耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌的感染特点及耐药基因分析

目的了解该院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。方法收集该院2018年1月至2019年2月临床标本中分离的非重复耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌,采用VITEK 2Compact全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏检测,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶表型、聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶常见基因型。结果共收集95株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,细菌对多种临床常用抗菌药物均显著耐药。改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)91株阳性,EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)3株阳性。PCR结果显示92株携带碳青霉烯酶基因,未检测出耐药基因有3株,其中有86株携带KPC基因(93.4%),3株携带NDM基因,3株既携带KPC基因又携带NDM基因。结论耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药,对四环素、多西环素、替加环素相对敏感,而产KPC型碳青霉烯酶是该院肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。因此临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。     

临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株的血清荚膜分型及耐药机制

目的分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的荚膜血清型和携带毒力基因的情况,以探究其耐药机制。方法采用Vitek-2Compact全自动微生物鉴定仪对分离菌株进行体外药物敏感试验;利用黏液丝试验筛选高黏液阳性菌株;使用改良Hodge试验及碳青霉烯酶抑制试验(CIM)对碳青霉烯酶表型进行检测;利用PCR法检测常见荚膜基因型、碳青霉烯酶耐药基因、β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白基因、毒力基因。结果本研究共分离出CRKP 126株[39.87%(126/316)],CRKP菌株中对头孢菌素类、酶抑制剂类、碳青霉烯类、单环类药物耐药率最高,且耐药率显著高于non-CRKP菌株(P<0.05),替加环素类耐药率最低,与non-CRKP菌株差异无统计学意义(P>0.05);改良Hodge试验阳性106株,CIM试验阳性117株;检测出A类碳青霉烯酶KPC基因最多,共117株;β-内酰胺酶基因TEM基因53株,SHV基因100株,CTX-M基因112株,膜孔蛋白Ompk35基因缺失50株,Ompk36基因缺失94株;126株CRKP中携带4种不同耐药基因的菌株数目最多。结论本研究分离获得的CRKP大部分荚膜血清分型尚不清楚,其主要耐药机制为产生碳青霉烯酶,部分菌株合并有膜孔蛋白基因缺失。     

山东某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床感染特征及耐药基因分析

目的了解济宁医学院附属医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)临床感染特征、药物敏感性及耐药基因分型,为预防和治疗CRE感染及医院多重耐药菌管理提供参考。方法收集CRE临床分离株93株,采用全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定及体外药物敏感性试验,并通过全自动快速微生物质谱检测系统确证菌株。采用简易碳青霉烯类灭活法(sCIM)试验进行碳青霉烯酶表型确证,采用Xpert Carba-R检测并鉴别碳青霉烯酶分型,通过聚合酶链反应(PCR)扩增碳青霉烯酶耐药基因并进行测序分型。结果济宁医学院附属医院CRE主要分离自痰液样本,其次是血液和尿液样本,科室来源主要为重症监护病房。CRE对临床常用的24种抗菌药物均耐药,对替加环素均敏感。sCIM试验检出79株产碳青霉烯酶;Xpert Carba-R检出KPC基因阳性38株、NDM基因阳性31株、IMP基因阳性6株、NDM+KPC基因阳性4株。PCR扩增结果显示,有38株携带KPC耐药基因,31株携带NDM耐药基因,6株携带IMP耐药基因,4株同时携带KPC和NDM耐药基因,未检出VIM及OXA-48耐药基因。结论济宁医学院附属医院CRE临床分离株对多种临床常用抗菌药物耐药,但对替加环素具有良好的体外敏感性;肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药基因主要为KPC型,大肠埃希菌主要为NDM型;应加强对CRE的监控,防范其在院内的暴发流行。     

耐碳青霉烯类抗菌药物革兰阴性杆菌临床分布及耐药基因调查

目的分析甘肃省人民医院2018—2020年碳青霉烯耐药革兰阴性杆菌(CRO)的临床分布、耐药基因携带情况,为医院CRO的防控提供依据。方法采用飞行质谱仪进行细菌鉴定;K-B纸片扩散法和Phoenix~(TM)-100革兰阴性杆菌药敏板进行药敏试验。从临床标本中共分离出CRO菌株60株,用WHONET 5.6软件统计CRO菌株的耐药情况及临床分布。采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行耐药表型检测,荧光定量PCR进行耐药基因型检测。结果 60株CRO菌株经鉴定为肺炎克雷伯菌20株、大肠埃希菌11株、阴沟肠杆菌13株、雷极普罗威登菌5株、弗劳地枸橼酸杆菌2株和铜绿假单胞菌9株;主要来源于重症监护病房(ICU)、神经内科、泌尿科和烧伤科等临床科室。经耐药表型检测检出:A类丝氨酸碳青霉烯酶17株(肺炎克雷伯菌16株、弗劳地枸橼酸杆菌1株),B类金属β-内酰胺酶38株(阴沟肠杆菌12株、大肠埃希菌11株、雷极普罗威登菌5株、铜绿假单胞菌6株、肺炎克雷伯菌4株),4株(铜绿假单胞菌3株和阴沟肠杆菌1株)为阴性;另外1株弗劳地枸橼酸杆菌采用mCIM联合eCIM试验检测为B类金属β-内酰胺酶,而用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测为混合型(A+B类酶)。经PCR检测检出KPC酶17株、NDM型32株,IMP1型酶6株,KPC+NDM混合基因型1株。结论甘肃省人民医院CRO菌株的表型耐药机制是产A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶,主要携带KPC、NDM和IMP1基因型。     

云南地区肿瘤患者CRE菌株的表型筛选与耐药基因相关性研究

目的探讨云南地区肿瘤患者碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)菌株的表型筛选与耐药基因的相关性。方法收集2015年1月至2018年12月云南省肿瘤医院临床科室送检标本中分离得到的31株CRE,采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)、乙二胺四乙酸碳青霉烯类灭活试验(eCIM)进行碳青霉烯酶表型筛选,PCR特异性扩增CRE耐药基因A、B、D类,比较分析CRE菌株mCIM、eCIM表型筛选与耐药基因扩增的相关性。结果31株CRE中,26株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其mCIM检测全部为阳性。以碳青霉烯酶PCR检测结果为“金标准”,mCIM检测碳青霉烯酶的灵敏度和特异度分别为100.0%、80.0%,与PCR检测的一致性程度为“几乎完全一致”(Kappa=0.870,P<0.001);eCIM检测金属酶的灵敏度和特异度分别为100.0%、53.8%,与PCR检测的一致性程度为“中等一致”(Kappa=0.518,P<0.001);mCIM联合eCIM检测碳青霉烯酶总的灵敏度和特异度分别为73.1%、80.0%,检测丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度为50.0%,检测金属酶的灵敏度为100.0%,与PCR检测的一致性程度为“高度一致”(Kappa=0.624,P<0.001)。结论mCIM、eCIM表型筛选试验在云南地区肿瘤患者中与耐药基因有高度的一致性,值得推广使用,但要注意eCIM对于携带blaKPC-2型的碳青霉烯酶存在假阳性。     

胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测 中的应用评价

摘要:目的评估胶体金免疫 层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细茵(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种 碳青霉烯类耐药基因( blaxc、blamp、blavw bax._s.m. .blaxmw),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与 24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR 结果发现25株菌携带blarc基因.7株携带blasow基因.4株携带blamp基因.4株同时携帶blaxpc.Nou基因 .1株同时携带barc.NM..基因,另. 外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM 试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%, Kappa 值为1.000;检 测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%, Kappa值为1.000。结论胶体金 . 免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。     

常熟地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学调查研究

：目的 研究分析常熟地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP) 的分子流行特征。方法 收集2017年1月至2017年12月常熟地区分离的34株CRKP菌株,分析菌株对抗菌药物的敏感性,并通过聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）筛选碳青霉烯酶基因,利用质粒结合转移实验验证耐药质粒的可转移性,脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis, PFGE）分析菌株同源性。结果 34株CRKP对亚胺培南、美罗培南的耐药率均为100％,其中30株携带KPC基因（88.2％）、4株携带NDM基因（11.8％）、1株携带IMP基因,并有2株同时携带KPC和NDM基因。质粒结合试验成功获得25株KPC阳性质粒。同源性分析显示共有11种型别,其中A型15株,B型9株,其余各型各1株。结论 目前常熟地区的CRKP以携带KPC质粒为主,菌株克隆以A型和B型为主,存在小范围的克隆性传播。     

携带不同酶型基因耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常见抗耐药菌药物的敏感性观察

目的 了解宁波地区耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）菌株携带碳青霉烯酶型基因分布,以及携带不同碳青霉烯酶型基因的CRKP对常见抗耐药菌药物的敏感性。方法 选择2019年1月—2021年12月宁波地区多家中心市医院临床非重复分离的CRKP共150株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因携带情况;采用肉汤稀释法检测常用抗CRKP药物替加环素、多黏菌素B、头孢他啶/阿维巴坦对分离CRKP的敏感性;采用K-B法检测CRKP对8种报道中使用的联合药物的敏感性。结果 宁波地区CRKP菌株主要携带KPC-2型耐药基因,其次是NDM-1型耐药基因,对替加环素、多黏菌素B敏感率均较高;头孢他啶/阿维巴坦对携带A类酶基因的CRKP的作用力较强,对携带B类、D类酶基因的CRKP作用弱;磷霉素、阿米卡星和氯霉素的抑菌圈直径较大,可以作为治疗CRKP感染的联合药物,氨曲南和阿米卡星可用于治疗携带B类酶基因的CRKP感染。结论 部分抗菌药物对携带不同酶型基因菌株敏感性不同。     

胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测中的应用评价

目的 评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法 收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌，包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(bla_KPC、bla_IMP、bla_VIM、bla_OXA-48-like、bla_NDM),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型，以PCR结果为参考，评估各方法的检测性能；挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶，报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果 PCR结果发现25株菌携带bla_KPC基因、7株携带bla_NDM基因、4株携带bla_IMP基因、4株同时携带bla_KPC+NDM基因、1株同时携带bla_KPC+NDM+IMP基因，...     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药性分析及分子分型

目的 分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药性及分子分型。方法 选取我院2021年3月—2022年3月临床分离的CRKP菌株，进行碳青霉烯酶表型鉴定、药物敏感性试验、耐药基因检测及多位点序列分型（MLST）。结果 70株CRKP主要来自痰液、血液和引流液。改良Hodge试验显示63株为阳性，改良碳青霉烯灭活试验显示66例为阳性。CRKP对大多数常规抗菌药物耐药率为90%以上，对替加环素最敏感，耐药率为4.3%。70株CRKP中携带blaKPC-2基因为64株，携带blaNDM基因为8株。MLST可分为6个ST型，其中ST11型为56株，占比最高（80%）。结论 临床分离的CRKP MLST仍以ST11型为主，对碳青霉烯类抗菌药物的主要耐药机制为产KPC-2酶，可选择替加环素治疗CRKP感染，但仍要规范使用抗菌药物，防止耐药性进一步产生。     

应用实时荧光PCR快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌

目的应用实时荧光PCR(RT-PCR)技术进行血培养标本中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的快速检测。方法挑取细菌纯菌落配制成菌悬液,吸取菌悬液分别加入血培养瓶制备梯度细菌浓度的模拟血培养标本,放入血培养仪孵育,分别提取仪器报阳培养液中的细菌DNA。应用RT-PCR技术扩增和检测肺炎克雷伯菌Khe基因和4种碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、VIM、IMP)。进行灵敏度试验、特异度试验和重复性试验。结果使用RT-PCR方法检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌18株和非肺炎克雷伯菌30株,试验特异度为100%(48/48),最低检测限为0.5 cfu/mL,3次重复试验结果一致。从18株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分离株中检出7株(38.9%)携带KPC酶基因,9株(50.0%)携带NDM酶基因,1株(5.6%)同时携带KPC酶基因和NDM酶基因。结论应用RT-PCR技术可快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,为该类细菌相关血流感染的早期诊治提供依据。     

多重PCR联合毛细管电泳技术检测碳青霉烯酶基因

目的建立并评价多重PCR联合毛细管电泳技术(mPCR-CE)同时检测碳青霉烯酶基因bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(OXA-48)和bla_(VIM)的方法。方法设计特异性引物,建立多重PCR扩增体系,利用毛细管电泳检测扩增产物。以携带bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(OXA-48)和bla_(VIM)的细菌作为阳性对照菌株,以携带其他β-内酰胺酶基因细菌作为阴性对照,用于mPCR-CE的灵敏度、特异性评价。收集68株碳青霉烯耐药菌株,利用mPCR-CE方法进行检测,并与PCR扩增后测序结果比较。结果 mPCR-CE检测携带bla_(KPC)、bla_(NDM)和bla_(VIM)细菌最低检测限均为1.5×10~2 CFU/mL,检测携带bla_(OXA-48)细菌为1.5×10~3 CFU/mL,并且与携带其他β-内酰胺酶基因的细菌无交叉反应。经mPCR-CE检测,68株临床分离菌株中37株携带bla_(KPC),8株携带bla_(NDM),未检测到携带bla_(OXA-48)和bla_(VIM)的菌株,结果与PCR扩增后测序结果完全一致。结论 mPCR-CE可用于临床分离菌株的主要碳青霉烯酶基因检测。     

53株耐碳青霉烯类药物粘质沙雷菌的耐药表型分析

目的研究耐碳青霉烯药物粘质沙雷菌的耐药表型。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院2018年6月~2019年9月临床分离的235株非重复粘质沙雷菌,采用Vitek 2 Compact配套GN13药敏板卡和纸片扩散法进行药物敏感性检测;采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和EDTA-改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)对碳青霉烯酶表型进行筛选;采用PCR及测序分析检测碳青霉烯酶基因携带情况。结果235株粘质沙雷菌中检出同时对美罗培南和亚胺培南耐药菌株53株(22.6%)。53株碳青霉烯类耐药菌株中对头孢他啶敏感和中介分别为23株(43.4%)和21株(39.6%),对头孢曲松、氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率均大于98%,对阿米卡星、复方新诺明的耐药率分别为1.7%和1.6%。mCIM均阳性,eCIM阳性3株。53株耐药菌株中检出blaKPC-2基因51株,检出blaNDM-1基因1株,同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因1株,未检出blaIMI、blaOXA48、blaFOX、blaIMP和blaVIM基因。结论本院耐碳青霉烯粘质沙雷菌检出率较高,blaKPC-2基因是介导本院粘质沙雷菌对碳青霉烯类药物耐药的主要流行基因型。     

某院ST11型耐碳青霉烯酶高毒力肺炎克雷伯菌分子流行病学研究

目的对连云港市某院ST11型耐碳青霉烯酶高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行分子流行病学调查。方法收集连云港市中医院2017年1月至2019年6月临床分离的26株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP),采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)、EDTA-改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)及PCR法分别检测菌株碳青霉烯酶耐药表型和碳青霉烯酶耐药基因。采用拉丝实验检测实验菌株的黏液表型。采用3种多重PCR进行检测,第1体系对实验菌株进行ST分型,第2体系检测最强毒力的荚膜血清型wzyK1、wzyK2,以及K位点wzyKL47、wzyKL64,第3体系检测rmpA、rmpA2、iroN、intA毒力相关基因,并采用大蜡螟感染模型检测毒力表型,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析。结果26株CRKP菌株,携带以肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)为主的耐药基因菌株有22株,结果与相对应的22株菌株的mCIM结果一致。ST分型以ST11型为主,占73.1%(19/26),wzyKL47、wzyKL64阳性率分别为15.8%(3/19)、84.2%(16/19)。检出8株携带毒力相关基因且具有毒力表型的ST11型CR-HVKP以KL64为主,康复科检出率最高。采用PFGE可分为3群,带型相似度高于85%的有2株。结论连云港市中医院检出ST11型CR-HVKP 8株,可能存在克隆株的散在传播,需加强对康复科院内感染的防控。     

新生儿耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因研究

目的研究临床分离自新生儿的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药性及碳青霉烯酶耐药基因类型。方法收集2013年12月至2015年12月南宁市2家妇幼保健院住院新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌8株。使用生物梅里埃公司的VITEK-2Compact全自动细菌鉴定仪对细菌进行鉴定以及菌株最低抑菌浓度(MIC)检测。改良Hodge试验筛选碳青霉烯酶阳性菌株,乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效试验筛选产金属酶菌株。PCR扩增碳青霉烯酶基因(KPC、GES、SME、NMC、IMI、IMP、NDM-1、VIM、SIM),并对PCR阳性产物测序鉴定,测序结果与GenBank数据库进行比对。结果药敏结果显示,8株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验显示,6株改良Hodge试验阳性,7株EDTA协同试验阳性。8株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌均携带IMP-4碳青霉烯酶基因,未检出KPC、GES、SME、NMC、IMI、NDM-1、VIM、SIM型碳青霉烯酶基因。结论本地区新生儿碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率较高,新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要耐药机制是产B类碳青霉烯酶,IMP-4是其主要酶型。     

GeneXpert检测系统分析儿童耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因

目的 研究西安市儿童医院2017年10月至2019年10月临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药情况,借助GeneXpert检测系统分析碳青霉烯酶基因携带特点,了解其分子流行病学分布,为各科室CRE的预防、控制及治疗提供依据.方法 采用Whonet 5.6软件筛选西安市儿童医院2017年10月至2019年10月CRE菌株,采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪鉴定细菌,以Vitek 2-Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统联合纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,采用GeneXpert检测系统检测碳青霉烯酶基因KPC、NDM、VIM、IM P-1、OXA-48.结果 西安市儿童医院2017年10月至2019年10月共检出CRE菌株109株,排名前3位的是肺炎克雷伯菌57株(52.29％)、大肠埃希菌20株(18.35％)、产酸克雷伯菌8株(7.34％).标本来源主要为尿液(35.78％)、下呼吸道标本(29.36％)、脓液(16.51％).临床科室分布主要集中在新生儿重症医学科、康复科及血液科.药敏试验结果显示,CRE对β-内酰胺类药物耐药率在80.00％ 以上,对氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物耐药率均小于40.00％.GeneXpert检测系统检测结果显示,携带碳青霉烯酶菌株共90株,耐药基因检出率分别为KPC(52.29％)、NDM(47.70％)、IMP-1(7.30％),未发现VIM和OXA-48耐药基因.患儿预后与细菌耐药基因检出数量种类差异无统计学意义(P>0.05).结论 儿童CRE以肺炎克雷伯菌为主,大部分来源于重症医学科的下呼吸道标本,对抗菌药物高度耐药,检出耐药基因以K PC和NDM为主.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药形势严峻,临床应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物,及时针对性地采取措施,以预防院内传播流行.     

分离自儿科患者肺炎克雷伯菌的常见碳青霉烯酶基因检测

目的了解分离自上海交通大学医学院附属新华医院儿科患者耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制,为儿科患者CRKP感染的抗菌药物合理使用提供参考。方法收集2010-2016年该院儿科患者临床标本中分离到的非重复CRKP菌株,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行菌株鉴定复核。纸片扩散法联合VITEK2-Compact全自动药敏分析系统对实验菌株进行药敏试验。煮沸法提取菌株DNA,PCR及基因测序方法检测KPC、NDM、IMP、VIM、GES、OXA等常见碳青霉烯酶基因。结果儿科患者临床标本中共分离到197株CRKP,主要来自于痰液、尿液、分泌物及血液等标本。197株CRKP对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为93.4%、96.0%和100%,对大多数头孢菌素类抗生素的耐药率达100%,对喹诺酮类的耐药率也较高,但对氨基糖苷类和磺胺类抗菌药物仍保持较高的敏感率。儿科患者CRKP对碳青霉烯类耐药机制主要为产KPC-2酶,其次为NDM-5和NDM-1。共分离到13株携带IMP-4基因和5株携带OXA-232基因的菌株,这些菌株多同时携带2种甚至2种以上耐药基因。该院自2010年在儿科患者中分离到CRKP以来,CRKP在儿科患者中检出率逐年上升,菌株所携带的耐药基因种类也越来越多样化,检出CRKP的患儿分布于11个不同科室,其中以儿科ICU检出率最高。结论分离自儿科患者的CRKP临床菌株耐药程度较高,其携带的碳青霉烯酶基因种类繁多,以KPC-2、NDM-1和NDM-5为主。该院儿科病区,尤其是儿科ICU CRKP流行情况较为严重,应引起重视;需加强感控措施,避免耐药菌株进一步播散流行。     

临床克雷伯菌属碳青霉烯酶三种检测方法的实验比较研究

目的　对聚合式酶链反应（ polymerase chain reaction,PCR）、改良碳青霉烯酶灭活试验（ modi.ed carbapenem inactivation method,mCIM）+ EDTA碳青霉烯酶灭活试验（ EDTA-carbapenem inactivation method, eCIM）和 GeneXpert三种方法检测碳青霉烯酶的性能进行了比较,为临床选择合适的检测方法提供依据。方法　收集 2019年 1月～ 2021年 5月临床分离的 43株碳青霉烯类抗生素耐药及 37株碳青霉烯类抗生素敏感克雷伯菌属菌株,用 PCR法和 GeneXpert试验检测碳青霉烯酶基因, mCIM+ eCIM试验检测碳青霉烯酶。以 PCR法为金标准,对三种试验方法检测结果进行比较。结果　43株耐碳青霉烯克雷伯菌属经 PCR扩增检测有 40株携带碳青霉烯耐药基因, blaKPC 30株,blaNDM 8株, blaIMP 2株;37株碳青霉烯类敏感克雷伯菌属经 PCR扩增均未检出碳青霉烯酶基因。与 PCR法结果相比, mCIM+eCIM试验检测丝氨酸酶及金属酶表型结果敏感度和特异度均为 100%,Kappa值为 1;GeneXpert技术敏感度和特异度分别为     

耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌耐药基因研究

目的了解对碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌(CRKP)碳青霉烯酶基因的携带情况。方法收集本院2013年1月至2016年6月临床标本中分离的630株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定和药敏检测以及改良Hodge试验筛选CRKP,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,采用多位点序列分型(MLST)技术对CRPK进行分子遗传学分析。结果 630株肺炎克雷伯菌中,61株对亚胺培南耐药,为CRKP,占9.7%,CRKP对多种临床常用抗菌药物均显著耐药,对替加环素具有良好的敏感性。PCR结果显示59株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中53株携带bla KPC-2型基因(89.8%),4株携带bla NDM-1型基因(6.8%),2株携带bla OXA-48型基因(3.4%)。MLST分型主要以ST11为主(49株,80.3%)。结论我院CRKP基因型主要为KPC-2型,另外有散在NDM-1和OXA-48型,MLST分型主要为ST11型。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC和NDM-1β内酰胺酶耐药基因的研究

目的检测江苏盛泽医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的KPC和NDM-1耐药基因,分析耐碳青霉烯类的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌产酶情况;用PCR方法检测KPC及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果29株分离菌中,26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC型碳青霉烯酶耐药基因,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论该院耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的耐药机制主要是携带KPC型碳青霉烯酶基因。