不同培养基上的类鼻疽伯克霍尔德菌Vitek 2 compact GN卡鉴定结果分析

目的 评估不同培养基上类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)Vitek 2 compact的鉴定结果。方法 收集2010年1月-2017年5月间海南省人民医院类鼻疽伯克霍尔德菌127株,分别将其接种于三种不同培养基上,以多位点序列分型(MLST)为金标准,评估不同培养基上生长的类鼻疽伯克霍尔德菌,采用Vitek 2 compact VT2.R7.01版的 GN卡进行鉴定并比较其准确性。结果 哥伦比亚羊血平板(CBA)上的类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定准确率最高,为98.4%,2株被鉴定为洋葱伯克霍尔德菌；麦康凯平板(MAC)次之,准确率为94.5%,其中4株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌,2株无法鉴定到种,1株被错误鉴定为铜绿假单胞菌；流感嗜血巧克力平板(CHA)鉴定准确率最低,为91.3%,其中4株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌,3株无法鉴定到种,4株鉴定不出结果。结论 该研     

自动细菌鉴定仪对布鲁菌误鉴定原因及临床影响分析

目的探讨Vitek Compact微生物自动鉴定仪器对1例布鲁菌误鉴定原因及临床影响分析。方法 1例无明显诱因发热患者血培养分离菌株,采用Vitek Compact细菌鉴定系统,形态学、传统手工生化对分离株进行鉴定。采用PCR扩增16S rRNA基因并测序,对所测得的核酸序列进行同源性比对分析。结果从该患者血液中分离到1株缓慢生长的革兰阴性短小杆菌,Vitek Compact鉴定仪器,GN鉴定卡首次鉴定为支气管炎鲍特菌,基于16S rRNA基因序列分析表明,菌株与马耳他布鲁菌或人苍白杆菌核酸匹配度高达100%,完全排除支气管炎鲍特菌的可能。将保存的菌株用Vitek Compact鉴定仪器,GN鉴定卡复检,结果为马耳他布鲁菌。结论 16S rRNA基因序列分析是鉴定临床非发酵革兰阴性杆菌的最有效手段,微生物自动鉴定仪器鉴定慢生长细菌如布鲁菌等有明显局限性,对布鲁菌病等传染病的临床治疗及流行病学调查可产生误导。     

70株室间质量评价菌株鉴定差异及其纠正方法探讨

目的探讨对经过全自动微生物分析仪Vitek 2 Compact、基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪Vitek MS鉴定为“不确定”菌,以及在不同显色平板上产生类似色素菌的进一步鉴定方法,以明确病原学诊断。方法对来自国家卫生健康委临床检验中心与广东省临床检验中心室间质量评价菌株中的“不确定”菌70株,使用不同的鉴定系统结合表型特征、血清学试验进行鉴定,并对显色平板上产生类似色素的菌株做补充鉴定。结果自动化微生物鉴定系统报告的32株“不确定”菌中,Vitek 2 Compact有65.6%(21/32)需要进一步鉴定,Vitek MS有59.4%(19/32)需要进一步鉴定,部分菌株在2种自动化微生物鉴定系统间的鉴定结果存在差异;32株“不确定”菌经不同鉴定系统、表型特征、血清学试验鉴定,全部鉴定到种/型水平。对念珠菌平板等3种不同显色平板上产生类似色素的38株菌的补充鉴定,结果全部为非目标菌。结论通过不同鉴定方法的互补,可以提高临床微生物鉴定的质量。     

两种全自动微生物鉴定系统在布鲁菌鉴定中的应用比较

目的 比较Vitek2 Compact和Walkaway 40全自动微生物鉴定系统在布鲁菌鉴定中的应用。方法 临床分离菌株,采用Vitek2 Compact和Walkaway 40全自动微生物鉴定系统进行鉴定,并将鉴定结果和16S rRNA基因序列检测的结果进行比较。结果 临床分离菌株经Vitek2 Compact GN鉴定卡鉴定为马耳他布鲁菌,Walkaway 40 NC31鉴定卡鉴定为动物溃疡威克斯菌、莫拉菌属等。16S rRNA基因序列分析表明,该临床分离菌株的16S rRNA基因序列与布鲁菌匹配,排除动物溃疡威克斯菌、莫拉菌属等的可能,确定该菌株为马耳他布鲁菌。结论 Vitek2 Compact可以准确的鉴定出布鲁菌,经Vitek2 Compact鉴定为布鲁菌后,可采用分子生物学方法进行佐证,大大地提高了布鲁菌的检出率,降低误诊的可能性。Walkaway 40无法准确的鉴定出布鲁菌,误鉴定会导致错误的治疗并使工作人员处于实验室获得性感染的危险之中。建议使用Walkaway 40的实验室在鉴定出动物溃疡威克斯菌或莫拉菌属等细菌时应谨慎报告,并使用Vitek2 Compact或分子生物学方法进行复查。     

泰国伯克霍尔德菌错误鉴定1例

目的鉴定1例曾被错误鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌的泰国伯克霍尔德菌。方法对1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本进行细菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验鉴定。结果培养出革兰阴性短小杆菌;生化鉴定特征符合泰国伯克霍尔德菌;测序结果显示与泰国伯克霍尔德菌相似度达100%,与类鼻疽伯克霍尔德菌相似度为99%;全基因组测序结果显示该菌与泰国伯克霍尔德菌E444具有最近的亲缘关系。药敏试验结果显示该菌对亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感。结论成功鉴定了1例泰国伯克霍尔德菌。     

类鼻疽伯克霍尔德菌误鉴定1例

正伯克霍尔德菌(Burkholderia)是一种革兰阴性非发酵菌,其中与人类疾病相关的病原菌主要包括洋葱伯克霍尔德菌复合群(B.cepacia complex)、类鼻疽伯克霍尔德菌复合群(B.pseudomallei complex)等。而类鼻疽伯克霍尔德菌复合群可进一步分为类鼻疽伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌(B.mallei)、泰国伯克霍尔德菌(B.thailandensis)、俄克拉何马伯克霍尔德菌(B.oklahomensis)和汉普蒂社伯克霍尔德菌(B.humptydooensis)5个种[1],其中除泰国伯克霍尔德菌毒力较     

环介导恒温扩增结合纳米生物传感器快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法及临床应用

  目的   建立一种环介导恒温扩增（LAMP）结合纳米生物传感器（LFB）快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的快速方法,为临床检测提供依据。  方法   针对类鼻疽伯克霍尔德菌的Ⅲ型分泌系统基因设计LAMP特异性引物,建立LAMP方法,通过纳米生物传感判断结果,并应用临床样本对该方法进行评价。  结果   LAMP-LFB检测的最佳扩增条件为67 ℃反应40 min,对类鼻疽伯克霍尔德菌纯培养物DNA灵敏度达到100 fg,对258株菌株进行检测,包括227株类鼻疽伯克霍尔德菌和31株非类鼻疽伯克霍尔德菌,特异性为100%。 应用于46个临床样本检测时,与传统分离培养方法相比,达到100%的诊断准确率。 LAMP-LFB整个检测过程可在1 h内完成,包括15 min DNA制备,40 min LAMP扩增,2 min的LFB结果判读。  结论   本研究建立的LAMP-LFB技术是一种快速、灵敏、特异的检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,可作为类鼻疽基础、现场和临床实验室诊断的潜在工具。     

类鼻疽伯克霍尔德菌在青瓜和生菜幼苗中的定植情况研究

  目的  研究类鼻疽伯克霍尔德菌在青瓜、生菜幼苗中的定植情况。  方法  用海南省三亚市人民医院保存的类鼻疽伯克霍尔德菌BP47、BP56、BP66分别感染青瓜、生菜无菌幼苗根部和叶片，从被感染幼苗根部与叶片的研磨液中分离该菌。 采用菌落平板计数检测被感染第1、3、5、7天的幼苗叶片中类鼻疽伯克霍尔德菌的增殖情况，绘制增殖曲线。 通过透射电镜对幼苗叶片中的类鼻疽伯克霍尔德菌进行定位。  结果  从被感染的青瓜、生菜幼苗中分离到了类鼻疽伯克霍尔德菌，而且该菌可以在幼苗中增殖，菌量随着时间推移而增加。 通过透射电镜在青瓜、生菜幼苗叶片中也观察到了该菌定植。  结论  类鼻疽伯克霍尔德菌可以在一些生食类蔬菜（青瓜、生菜）幼苗中定植，为探究其新的感染方式提供了实验依据。     

全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌药敏测定能力的评估

目的评估Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关革兰阴性菌和革兰阳性菌的药敏测定能力。方法选取89株北京协和医院临床菌株（革兰阴性菌48株，革兰阳性菌41株）和66株本实验室保存的参考菌株（革兰阴性菌41株，革兰阳性菌25株）为评估菌株，分别采用Vitek 2 Compact AST-GN09（革兰阴性菌）、AST-P536（葡萄球菌）、AST-P534（肠球菌和无乳链球菌）和AST-P533（肺炎链球菌）药敏卡进行药敏测定，测定结果与参考方法Etest结果进行对照。32株以CLSI纸片确证法检测为ESBL阳性的菌株（其中包括16株经PCR扩增测序确定产SHV或CTX-M型ESBLs的菌株），以Vitek 2 Compact检测其是否产ESBLs。结果根据临床和实验室标准协会（CLSI）规定的药敏折点，对Vitek 2 Compact和Etest法测得的药敏结果进行解释，在全部的1626株细菌一抗生素组合中，Vitek 2 Compact药敏测定的标准符合率（CA）为90．83％，严重错误（VME）为4．91％，重大错误（ME）为2．09％，一般错误（MIE）为6．40％。90％以上的肠杆菌科菌、非发酵糖菌、微球菌科菌和链球菌科菌分别在11、13、11和12h内完成测定。32株ESBL阳性菌以Vitek 2 Compact检测均为阳性。结论Vitek 2 Compact能够对临床相关革兰阴性菌和革兰阳性菌的药物敏感性进行准确、快速的测定，对ESBLs检测的敏感性、特异性高，是临床微生物实验室的有利工具。     

Microflex~(TM) MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对肠杆菌科细菌鉴定能力的比较

目的比较MicroflexTM基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法采用MicroflexTMMALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact同时对545株肠杆菌科质控菌株和临床分离菌株进行鉴定,鉴定结果不一致者采用沙门菌血清凝集试验或细菌16S r DNA基因测序予以确证。结果 MicroflexTMMALDI-TOF MS对545株细菌的种和属的鉴定率分别为97.1%、2.9%。Vitek 2 Compact对545株细菌的种、群、属的鉴定率分别为83.3%、13.9%和2.2%,鉴定错误率为0.2%,未鉴定率为0.4%。结论 MicroflexTMMALDI-TOF MS对肠杆菌科细菌的鉴定符合率高于Vitek 2 Compact,且操作快速、简便,成本低,可用于临床肠杆菌科细菌的常规快速鉴定。     

12例慢性化脓性中耳炎分离西弗射盾子囊霉的鉴定特征分析

目的分析自慢性化脓性中耳炎患者中耳分泌物分离的西弗射盾子囊霉的实验室检查特征,为少见真菌的诊治提供依据。方法纳入西弗射盾子囊霉相关慢性化脓性中耳炎患者12例。培养其中耳分泌物,观察真菌的菌落特征和镜下特征,采用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行菌种鉴定。结果西弗射盾子囊霉在血平板、巧克力平板和沙氏平板等临床常用培养基上均可生长,且在28℃和35℃均生长较好。培养1周后菌落呈奶油色、镶嵌生长,质地硬,周边呈花边样。该菌在科玛嘉念珠菌显色培养基上为中央蓝色、边缘白色的凸起小菌落。镜下特征为孢子和菌丝同时可见,小培养观察时可见菌丝有分隔,真菌孢子呈芽生型、形态卵圆、部分可沿菌丝排列。西弗射盾子囊霉可同化利用许多碳水化合物和常见氨基酸。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统可鉴定该菌。结论西弗射盾子囊霉是一种非常少见的机会致病性真菌,临床实验室应重视中耳分泌物中此真菌的培养鉴定。     

Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌的应用及评价

目的回顾分析室间质评1304号菌株的鉴定过程,评价Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact系统)在临床少见疑难细菌鉴定中的应用。方法采用传统的细菌形态学检查、手工生化反应及Vitek 2 Compact系统等多种手段对1304号菌株进行鉴定分析,同时用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪对最终鉴定结果进行佐证。结果 1304号菌株为革兰阴性小杆菌,氧化酶试验阳性,初次上机鉴定结果为支气管炎鲍特菌,鉴定率99%,转种分纯后2次上机鉴定结果为低分辨,粪产碱杆菌占51%,类产碱假单胞菌占49%,补充硝酸盐还原试验,结果为阴性,报告最终鉴定结果为粪产碱杆菌,质谱鉴定得分值为2.158,与最终结果相符。结论 Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌有一定局限性,遇到少见疑难细菌应该用多种方法加以确定,综合分析以免造成错误鉴定。     

MALDI-TOF MS在中段尿样本细菌直接检测中的应用

目的运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定系统对中段尿样本中的细菌进行直接快速检测,以建立快速的细菌检测方法便于临床应用。方法 692例中段尿样本接种于固体培养基上,利用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对单个菌落进行鉴定;同时对尿液样本进行前处理后直接进行质谱分析。结果 692例中段尿样本中,98例单一菌感染且细菌数104CFU/m L的样本应用MALDI-TOF MS直接检测出74株菌,检出率达75.5%,其中大肠埃希菌39株,检出率达79.6%;粪肠球菌23株,检出率为100.0%;摩根摩根菌5株,检出率为100.0%。64例样本为2种菌混合感染,采用MALDI-TOF MS直接检测出44例样本中的1种优势细菌。质谱直接检测尿液的鉴定结果与单菌落质谱鉴定结果及Vitek 2 Compact鉴定结果完全一致,符合率为100.0%。结论 MALDI-TOF MS可用于直接检测尿液样本中的细菌,检出率高,结果可靠;MALDI-TOF MS对混合菌感染的样本有一定鉴定能力;该方法可比常规尿培养鉴定方法提早42 h报告鉴定结果,是对临床尿液样本细菌鉴定的一大革命性进步。     

Vitek MS与Bruker MS对希木龙念珠菌复合体鉴定能力评估

目的评估中国医院侵袭性真菌监测网(CHIF-NET)2010-2015年收集的希木龙念珠菌复合体原始鉴定、Vitek MS和Bruker MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定结果。方法收集CHIF-NET 2010-2015年40株希木龙念珠菌和5株假希木龙念珠菌,所有菌株均经过分子生物学方法进行复核鉴定确认。以复核鉴定结果作为"金标准",评估各医院原始常规方法鉴定结果,并评估Vitek MS和Bruker MS对希木龙念珠菌复合体的鉴定性能。结果与分子生物学复核鉴定结果相比,希木龙念珠菌的原始鉴定准确率为47.5%,分别有15%的菌株被显色培养,ATB Rapid ID32C,API 20C或Vitek 2Compact错误鉴定为奥默毕赤酵母和新型隐球菌;常规鉴定方法无法鉴定假希木龙念珠菌,其中3株被错误鉴定为希木龙念珠菌;与分子生物学鉴定结果相比,Vitek MS IVD2.0和Bruker MS DB 5 989对希木龙念珠菌的鉴定准确率分别为100.0%和57.5%。Vitek MS IVD 2.0数据库中无假希木龙念珠菌的参考谱图,故将5株菌全部错误鉴定为希木龙念珠菌,且可信度90%。Vitek MS RUO数据库中无希木龙念珠菌复合体参考谱图,故无鉴定结果。Bruker MS DB 5989对假希木龙念珠菌的菌种鉴定准确率为20%。Bruker MS自建库后对所有菌株均能正确鉴定到种水平。结论该研究率先在国内评估了Vitek MS与Bruker MS鉴定希木龙念珠菌复合体的性能,对于少见菌种的鉴定可通过增加数据库质谱谱图提高质谱的鉴定能力。     

10株蜃楼弗朗西斯菌的鉴定与特征分析

目的对10株蜃楼弗朗西斯菌样细菌进行菌种鉴定和特征分析。方法对环境水源及临床患者样本中分离的10株实验菌株,进行菌体形态和生长特征观察、生化表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rRNA测序分析。E-test方法检测菌株对各种药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果该10株菌均为着色较淡的革兰阴性小球杆菌;尿素酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、V因子和X因子需求试验阴性,氧化酶和触酶试验阳性;在M-H平板和麦康凯平板上不生长,血平板、巧克力平板和BCYE平板上生长迅速,可形成白色不透明型、无色透明型和灰色光滑型,直径约2 mm大小的菌落。16S rRNA基因测序显示,该10株菌与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015同源性在99.6%以上,系统发育分析亦位于同一个分枝上。MALDI-TOF MS分析显示,该10株均含有6 153 m/z、5 180 m/z、7 757 m/z和9 392 m/z等特征峰,与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015类似。采用Vitek 2 GN卡及NH卡、API 20NE及NH试条则可能错误鉴定为少动鞘氨醇单胞菌、灰色奈瑟菌、气味黄杆菌和嗜血杆菌等。药敏试验显示,对氯霉素、多西环素、庆大霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星等均敏感。结论该10株菌可鉴定为蜃楼弗朗西斯菌,其生化反应不活泼,常规方法鉴定会发生错误,应予以重视。     

临检标本中洋葱假单胞菌的鉴定

洋葱假单胞菌作为条件致病菌日益受到人们重视.现将我院分离到的7株洋葱假单胞菌报告如下. 1 材料与方法 1．1 材料 临检标本均来自住院患者,包括儿童及成年人. 1．2 培养基 除血培养瓶为自制外,其余培养基均为浙江省军区卫生防疫检验所生产. 1．3 方法 将患者标本接种于中国兰平板和血平板上,经35℃18小时培养后分别进行细菌学鉴定. 1．4 鉴定 根据细菌的菌落特征,经革兰氏染色,氧化酶试验等及双糖铁培养基生长情况,如疑为非发酵菌群者,进一步按Roche《非发酵菌及其编码鉴定手册》和《全国临床检验操作规程》要求进行. 1．5 洋葱假单胞菌…     

临床分离洋葱伯克霍尔德菌鉴定方法的探讨

目的：探讨建立简便、实用鉴定临床分离洋葱伯克霍尔德菌的方法。方法：对临床分离的38株菌和4株标准菌株用表型和洋葱伯克霍尔德菌群特异引物聚合酶链反应（PCR）进行鉴定确认，再用由三糖铁琼脂、氧化酶试验、产黄色素、触酶试验、纸片扩散法抗生素谱组成的方法进行鉴定。结果：PCR扩增阳性菌在三糖铁琼脂上均不利用葡萄糖且氧化酶阳性、触酶延迟反应，抗生素谱中亚胺培南耐药、头孢呋辛、复方新诺明敏感或中度耐药。在PCR阴性组中仅1株临床菌触酶延迟反应，鉴定为伯克霍尔德菌属细菌。结论：利用三糖铁琼脂、氧化酶试验、触酶试验、抗生素耐药谱可对洋葱伯克霍尔德菌鉴定到种水平。     

洋葱伯克霍尔德菌携带整合子的分布与耐药性关系

摘要 目的 <\b> 研究临床分离洋葱伯克霍尔德菌中Ⅰ类整合子的流行现状以及其耐药性,为防控耐药菌形成和扩散提供理论依据。方法 <\b>　采用基因扩增技术和药敏试验方法,对某医院临床分离洋葱伯克霍尔德菌复合群进行检测与分析。结果 <\b> 从确认的54株洋葱伯克霍尔德菌复合群中,检出l6株携带整合酶Ⅰ,阳性率为29.63%;检出10株携带整合子Ⅰ,阳性率为18.52%;未检出Ⅱ类整合子和整合酶基因阳性菌株。Ⅰ类整合酶阳性菌株对左氧氟沙星和头孢他啶等抗菌药物的耐药率显著高于整合酶阴性菌株。结论 <\b> 洋葱伯克霍尔德菌携带Ⅰ类整合子与多重耐药具有相关性。     

全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌和酵母菌鉴定能力的评估

目的评估Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌和酵母菌的鉴定能力。方法选取本院185株临床菌株（革兰阳性菌69株，革兰阴性菌66株，酵母菌50株）和50株本实验室保存的参考菌株（革兰阳性菌和革兰阴性菌各25株）为评估菌株，采用Vitek 2 Compact GP卡、GN卡和YST卡进行鉴定，其结果与参考方法API鉴定结果进行对照，所有低分辨及属对种错鉴定菌株均进行重复鉴定。结果在93株革兰阳性菌中有85株（91．加％）得到正确鉴定，其中5株（5．38％）为低分辨鉴定，另有8株（8．60％）为属对种错鉴定，90％的革兰阳性菌的鉴定在7h以内完成。在91株革兰阴性菌中90株（98．90％）为正确鉴定，其中5株（4．4％）为低分辨鉴定，仅1株（1．1％）为属对种错鉴定，90％以上肠杆菌科菌的鉴定在5h以内完成，90％以上非发酵糖菌的鉴定则在10h内完成。在50株酵母菌中46株（92％）为正确鉴定，其中8株（16％）为低分辨鉴定，另有4株（8％）为属对种错鉴定，45株（90％）在18．25h完成鉴定，5株（10％）在18．50h完成鉴定。结论Vitek 2 Compact能够对临床相关细菌和酵母菌进行可信的鉴定，并能大幅缩短常规鉴定时间，是临床微生物实验室病原菌诊断的有力工具。     

自动化细菌鉴定仪和碳青霉烯酶基因OXA-51扩增在不动杆菌属细菌鉴定中的价值

目的 评价自动化细菌鉴定仪Phoenix和Vitek2 Compact以及碳青霉烯酶基因OXA-51(blaOXA-51-like扩增在不动杆菌属细菌鉴定中的价值.方法 收集2006-2007年北京协和医院临床标本中分离的非重复不动杆菌属细菌50株,以扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析(amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)为参考方法,分别采用blaOXA-51-like基因扩增和Phoenix、Vitek2 Compact细菌鉴定仪进行鉴定.结果 与ARDRA分子鉴定结果进行对比,blaOXA-51-like基因扩增鉴定方法敏感度为100%,特异度为100%;细菌鉴定仪Phoenix和Vitek2 Compact鉴定到种的准确率分别为44%和56%.结论 不动杆菌属仪器表型鉴定准确率不高;对于鲍曼不动杆菌,blaOXA-51-like基因扩增为一种快速可靠的鉴定方法.在研究不动杆菌的耐药机制或同源性分析时,可采用ARDRA方法进行鉴定.