CD55、CD59联合嗜水气单胞菌毒素变异体检测对PNH的诊断价值

目的检测各类贫血患者CD55、CD59和嗜水气单胞菌毒素变异体(FLAER)的表达情况,评价CD55、CD59联合FLAER检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的诊断价值。方法选取贫血住院患者157例,其中缺铁性贫血(IDA)38例、巨幼细胞性贫血(MA)23例、骨髓增生异常综合征(MDS)27例、再生障碍性贫血(AA)25例、自身免疫溶血性贫血(AIHA)31例、PNH 13例。另选取体检健康者20名,作为正常对照组。检测所有研究对象红细胞和粒细胞CD55、CD59以及粒细胞和单核细胞FLAER的表达情况。结果 PNH组红细胞和粒细胞CD55~-、CD59~-百分比与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。PNH组粒细胞和单核细胞FLAER-百分比均50%,显著高于红细胞和粒细胞CD55~-、CD59~-百分比(P0.05)。CD55、CD59与FLAER检测对PNH诊断的符合率为100%。有3例AA患者和2例MDS患者FLAER表达缺失,而CD55、CD59表达正常;有2例AIHA患者红细胞CD55、CD59表达部分缺失,粒细胞CD55、CD59表达正常,FLAER表达正常。结论 CD55、CD59表达缺陷是PNH的主要特征,CD55、CD59联合FLAER检测在PNH诊断及鉴别诊断中有着重要的价值。     

FLAER多参数检测PNH克隆的意义

目的探讨荧光标记的嗜水气单胞菌溶素变异体(FLAER)、CD45、CD15、CD24多参数检测粒细胞PNH克隆对于疾病诊断和鉴别诊断的意义,并与CD59检测进行比较。方法应用流式细胞仪分别检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)和正常人粒细胞FLAER和红细胞CD59的缺失率。结果与AA、MDS及正常组相比,PNH患者外周血CD59、FLAER缺失率均明显增高(P0.05);在PNH组中,FLAER缺失率显著高于CD59缺失率(P0.05);在AA和MDS组中,个别CD59缺失率为0的患者,检测出FLAER的缺失。结论 FLAER检测较CD59相比灵敏性和特异性更高,对微小PNH克隆更敏感,对PNH、MDS和AA的诊断鉴别具有一定的意义。     

原发性骨髓纤维化的诊治进展

原发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis,PMF）是一种慢性克隆性髓系疾病,WHO将之归类于BCR—ABLl阴性的骨髓增殖性肿瘤（MPN）。其特点为：（1）贫血;（2）脾大;（3）外周血中出现未成熟粒细胞、幼红细胞、泪滴状红细胞以及血中CD34＋细胞增多;（4）骨髓纤维化（MF）;（5）骨硬化。     

CD55/CD59及嗜水气单胞菌毒素变异体在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者中的表达

目的探讨CD55/CD59及嗜水气单胞菌毒素变异体(FLAER)在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者中的表达水平。方法用流式细胞仪检测30例健康人对照及13例PNH患者外周血红细胞和粒细胞表面抗原CD55/59缺失率,以及粒细胞和单核细胞FLAER缺失率。结果 PNH患者红细胞CD55/59抗原缺失率(40.21±7.45,56.14±9.27)、粒细胞CD55/59抗原缺失率(55.52±13.40,72.63±16.26)、单核及粒细胞FLAER缺失率(83.60±11.92,87.37±10.53)均高于健康人对照组(P均0.05);PNH患者粒细胞CD55/59抗原缺失率明显高于红细胞,且在同种细胞中CD59缺失率亦高于CD55(P0.05);PNH患者粒细胞FLAER缺失率明显高于粒细胞CD55/59抗原缺失率(P0.05)。结论 CD55/59和FLAER在PNH患者中的缺失率较高,且在粒细胞中FLAER缺失率更高。     

FLAER检测及其在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义

目的探讨荧光标记的嗜水气单胞菌溶素变异体(FLAER)检测在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)诊断中的意义,并与传统的CD55、CD59测定进行比较。方法采用流式细胞术检测10例PNH、37例非PNH贫血患者外周血FLAER、CD55和CD59抗原的表达,对其结果进行比较。结果与非PNH贫血组相比,PNH患者外周血CD55、CD59缺失率和FLAER阴性率均明显增高(P<0.05)。10例PNH患者外周血粒细胞FLAER阴性率达(82.52±25.24)%,单核细胞FLAER阴性率达(79.84±19.86)%;与CD55、CD59的阴性率相比,PNH克隆数显著升高(P<0.05)。结论利用流式细胞术进行FLAER分析对PNH的诊断比CD55、CD59检测更加特异、敏感、直观,FLAER分析更能反映PNH克隆情况。     

CD55和CD59检测对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿的意义

目的：探讨检测患者红细胞和中性粒细胞膜上CD55和CD59表型的缺失对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的意义。方法：应用流式细胞仪间接免疫荧光标记法检测40例正常人（对照组），29例PNH患者（PNH组），16例自身免疫性溶血性贫血患者（AIHA组），12例缺铁性贫血患者（IDA组）的红细胞和中性粒细胞CD55和CD59表型的缺失情况。结果：PNH组红细胞和中性粒细胞CD55^-、CD59^-的百分率与对照组比较有显著性差异（P〈0．01），AIHA组、IDA组与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：利用流式细胞术同时检测患者红细胞和中性粒细胞膜CD55和CD59表型的缺失是目前诊断PNH最可靠、最敏感的方法。     

外周血粒细胞CD55,CD59和FLAER检测在贫血及PNH诊断中的意义

目的探讨CD55,CD59和嗜水气单胞菌毒素变异体(FLAER)检测在各类贫血及阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者诊断中的临床意义。方法选取2009年1月~2017年3月期间收集的30例健康对照,22例PNH,33例再生障碍性贫血(AA),37例缺铁性贫血(IDA),45例巨幼细胞性贫血(MA),30例溶血性贫血(HA)和31例骨髓增生异常综合征(MDS)患者,用多参数流式细胞仪同时检测外周血粒细胞CD55,CD59和FLAER阴性细胞比例,代表检出的PNH克隆数。结果 PNH,AA和MDS组FLAER检出率均高于CD55和CD59,但只有AA患者差异有统计学意义(X~2=7.759,5.518,P=0.005,0.0190.05)。PNH和AA组CD55,CD59和FLAER阴性细胞比例均显著高于正常对照组及其他贫血组(t=2.163~17.890,P=0.000~0.0380.05)。PNH组FLAER阴性细胞比例高于CD59,CD59高于CD55,差异均具有统计学意义(t=2.503~6.308,P=0.000~0.0160.05)。结论 CD55,CD59和FLAER在PNH诊断及与其他贫血性疾病鉴别诊断中具有重要价值,尤其是存在微小PNH克隆的MDS和AA患者,FLAER优于CD59,CD59优于CD55。     

评估骨髓、外周血红细胞和粒细胞CD55、CD59检测在PNH诊断中的应用

目的评估骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxys—realnoturnal hemoglobinura,PNH）的诊断价值。方法收集107例PNH及其他-系至三系血细胞减少患者骨髓及外周血标本,采用流式细胞仪检测其红细胞、粒细胞CD55、CD59表达缺失情况。通过受试者工作特征（receiverOperatingcharacteristic,ROC）曲线评价各指标对PNH的诊断效能,并采用线性内插法计算其诊断PNH的诊断点。结果除PNH外,骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、白血病及各类贫血患者的骨髓、外周血CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例,大多数均在5％以下。各疾病组间各指标比例差异均有统计学意义（P均〈0．05）。PNH患者各指标比例均较其他疾病患者高,且差异均有统计学意义（P均〈0．05）。造血干细胞疾病组与非造血干细胞疾病组的骨髓CD55-粒细胞比例差异无统计学意义（P〉0．05）。骨髓CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例诊断PNH的ROC曲线下面积均达0．700以上。各指标对PNH的诊断点分别为骨髓CD55红细胞4．81％,骨髓CD59-红细胞4．25％,骨髓CD55-粒细胞49．43％,骨髓CD59粒细胞4．63％,外周血CD55-红细胞3．99％,外周血CD59红细胞3．25％,外周血CD55-粒细胞4．17％,外周血CD59-粒细胞4．71％。结论骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59的诊断价值优于外周血,可以作为诊断PNH的辅助手段。     

特发性骨髓纤维化的发病机制研究进展

特发性骨髓纤维化（idiopathic myelofibrosis，IMF）是一种慢性骨髓增殖性疾病（chronic myeloproliferative disorders，CMPD），以脾增大，幼粒一幼红细胞性贫血，泪滴状红细胞以及不同程度的骨髓纤维化和髓外造血（extr—amedullary haematopoiesis）为特点。本文对特发性骨髓纤维化的生物学特性以及发病机制，诸如酪氨酸激酶受体突变、γ-氨基丁酸转运蛋白1（GATAl）突变，JAK2基因突变，C—MPl受体突变和与特发性骨髓纤维化有关的其他发病机制加以综述，     

干细胞缺陷性疾病患者两种GPI-锚蛋白表达及临床意义

目的:观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、再生障碍性贫血(AA,再障)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血粒、红细胞表面两种GPI锚蛋白(GPI-AP)CD55、CD59的表达情况,探讨它们的临床意义。方法:152例患者,其中PNH组28例,再障组87例(其中重型再障25例,慢性再障62例),MDS组37例;健康对照组20名。以流式细胞术检测外周血粒、红细胞CD55、CD59的表达。结果:20名健康人外周血粒、红细胞两种GPI-AP阳性比例分别为98.9±1.2、99.2±0.8,稳定性最好;PNH组粒、红细胞两种GPI-AP的阳性比例均较正常组、再障组和MDS组显著下降(P均<0.01);其中频发组较不发作组粒细胞CD55、CD59的表达有显著差异(P<0.05),红细胞CD55、CD59的表达无显著差异(P>0.05);再障组和MDS组患者红细胞和粒细胞CD55、CD59的表达率与正常对照组差异无显著性(P均>0.05)。结论:以流式细胞术检测外周血粒、红细胞CD55、CD59有助于PNH、AA和MDS的诊断与鉴别诊断。     

CD55、CD59检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症标准方法建立

目的建立流式细胞术(FCM)检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuriaP,NH)的标准方法。方法应用FCM对49例PNH病人,18例自身免疫性溶血性贫血(AIHA),10例缺铁性贫血(IDA),正常对照40例;采用活细胞直接免疫荧光标记法检测红细胞和粒细胞膜表面的CD55和CD59的表达。结果49例PNH病人除2例红细胞CD55-、CD59-的百分率小于5%,其余病例红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均大于5%(5.9%￣79.1%)。18例AIHA病人红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。10例IDA病人有8例红细胞CD55-、CD59-的百分率均大于5%(5.0%￣9.1%),而粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。40例正常对照红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。49例PNH病人蛇毒因子试验5例阴性;糖水试验4例阴性、酸溶血试验5例阴性。而这其中仅2例病人蛇毒因子试验、糖水试验、溶血试验同时阴性。其余病人蛇毒因子试验、糖水试验、酸溶血试验均阳性。结论同时检测红细胞和粒细胞膜的CD55和CD59诊断PNH,该方法的灵敏度与特异性均高达100%。因此,针对国内其他单位在开展此项目时仅检测CD55或CD59,或者只检测红细胞或白细胞的CD55、CD59的情况,作者认为同时检测红细胞和粒细胞膜的CD55和CD59诊断PNH是值得在临床推广的标准方法。     

急性髓系白血病患者外周血粒细胞、单核细胞膜GPI锚链和红细胞表面CD59表达水平的研究

目的通过流式细胞术研究急性髓系白血病(AML)患者粒细 胞、单核细胞糖基磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidyl inositol,GPI)锚链和红细胞CD59 表达水平及其临床意义。方法该研究纳入了36例并发血管内溶血的 AML患者及21例阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)患 者,依据国际临床流式细胞协会推荐的PNH流式诊断指南,分别对受试对象的红细胞和有核 细胞进行PNH克隆检测,统计分析AML患者粒细胞、单核细胞及红细胞PNH克隆的水平。结果AML组患者与PNH组患者相比较无明显红细胞CD59表达缺陷(I型红细 胞98.49±4.61 vs 61.41±25.86,Ⅱ型红细胞1.33±4.55 vs 16.82±19.92,Ⅲ 型红细胞0.17±0.85 vs 21.71±21.12,差异均有统计学意义( t =6.43,3 .41,4.71,均 P <0.001);粒细胞、单核细胞缺陷克隆检测存在但与PNH组比较则明 显减少(粒细胞26.46±23.36 vs 73.12±28.41,单核细胞35.80±27.80 vs 78.37 ±25.03,差异有统计学意义( t=4.59,3.76,均P <0.001)。结论AML患者有核细胞中可出现FLAER阴性的PNH克隆,但未见CD59表达缺陷的红细胞,可 与PNH区分。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血细胞表面CD55和CD59的检测及临床意义

目的探讨红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)诊断中的应用。方法采用流式细胞术结合直接免疫荧光法检测25例PNH、20例再生障碍性贫血(AA)、20例健康对照者外周血红细胞和粒细胞膜CD55和CD59抗原的表达,并同时做酸化血清溶血试验(Ham试验)、蔗糖溶血试验和尿含铁血黄素试验(尿Rous试验)。结果与AA组和健康对照组相比,PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜CD55、CD59表达缺失率均明显增高(P<0.05);而AA组和健康对照组缺失率均小于5%,且两者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。25例PNH患者中,9例Ham试验阴性,6例蔗糖溶血试验阴性,7例尿Rous试验阴性,这些患者的红细胞、粒细胞的CD55、CD59表达缺失率均大于5%。结论利用流式细胞术同时检测患者红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原对PNH的诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

健康人群外周血各类血细胞CD55／CD59的表达

目的了解健康人群外周血细胞CD55／CD59表达情况。方法用流式细胞仪检测健康人红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞膜上CD55／CD59表达。结果80名健康人外周血不同类型的血细胞膜上CD55／CD59表达不同。正常红细胞CD55／CD59双阳性的红细胞中位数为85．100％,阵发性血红蛋白尿症（PNH）细胞〈0,200％;正常中性粒细胞双阳性细胞中位数为99．900％,PNH细胞〈0．100％;单核细胞双阳性细胞的中位数为93．000％,PNH细胞〈2．900％。淋巴细胞双阳性细胞中位数为72．600％,PNH细胞〈18．000％。正常淋巴细胞中所含的PNH细胞比例明显高于其他细胞（P〈0．01）,且主要为T淋巴细胞。结论健康人的外周血各种血细胞CD55／CD59表达不同,分析结果有助于对PNH等干细胞疾病的诊断和发病机制进行探讨。     

PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增及植入体内重建造血的活性研究

本研究应用BALB／c裸鼠为移植模型探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobin—uria，PNH）患者CD34^＋CD59^＋的增殖和重建造血的能力，为实现PNH患者自体骨髓移植或自体外周血造血干细胞移植提供实验依据。利用免疫磁珠双阳性分选法，从正常人及PNH患者骨髓中分离出两组CD34^＋CD59^＋细胞，分别进行体外扩增，并将体外扩增的正常人和PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞分别输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。应用流式细胞技术和DNA检测技术检测受鼠骨髓、脾脏和外周血中人CD45^＋细胞。结果表明：PNH组的CD34^＋CD59^＋细胞在体外生存、扩增能力似弱于正常人对照组。但CD34^＋CD59^＋细胞输注给受鼠后6周，在受鼠骨髓、脾脏和外周血中可检测到人CD45^＋细胞，PNH组受鼠CD45^＋细胞水平与正常人对照组相比，无统计学差异。结论：PNH患者CD34^＋CD59^＋细胞仍具有同正常人CD34^＋CD59^＋细胞相同的生物特性，能体外扩增并能保持正常干／祖细胞的特性。     

CALR基因突变在骨髓增殖性肿瘤中的研究进展

经典的断裂点簇集区/Abelson白血病病毒（BCR/ABL）融合基因呈阴性的骨髓增殖性肿瘤（MPN）,包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（PMF）,为一组起源于多能造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病.近来,多项研究表明,多数Janus激酶（JAK）2 V617F突变呈阴性的MPN患者存在体细胞钙网蛋白（CALR）基因突变.笔者就CALR基因突变引发的MPN的发病机制、临床特征及诊断的研究进展进行综述.     

裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究

应用BALB／c裸鼠为移植模型，将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）病人的CD34^＋CD59^＋细胞进行移植。研究其增殖能力和重建造血的情况，为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法。从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34^＋CD59^＋细胞进行体外扩增，并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。结果显示：移植6周后，用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45^＋细胞，而接受PNH病人CD34^＋CD59^＋细胞移植后的裸鼠，其血常规指标有一定恢复，但并未完全恢复。结论：PNH病人骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性，在照射的裸鼠中能重建造血。     

GPI锚定蛋白抗体CD55、CD59及RET在贫血诊断中的意义探讨

目的检测几类贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜上糖化磷脂酰肌醇（GPI）连接的补体调节蛋白CD55和CD59表达情况,综合分析各类贫血中网织红细胞（RET）的变化特点,探讨他们在贫血中的诊断价值。方法荧光标记的CD55、CD59单克隆抗体,用流式细胞技术及亚甲蓝活体染色检测,30例正常人、25例缺铁性贫血（IDA）、26例巨幼细胞性贫血（MA）、27例自身免疫溶血性贫血（AHA）,27例再生障碍性贫血、21例再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿症（AA-PNH）、30例阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者外周血中CD55^-和CD59^-红细胞和中性粒细胞的百分率及REF值。结果正常人CD55^-、CD59^-红细胞和中性粒细胞的百分率均〈5％,44％的IDA患者CD55^-、CD59^-红细胞百分率在5％-20％之间,中性粒细胞的百分率〈5％,MA及AHA患者CD55^-、CD59^-红细胞和中性粒细胞百分率均〈5％。33％AA患者CD55^-、CD59^-细胞百分率在5％-15％之间。PNH及AA-PNH患者CD55^-、CD59^-细胞百分率均〉11％。与正常对照组比较,各类贫血间REY值差异显著（P〈0．01）。结论IDA、AA、AA—PNH、及PNH外周血中CD55^-、CD59^-百分率较正常对照组有不同程度增加,PNH最为明显,IDA变化最小。联合RET检查有助于各类贫血的诊断、鉴别诊断及愈后判断。     

原发性骨髓纤维化二例误诊为肝硬化讨论

目的总结原发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis,PMF）的病因、临床特点及误诊原因。方法对我院收治并误诊为肝硬化的PMF2例的临床资料进行回顾性分析,并复习近年相关文献。结果本文2例PMF均起病隐匿,无特异症状,病初均误诊为肝硬化、肝纤维化,后均经血常规及无创性肝纤维化评估法排除肝硬化,经骨髓穿刺活检确诊为PMF。结论接诊不明原因以肝、脾增大为主要表现的患者,在排除常见疾病后,应考虑PMF的可能,及时行骨髓穿刺检查。