非霍奇金淋巴瘤患者P-gp、P26-bcl-2表达的临床研究

目的：探讨多药耐药基因mdr-1及其蛋白P-gp，凋亡抑制基因bcl-2及其相关蛋白P26－bcl-2在中，高度恶性非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者中表达的临床意义及潜在的预后价值，方法：应用免疫组织化学S－P法对60例NHL患者进行检测，结果，60例患者中P-gp表达中P－gp表达阳性者15例，P26－bcl-2表达阳性者25例，P-gp和P26－bcl-2共同表达为性者的3年生存率明显高于阳性表达者（分别为48．48％和15．38％，P＝0．038），结论：P－gp,P26-bcl-2表达与中，高度恶性NHL患者的疗效果及预后相关，P－gp和P26－bcl-2共同表达情况可作为预测中，高度恶性NHL患者化疗敏感性及预后的指标。     

急性非淋巴细胞白血病联合药敏试验的初步研究

目的：为建立与联合化疗相适应的体外联合药敏试验。方法：用Ｃｈｏｕ＇ｓ半效原则分析法摸索出ＨＡ、ＤＡ、ＡＡ、ＭＡ、ＨＡＤ、ＨＡＡ、ＨＡＭ７种化疗方案各药之间的最佳联合比例,按这种比例关系,用ＭＴＴ法测定了７９例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者对该７种方案的体外敏感性。结果（体外／体内,Ｓ：敏感,Ｒ：耐药）：Ｓ／Ｓ６７例,Ｒ／Ｒ９例,Ｒ／Ｓ２例,Ｓ／Ｒ１例。与临床总符合率９６．２％;阳性符合率９８．５％;阴性符合率８１．８％;试验敏感性９７．１％;特异性８８．９％。结论：该研究探索的体外联合药敏试验与临床治疗敏感性有很好的相关性,试验敏感性与单药药敏试验相当,特异性优于单药药敏试验。     

胃癌形成中细胞凋亡与Fas蛋白、P糖蛋白的表达及相关性研究

目的：探讨癌前病变发展至胃癌过程中细胞凋亡、Fas蛋白、P糖蛋白（P－gp）表达的变化规律及相互关系。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口原位末端标记法（TUNEL）与免疫组织化学S－P法，分别检测胃良恶性病变细胞凋亡指数（AI）及Fas蛋白和P糖蛋白的表达。结果：AI、Fas蛋白、P－gp的表达在30例慢性浅表性胃炎组、36例癌前病变组（11例慢性萎缩性胃炎、12例重度肠上皮化生、13例中重度不典型增生）中的比较差异无显著性（P＞0．05）；而在36例癌前病变组与32例胃癌组中的比较差异有显著性（P＜0．05或P＜0．01），AI、Fas蛋白表达依次减少，P-gp表达增加；FI与Fas表达呈正相关、与P－gp呈负相关（P＜0．01）；Fas蛋白与P－gp的表达呈负相关（P＜0．01）。结论：癌前病变转化成胃癌的过程与细胞凋亡和Fas蛋白、P-gp的表达变化有关，Fas蛋白具有促凋亡作用，P－gp具有抗凋亡、耐药的双重作用。     

急性白血病患者P-gp、mdr1、MRP和Topo Ⅱ表达及其与预后关系的研究

目的 探讨P糖蛋白（P－gp)、mdr1、MRP和TopoⅡ是否为急性白血（AL）临床耐药的预后因素。方法 用单抗UIC2标记,流式细胞术测定45例AL患者的P－gp;用RT－PCR方法检测其mdr1、MRP和TopoⅡ的表达。结果 耐药组P－gp、mdr1、MRP阳性率均高于敏感组,P值均＜0．01,而TopoⅡ耐药组表达阳性率较敏感组降低,但差异无统计学意义。经单因素逻辑回归分析,P－gp、mdr、MRP、TopoⅡ和年龄与临床耐药性显著相关;性别、发病时白细胞计数、FAB亚型和骨髓原始＋（早）幼稚细胞比例与耐药性无关。采用多因素逻辑回归分析经以上变量校正后显示P－gp、mdr1、MRP、TopoⅡ和年龄仍与耐药性显著相关：P－gp RR=14.87,P=0.003;mdr1 RR=19.98,P=0.003;MRP RR=16.53,P=0.006;TopoⅡRR=0.23,P=0.046;年龄RR＝10．87,P＝0．013。将36例初发AL患者单独分析,结果发现P－gp、mdr1和MRP亦可完全缓解密切相关。经直线相关分析发现所有病例组和临床耐药组P－gp和mdr1,P-gp和MRP,mdr1和MRP具有相关性（P＜0．001）。结论 P－gp、mdr1、MRP和TopoⅡ是AL临床耐药的独立预后因素。mdr1和MRP具有相关性。     

环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 证实PSC833逆转剂的高效性，探讨PSC833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）为实验研究对象，采用MTT法检测细胞毒性；直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平；RT－PCR法检测mdr1 mRNA水平，以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素（DNR）的潴留来的反映P-gp的外排功能。结果 与K562细胞系相比，K562／A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P－gp高表达，DNR潴留减少。1μmol/L的PSC833对K562／A02铁mdr1 mRNA及P－gp表达水平无明显影响（P＞0.05），PSC833对K562／A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用，其增敏作用至少是环孢菌素A（CsA）、维拉帕米（Ver）的3倍。PSC833能增加K562／A02耐药细胞系的DNR潴留。1μmol/L的PSC833能使K562／A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%，而10μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%，PSC833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响（P＞0.05）。结论 PSC833较CsA、Ver逆转活性至少高3－10倍，其逆转K562／A02多药耐药的机制可能是通过抑制P－gp功能，而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平。     

P-糖蛋白在恶性肿瘤患者化疗时外周血中的表达

目的：探讨P-糖蛋白（P-gp）在恶性肿瘤患者外周血中的表达，研究其与化疗、逆转剂使用的相关性。方法：采用免疫组化SP法检测P-gp在试验组（化疗＋逆转剂三苯氧胺、异搏定治疗组，37例）与对照组（仅用化疗、方案同试验组，30例）恶性肿瘤患者外周血中的表达。结果：试验组与对照组患者P-gp表达阳性强度均下降（18／37及7／30），但两组差异有显著性（x^2=4．5392。P=0．0330）。结论：P—gp在恶性肿瘤患者化疗时外周血中的表达阳性强度下降。逆转剂能部分逆转P-gp在恶性肿瘤患者化疗时外周血中的过度表达，从而提高化疗效果，值得临床化疗过程中进一步应用。     

卵巢癌组织多药耐药性的临床研究

目的：研究多个耐药基因P－糖蛋白（P－gp)、谷胱甘肽S－转移酶（GST－π）、DNA拓朴异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）在卵巢癌组织中表现，探讨其在卵巢癌化学治疗耐药中的作用及与临床病理学特征间的关系。方法：应用免疫组织化学技术（SP法）对37例卵巢癌，10例卵巢良性肿瘤和8例卵巢组织中P－gp、GST－π、Topo-Ⅱ表达状况进行测定。结果：P－gp、GST－π和Topo-Ⅱ在卵巢癌组织中阳性表达均高于良性肿瘤和正常组织对照组；GST－π、Topo-Ⅱ在低分化癌中阳性率明显高于中高分化癌，但与肿瘤组织类型无关。GST－π与临床分期有关。P－gp表达与卵巢癌组织类型、分化、分期均无关。3者在卵巢癌组织中存在共同表达.结论：卵巢癌存在原发性耐药并涉及多个耐药基因的共同表达。联合检测对前瞻性预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有指导意义。     

汉防己甲素联合柔红霉素对K562／A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（TET）对人慢性髓系白血病（CML）急性红白血病细胞株K562／A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子（p21）、P糖蛋白（P—gp）及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础。K562／A02细胞实验分组为：①单用柔红霉素（DNR）对照组;②DNR＋TET0．5mg／L组;⑧DNR＋TET1．0mg/L组;④DNR＋TET2．0m8／／L组。采用Western blot法检测实验各组K562／A02细胞P21的表达。采用流式细胞仪（FCM）检测实验各组细胞P—gp的表达,采用半定量PCR（RT—PCR）测定细胞MDR1基因mRNA表达水平。结果表明：K562／A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P—gp蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低。K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562／A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加K562／A02细胞mdrl基因表达不断降低。结论：TET对K562／A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdrl及P—gp的表达有关,     

急性髓系白血病患者体外药敏试验和多药耐药基因mdrl的表达及其临床意义

多药耐药(MDR)是急性白血病化疗成功的主要障碍之一,其机理涉及诸多因素。建立能够体外准确预测化疗药物敏感性试验方法,在指导急性白血病治疗中具有重要意义。本文研究了42例急性白血病患者体外药敏检测(MTT法)和白血病细胞P-gp)抗原的表达与白血病化疗疗效的关系。结果显示:药敏试验与治疗疗效有相关性,临床总符合率82.9%,阳性符合率78.9％,阴性符合率86.9％。认为P-gp的表达是一个有效的化疗耐药指标,白血病缓解病人P-gp阳性率高于初诊病人,P-gp阳性表达的患者完全缓解率明显低于P-gp阴性患者。     

乳腺癌雌孕激素受体与C—erbB—2基因、多药耐药基因MDR1（P—gp）蛋白表达及相关分析研究

目的：观察乳腺癌组织中雌孕激素受体（ER、PR）与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1（P－gp)的蛋白表达并探讨其相互关系。方法：用免疫组织化学法（EnVision法）对109例术前未行化疗的乳腺癌手术切除标本福尔马林固定，石蜡包埋组织进行ER、PR、C-erbB-2、MDR1(P-gp)检测，结果作统计学分析。结果：（1）ER、PR阳性表这率分别为55．0％和43．％；（2）C-erbB-2、MDR1（P-gp)的阳性表达率各为54．1％和15．6％，乳腺导管内癌患者的C-erbB-2阳性表达高于浸润性导管癌的患者（P＜0．05）；（3）ER、PR均阳性患者的C-erbB-2阳性表达明显低于ER、PR均阴性患者（P＜0．05），ER阳性组的C-erbB-2阳性表达明显低于ER阴性组（P＜0．05）。结论：ER、PR与C-erbB-2基因乳腺癌中有一定的内在联系，C-erbB-2表达与ER表这呈负相关，多药耐药基因MDR1（P-gp）的表达与ER、PR无关。     

CRKL、PgP不同表达情况与白血病细胞耐药关系的临床研究

目的探讨CRKL高表达与白血病细胞多药耐药的关系和在耐药中的作用,为临床观察和判定预后提供新的参考依据和指标。方法应用免疫组化技术对59例急性髓系白血病患者骨髓PgP、CRKL表达情况进行检测。利用MTT技术体外观察两种蛋白表达对柔红霉素的敏感性。结果根据CRKL、PeP的表达,有4种情况：（1）两者均表达即双阳性CRKL^＋／PgP^＋,共17例;（2）CRKL^＋／PgP^-,共13例;（3）CRKL^-／PgP^＋,共18例;（4）两者均不表达即双阴性CRKL^-／PgP^-,共11例。CRKL、PgP表达与DNR对细胞抑制率的关系结果表明CRKL^-／PgP^＋组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〈0．01;CRKL^-／PgP^-组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〈0．01;CRKL^＋／PgP^＋组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〉0．05,CRKL^-／PgP^-组与CRKL^-／PgP^＋组比较,P〈0．01;CRKL^-／PgP^＋与CRKL^＋／PgP’组比较,P〈0．01。结论当两种蛋白表达均为阴性时,肿瘤细胞对化疗药物（柔红霉素）敏感性最高;而两者之一表达时肿瘤细胞均出现一定程度的耐药;当两者同时阳性时肿瘤细胞的耐药性明显增强,说明当两者同时表达时肿瘤细胞可以出现耐药的叠加作用。     

胃癌多药耐药相关基因表达与胶滴肿瘤药物敏感的关系

目的：探讨胃癌组织中多药耐药相关基因产物P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽-S-转移酶π（GST-π）和胸苷酸合成酶（TS）的表达与胶滴肿瘤药物敏感性之间的关系。方法：收集53例手术切除胃癌患者的胃癌标本,应用胶滴肿瘤药物敏感检测技术（CD-DST）检测其对4种临床常用化学治疗药物（多柔比星、依托泊苷、氟尿嘧啶、奥沙利铂）的体外药物敏感性,并应用免疫组化法检测胃癌组织中P-gp、GST-π和TS的表达,分析其与药敏检测结果的关系。结果：P-gp、GST-π和TS在胃癌组织中的阳性表达率分别为58%、47%和40%。P-gp阳性表达者中多柔比星及依托泊苷耐药组所占比例明显高于敏感组（P〈0.05）;GST-π阳性表达者中多柔比星及奥沙利铂耐药组所占比例也明显高于敏感组（P〈0.05）;TS阳性表达者中氟尿嘧啶耐药组和敏感组所占比例差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：P-gp、GST-π和TS高表达是胃癌对多种化学治疗药物具有耐药性的标志,结合体外药物敏感试验,将有助于临床筛选有效的化学治疗药物,实现胃癌的个体化化学治疗。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的影响

目的：研究甲基莲心碱（neferine,Nef)对化疗药物抗肿瘤活性的增敏作用，探讨其对多药耐药性（multidrug resistance,MDR）的影响。方法：以耐阿霉素人乳腺癌细胞（MCF－7／Adr)为多药耐药性模型，采用MTT法检测药物的细胞毒作用，高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内阿霉素（ADR）的浓度，间接免疫荧光流式细胞术检测细胞P－糖蛋白（Pglycoprotein,P-gp)表达，结果：（1）5，10umol/L Nef与不同浓度的ADR，5－氟尿嘧啶（5－FU）或顺铂（CDDP）合用时可增强上述化疗药物对人乳腺癌细胞（MCF－7／S）增殖的抑制作用。（2）10umol/L Nef可使MCF－7／Adr细胞内ADR积累由0．52ug/10^6细胞增加到1．50ug/10^6细胞。（3）10umol/L Nef作用24h后，MCF－7／Adr细胞P－gp的表达明显下降。结论：Nef能增强化疗药物的抗肿瘤作用，其逆转MCF－7／Adr细胞MDR的机理与增加细胞内ADR浓度和下调P－gp有关。     

EGCG增强人鼻咽癌细胞对化疗药物的敏感性分析

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞耐药的逆转作用。方法采用浓度梯度诱导建立对紫杉醇（TAX）耐药的鼻咽癌（KB）细胞株,SRB法测定其对TAX的敏感性;Western blot检测P-糖蛋白（P-gp）的表达情况。随后用1μmol/L EGCG与TAX以及耐药性KB细胞共同孵育,检测P-gp的表达情况以及耐药指数（RI）。结果建立的耐药细胞株对TAX的RI为62.2,P-gp表达水平明显高于对照组（P〈0.05）。EGCG、TAX与耐药性KB细胞共同孵育后,RI指数降至40.5,且P-gp蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 EGCG能逆转耐药细胞对TAX的耐药性,其机制可能与P-gp表达下调有关。     

卵巢恶性肿瘤组织中多药耐药性的研究

目的：观察卵巢恶性肿瘤组织中多药耐药基因的表达其表达与临床病理因素的关系。方法L采用免疫组化技术（S－P法）对40例卵巢恶性肿瘤组织中的P－糖蛋白（P-gp)、谷胱甘肽S－转移酶（GST－π）、拓扑异构酶（Topo-Ⅱ）等多药耐药基因的表达进行检测，分析其与病理类型，组织学分级，临床及分期化疗疗效的关系。结果：（1）40例卵巢恶性肿瘤中P-pg、GST－π、Topo-Ⅱ的阳性表达分别为为37．5％、55％、65％，其相互间均呈正相关，但三者与临床分期，术前化疗无关。（2）26例上皮性卵巢恶性肿瘤中P-pg、GST－π、Topo-Ⅱ的阳性率分别为60％、61．5％、52．2％，其相互间呈正相关，与病理分化有明显负相关，病理分化低其表达阳性率高。GST－π阳性率为临床分期有正相关关系（P＜0．05），但P－gp、Topo-Ⅱ与临床分期，术前化疗无相关关关系。（3）14例非上皮性卵巢恶性肿瘤中P-pg、GST－π、Topo-Ⅱ的阳性率分别为40％、38．5％、47．8％，其相互间均有正相关关系，三者与临床分期，术前化疗无相关关系。结论：本研究结果表明测定卵巢恶性肿瘤组织中的P-pg、GST－π、Topo-Ⅱ，根据其结果对选择化疗用药具有指导意义。     

靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用

目的 研究小干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞系K562／ADM细胞mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562／ADM为靶细胞，设计、筛选和合成2对针对mdr1基因mRNA的siRNA（mdr1 siRNA-1和mdr1siRNA-2），用脂质体介导转染K562／ADM细胞；实时荧光定量PCR（real—time PCR）法检测mdr1 mRNA的表达；流式细胞术测定P-糖蛋白（P—gP）水平和caspase-3活性；细胞形态学和FITC标记的膜联蛋白V／碘化丙锭（Annexin V—FITC／PI）双染色法检测细胞的凋亡。结果 筛选出的mdr1 siRNA-1和mdr1 siRNA-2显著抑制K562／ADM细胞mdr1的表达，mdr1 mRNA的表达分别降低91．2％和82．0％，P-gp水平下降74．1％和84．4％；增强caspase-3活性，活化caspase-3增加约40％；K562／ADM耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性增强，Annexin V—FITC／PI染色检测细胞凋亡率提高约60％。结论 siRNA通过沉默mdr1 ／P—gp表达而逆转K562／ADM多药耐药细胞的凋亡抑制现象。     

鼻咽低分化鳞癌细胞X射线照射后多药耐药基因的表达及功能

目的：检测鼻咽癌CNE2细胞射线照射前后多药耐药基因（mdr1基因）及其编码产物P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gP）的表达及其功能的变化。方法：利用RT-PCR、Westernblot和流式细胞仪检测CNE2细胞射线照射前后的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果：鼻咽癌CNE2细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达；射线照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达，对柔红霉素的摄取较射线照射前高。结论：鼻咽癌低分化鳞癌细胞CNE2射线照射后化疗敏感性增高，除了多药耐药机制外可能尚存在其他耐药机制。     

超声介导白蛋白微泡破裂对外源性基因在ECV304细胞和BALB/c鼠心肌中的表达

目的 探讨经超声介导白蛋白微泡破裂对外源性基因在体外ECV304细胞的转染效率及表达情况和在BALB／c鼠心肌中的表达及显像效果。方法 18只BALB／c小鼠分为裸质粒组（P组）、质粒＋超声介导转化组（P＋U组）、质粒＋白蛋白微泡＋超声介导转化组（P＋M＋U组），每组6只。选择携带增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）的质粒DNA并与自制的白蛋白微泡相混，以超声介导白蛋白微泡破裂方法分别在体外对ECV304细胞及体内对BALB／c鼠心肌细胞进行基因转染，并测定基因转染和表达效率。结果 体内和体外研究表明，超声介导的白蛋白微泡破裂组（P＋M＋U组）与P和P＋U组相比可明显提高外源性基因转染及表达效率（P〈0．01）。体外采用频率0．8MHz、声强1．0W／cm^2、10％占空比，并30s两次的超声介导白蛋白微泡破裂可有效稳定地转染EGFP基因在ECV304细胞中的表达，并对细胞无毒副作用；体内超声介导白蛋白微泡破裂后具有良好的心肌灌注显像效果。结论 超声介导的白蛋白微泡破裂是一种安全且有效的基因转染方法，在一定的超声条件下可明显提高外源性基因在体内和体外的转染和表达。     

抗P-gp/抗CD3双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病耐药细胞

目的研究抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体介导T细胞对白血病耐药细胞的特异性靶向杀伤活性。方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体可溶性表达产物，并用SDS—PAGE，Western blot及活细胞间接免疫荧光法鉴定纯化产物；采用人白血病耐药及敏感裸鼠移植瘤模型测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果纯化的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体具有与Jurkat(CD3阳性)和K562／A02细胞(P—gp阳性)的结合活性，结合阳性率分别为86．25％，86．26％；在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中，抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体能有效抑制耐药自血病移植瘤的生长，抑瘤率98．57％。结论抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤表达P—gp抗原的耐药肿瘤细胞，具有潜在的临床应用前景．     

5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究

本研究旨在探讨5一溴汉防己甲素（BrTet）和汉防己甲素（Tet）对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用。采用MTT法检测阿霉素（ADM）联合应用BrTet、TeL,对K562／A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术（FCM）检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白（P—gp）的表达;采用RT—PCR测定细胞mdrl基因mRNA表达水平。建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用。结果发现,BrTet在0．25、0．5以及1μmol／L浓度条件下对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562／A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P—gp的表达,下调mdrl mRNA的表达。在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM对K562／A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5．8％上升至26．1％,而在K562移植瘤中没有显著差异。结论：BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P—gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关。