Ba亚型35例,Bj亚型3例,未分B亚型30例,C基因型338例（74.5%）,C基因型中C1亚型3例,C2亚型285例,未分型50例。B＋C混合基因型48例（10.6%）,均为Ba＋C2基因型;（2）B与C基因型比较,B基因型中HBeAg阴性的患者多于HBeAg阳性的患者（χ^2=17.69,P〈0.001）。CHB患者中C基因型的HBeAg阳性率明显高于B基因型（χ^2=17.025,P=0.000）。（3）定量PCR检测B基因型HBV水平低于其他基因型;C基因型HBV复制高于其他基因型。结论我国CHB患者中HBV基因型以C基因型为主;HBV基因亚型中Ba与C2亚型是主要的亚型,不同的HBV亚型间病毒载量差异有统计学意义;HBeAg阳性或HBeAg阴性的CHB患者中HBV基因型分布不同;HBV基因型和亚型的临床意义值得动态观察。     

逆转录聚合酶链反应在艾滋病患者HIV-1毒株env基因的序列测定和亚型分析中的应用

目的 了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况，及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法 采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增，并对扩增片段进行序列测定和分析，同时检测其CD4^ 细胞计数与血浆病毒载量。结果 基因系统树显示深圳地区26例艾滋病患者的HIV-1毒株env基因序列，B亚型12例，其中1例与欧美B亚型序列十分接近，11例与中国云南B亚型序列十分接近；循环重组亚型AE(CRFD1-AE)13例，均与泰国AE亚型序列十分接近。比较B、AE亚型感染患者的CD4细胞计数与病毒载量之间的差异无统计学意义。结论 深圳地区艾滋病患者中以HIV-1毒株以B亚型和循环重组亚型AE最常见，尚未观察到B、AE亚型对艾滋病进展的影响。     

人类免疫缺陷病毒载量与T淋巴细胞检测分析

目的分析获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者及人类免疫缺陷病毒（I-IIV）携带者病毒载量与CD3、CD4、CD8淋巴细胞含量及CD4／CD8比值的关系。方法采用病毒载量仪实时核酸扩增检测分析HIV载量,用四色流式细胞技术计数CD3、CD4、CD8淋巴细胞。结果19例HIV携带者病毒载量（3600±700）IU／mL,CD3（1498±329）个／μL,CD4（401±76）个／μL,CD8（891±316）个/μL,CD4／CD80．45±O．07,8例AIDS患者病毒载量（75000±23ooo）IU／mL,CD3（1568±698）个／μL,CIM（92±59）个／μL,CD8（693±312）个／μL,CD4／CD80．26±0．09。结论检测HIV感染和AIDS患者血浆中的病毒载量及全血中的C03、CD4、CD8淋巴细胞绝对计数,是观察和了解患者病程发展的理想方法。     

HIV抗体弱阳性外部对照质控血清的制备及应用

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种由人类免疫缺陷病毒(H IV)引起的传染性疾病。随着AIDS患者的不断增多,国家对AIDS的监测越来越重视。为加强全国H IV抗体检测工作的质量控制,确保检测结果的准确性和可靠性,按照全国AIDS检测技术规范,每次试验必须包含内部对照质控血清和外部对照质控血清,以外部对照质控血清进行室内质量控制。外部对照质控血清价格昂贵,基层医院又很难得到H IV抗体阳性标本而自制。我们根据工作中的实际情况,利用H IV抗体试剂盒中的阳性对照制备了H IV抗体弱阳性外部对照质控血清,经过2年的应用,效果满意。…     

2014－2015年云南省文山州HIV-1毒株耐药基因变异研究

目的：了解2014－2015年云南省文山州免费抗病毒治疗获得性免疫缺陷综合征（简称艾滋病）感染者和艾滋病患者HIV-1基因型耐药发生情况及特点。方法收集文山州2014－2015年接受免费抗病毒治疗的艾滋病患者的临床及实验室资料,对抗病毒治疗持续6个月以上、病毒载量仍大于1000 copies／mL的患者进行基因型耐药检测,分析耐药发生情况及耐药毒株流行特点。结果2014－2015年共计176例艾滋病患者发生病毒学失败,共检测基因型耐药176人次,获得可用序列137条。该人群中耐药发生率为62．0％（85／137）。在使用过的药物中,对奈韦拉平（NVP）、依非韦仑（EFV）高度耐药的有62（45．3％）、50（36．5％）;对拉米夫定（3TC）、替诺福韦（TDF）、司他夫定（D4T）、齐多夫定（AZT）高度耐药的情况分别是31（22．6％）、12（8．8％）、8（5．8％）、2（1．5％）,对蛋白酶抑制剂（PI）没有出现高度耐药的情况。耐药突变与PI 相关的主要耐药基因突变位点有3例,占2．2％（3／137）;M46IM、T74S和L33I各1例。与核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）相关的突变中,突变位点发生频率最高的是 M184V／I,为23．4％（32／137）。与非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）的突变中,突变位点发生频率最高的是K103N／S,为27％（34／137）。137条完整基因序列中,主要为 CRF08 BC 亚型,共67例（48．9％）;其次是 CRF01 AE 亚型,共49例（35．8％）;CRF07 BC亚型有6例（4．4％）;另外还有15例（10．9％）URFs。结论当前文山州的耐药发生率在增加,毒株正变得复杂化,重组毒株在逐渐增加,应加强监测,防止耐药毒株的传播。     

丙型病毒性肝炎病毒基因型与病毒载量及疾病进展的相关性分析

目的 分析丙型病毒性肝炎(丙肝)病毒(HCV)的基因型与病毒载量及肝脏疾病进展的相关性. 方法 选择2010年12月至2013年4月在宁波市第二医院北郊院区就诊的慢性HCV感染者,分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和基因芯片法检测HCV RNA和HCV基因型. 结果 107例标本中,共检出7种亚型,其中1a型4例(3.74%),1b型52例(48.60%),2a型15例(14.02%),3a型10例(9.35%),3b型9例(8.41%),6型16例(14.95%),1b+2a混合型1例(0.93%);男女慢性HCV感染均以1型为主要基因型,但男性6型的构成比高于女性(2=4.336,P=0.049);各年龄组间HCV基因型的构成及各基因型的年龄构成差异均无统计学意义;6型的病毒载量最高,其次为1型,2、3型的病毒载量明显低于6型和1型(P0.01);终末期肝病患者和伴存免疫缺陷患者的病毒载量均高于慢性丙肝患者,且终末期肝病患者以基因1型(主要为1b)为主(P=0.016). 结论 本地区HCV基因型同样以1b型为主,且1b型感染者的病毒载量较高,疾病进展较快;6型的感染率较高,应重视对基因6型HCV感染者的研究.     

人类免疫缺陷病毒感染者及艾滋病患者免疫功能与病毒载量之间的关系

目的探讨人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者和艾滋病（AIDS）患者机体的免疫功能与病毒载量的关系、以此判断疾病的进展，评价抗病毒治疗效果和评估预后情况。方法对226例已确诊的HIV感染血样进行CD4^＋T淋巴细胞绝对计数、CD4／CD8比值和血浆病毒载量的检测。结果226例HIV感染者或AIDS患者体内CD4^＋T淋巴细胞绝对数与病毒载量的对数值呈负相关，变化趋势相反，但与CD4／CD8比值呈正相关。结论CD4^＋T淋巴细胞绝对数是HIV感染者或AIDS患者免疫系统中的“金指标”，流式细胞术单平台法是检测CD4^＋T淋巴细胞绝对数的标准方法，病毒载量则主要是衡量AIDS患者药物疗效必不可少的方法之一。     

高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病的治疗效果及其耐药情况

目的评价高效抗逆转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy,HAART）对艾滋病患者的疗效,并观察其耐药情况。方法 2008年11月,对23例接受免费HAART治疗1～3年的艾滋病患者的HIV-RNA病毒载量、HIV-1耐药、CD4＋T淋巴细胞绝对计数、常规生化检测结果进行分析。结果 23例艾滋病患者在HAART治疗1～3年后有6例（26.1%）患者HIV-RNA载量在水平线以下,17例（73.9%）HIV-RNA载量未达到检测线以下。5例患者（21.7%）的HIV-1发生了耐药,服药依从性良好的患者仅9例（39.1%）。结论 HAART对艾滋病患者的疗效较差、耐药率高、服药依从性差。     

HIV／AIDS感染者109例临床分析

目的分析HIV感染及AIDS患者的流行病学和临床特征，为临床早期诊治提供依据。方法对2003年1月-2007年5月在我院住院的109例抗-HIV初筛阳性患者进行回顾性分析。结果HIV女性感染者比例逐年上升，性接触传播占24．8％，血液传播占11．0％，静脉药瘾占8．3％。最常见的临床症状为发热（80．7％）、消瘦（56．0％）、咳嗽咳痰（33．9％）、腹泻（25，7％）和淋巴结肿大（21．1％）；最常见的临床机会性感染是肺部感染（49．5％）、乙型肝炎（22，9％）、带状疱疹（15．6％）、梅毒（14．7％）、丙型肝炎（13．8％）和口腔真菌感染（12．8％）。实验室检查78．0％患者淋巴细胞减少、68．8％低蛋白血症、35．8％白细胞减少、32．1％贫血。63例（57，8％）患者进行T细胞检查，CD4＋／CD8＋比值均小于1，其中62例患者CD4＋／CD8＋比值均小于0．5。结论109例HIV感染患者主要经性接触传播。HIV感染患者临床表现复杂，不具特异性，临床应提高认识，重视抗HIV血清试验检测。     

夫妻感染HIV-1病毒的分子流行病学研究

目的研究宁波市HIV-1感染夫妻的免疫状况和HIV毒株的亚型分布特点和流行规律。方法收集宁波市7对已经被确认为HIV-1型阳性夫妻的全血样品,对CD4+T淋巴细胞进行绝对计数,运用巢式PCR方法扩增病毒膜蛋白env基因和gag基因区并进行序列测定。应用DNASTAR软件对序列和参考序列进行比对分析,确定基因亚型。结果成功获得11条env基因序列和13条gag基因序列,确定6株为B’亚型,2株为01_AE流行重组型,2株为07_BC流行重组型,4株为08_BC流行重组型。该11例HIV-1阳性全血的CD4+T淋巴细胞绝对数最低7个/μl,最高654个/μl,平均288个/μl。结论宁波市夫妻感染HIV-1毒株存在多种亚型,大多数的感染者免疫状况低下需要抗病毒治疗,流行形势严峻,应加强对该人群免疫状况和HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。     

广州市孕产妇人群HIV-1亚型分布和耐药特征分析

目的 了解广州市孕产妇人群艾滋病病毒1型（HIV-1）亚型和耐药情况。 方法 收集广州市2009 — 2014年孕产妇人群HIV-1抗体阳性样本,扩增蛋白酶（PR）和反转录酶（RT）基因序列,测序后构建系统进化树确定亚型,并与斯坦福大学HIV耐药数据库比对进行耐药分析。 结果 成功获得178份基因片段,其中10份为外籍病例;中国籍病例以CRF01_AE ［42.86%（72/168）］ 和CRF07_BC ［31.55%（53/168）］为主,外籍病例以C和CRF01_AE为主,各占30.00%（3/10）。 中、外籍病例的亚型分布差异有统计学意义（P＜0.001）。 样本总体耐药突变率为12.36%（22/178）,低度以上耐药率为5.62%（10/178）,蛋白酶抑制剂（PIs）、核苷酸反转录酶抑制剂（NRTIs）和非核苷酸反转录酶抑制剂（NNRTIs）耐药率分别为2.81%（5/178）、1.12%（2/178）和2.25%（4/178）。 耐药突变率最高的亚型为C亚型［50.00%（3/6）］。 5例外籍病例携带耐药突变,其中3例为耐药病例。 3.37%（6/178）样本被预测对单类药物呈高度耐药,未发现对多类药物呈高度耐药的样本。 结论 广州市HIV感染的孕产妇人群中有12种病毒亚型,以CRF01_AE和CRF07_BC为主,耐药突变率及耐药率低,但存在PIs或NRTIs或NNRTIs的高度耐药毒株且外籍病例具有较高耐药突变率和耐药率。      

HIV/AIDS合并结核感染患者中分枝杆菌检测技术比较和耐药表型研究

目的 对HIV/AIDS合并结核分枝杆菌(MTB)感染实验室诊断技术进行比较研究,分析患者MTB的药物敏感性和耐药表型.方法 应用T-SPOT.TB试剂盒和rRNA扩增直接检测(MTD)试剂盒对HIV/AIDS合并MTB感染患者进行检测,同时做抗酸杆菌涂片、TB-DNA和结核菌培养,比较以上几种实验方法 阳性检出率.对MTB培养阳性的患者做五种药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺)敏感性试验.结果 T-SPOT.TB对HIV/AIDS合并MTB感染阳性检出率为68.1%(64/94),明显高于其他四种实验方法,MTD的阳性检出率为40.0%(30/75),涂片查抗酸杆菌阳性率18.1%(17/94),TB-DNA阳性率35.5%(27/76),结核菌培养阳性检出率为26.6%(25/94);T-SPOT.TB与其他四种实验方法 比较有明显统计学差异(P<0.01);MTD阳性检出率高于其他三种方法,但与TB-DNA、结核菌培养比较无差异,与涂片查抗酸杆菌比较有统计学差异(P<0.05).T-SPOT.TB、PPD检测结核的敏感度随CD4 T淋巴细胞水平的升高而增强.25例确诊HIV/AIDS合并结核患者中,五种药全敏感76.0%(19/25),耐多药耐药率为16.0%(4/25),单耐异烟肼耐药率8.0%(2/25).结论 T-SPOT.TB和MTD在HIV/AIDS合并MTB感染中是一种快速敏感的检测方法,可作为HIV/AIDS合并结核感染的辅助诊断.大部分HIV/AIDS合并结核患者对目前一线抗结核药仍敏感,但耐药患者多为耐多药.     

1998-2012年浙江省湖州市艾滋病流行特征分析

目的掌握浙江省湖州市1998-2012年艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病患者(AIDS)流行特征及规律,为政府制定防控策略提供参考依据。方法收集1998-2012年湖州市HIV/AIDS流行病学资料,采用描述性流行病学方法进行统计分析。结果湖州市自1998年发现首例HIV感染者,至2012年共报告380例HIV/AIDS,男女性别比为3.2∶1;经性接触传播为主要传播途径(82.6%);感染者年龄以20~49岁为主(83.4%);已婚占54.0%;本市户籍占36.1%,外省占60.0%;职业分布以工人(含外来民工)最多(31.8%),其次是农民(29.2%);文化程度在初中及以下的占79.3%;样本来源以医疗机构的术前检测最多,占24.4%。湖州市自2007年以来性传播持续成为主要传播途径,注射毒品构成比则呈现下降趋势,近3年男男性行为者经性途径传播构成比明显上升。结论湖州市艾滋病疫情呈上升趋势,性接触传播已成为主要途径,男男性行为者感染率快速上升,需加强重点人群艾滋病宣传教育和艾滋病检测力度,建议试行早发现早治疗策略,以控制疫情的进一步上升。     

2014－2018年浙江省江山市中老年HIV/AIDS的HIV-1亚型和分子簇特征研究

目的了解浙江省江山市中老年人类免疫缺陷病毒感染者和艾滋病患者（HIV/AIDS）的HIV亚型分布情况和分子传播簇特征,为该市HIV流行趋势分析和疫情防控提供技术支持。方法对江山市2014 — 2018年新诊断的中老年HIV/AIDS开展分子流行病学研究,从94例感染者（含3例暗娼）血浆中提取RNA,通过反转录–聚合酶链式反应和巢式PCR扩增pol区基因并进行核酸测序,运用MEGA 6.0软件构建Neighbor-Joining系统进化树分析亚型,利用Cytoscape 3.6.0软件对遗传距离≤0.01的序列构建HIV分子簇。结果HIV毒株序列成功获得率为86.2%（81/94）,毒株亚型以CRF01_AE为主（93.8%,76/81）,其余分别为CRF07_BC型3例（3.7%）和B亚型2例（2.5%）;共发现3个分子传播簇,均由CRF01_AE亚型构成,总成簇比例为84.0%（68/81）,大簇包含64例病例（含1例阳性暗娼）,2个小簇均由2例病例组成。结论江山市中老年HIV/AIDS亚型以CRF01_AE为主且种类较为单一,存在与阳性暗娼紧密关联的传播簇,应加强对簇内病例的流行病学调查,以便实施有针对性的公共卫生干预。