双歧杆菌的脂磷壁酸对巨噬细胞MAPK的影响

目的探讨双歧杆菌的脂磷壁酸(LTA)对巨噬细胞丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法选取6~8周龄巴比赛(BALB/c)小鼠90只,按随机数字表达法分为九组,每组10只,A组腹腔注射磷酸缓冲盐溶液(PBS);B组腹腔注射LTA;C组腹腔注射LTA+细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂;D组腹腔注射LTA+c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂;E组腹腔注射LTA+p38抑制剂;F组腹腔注射LTA+ERK及JNK抑制剂组;G组腹腔注射LTA+ERK及P38抑制剂组;H组腹腔注射LTA+JNK及P38抑制剂;I组腹腔注射LTA+3种抑制剂。九组小鼠注射5d,每天注射1次,饲养7d后,处死全部小鼠,采用免疫印迹法检测九组小鼠腹腔巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2、p38MAPK和JNK蛋白的磷酸化水平。结果 (1)B组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平较A组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);两组小鼠腹腔巨噬细胞p38MAPK和JNK平均荧光强度差异无统计学意义(P0.05);(2)向小鼠腹腔注射抑制剂的其他七个组别,其相应的蛋白表达水平几乎为零,且对其他蛋白表达无影响。结论 LTA可能是通过活化巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2来激活巨噬细胞表达、合成和分泌细胞因子,抑制剂能够有效阻断蛋白表达通路,对其他蛋白表达无影响。     

组织因子在移植物抗宿主病患者内皮损伤中的作用机制研究

8MAPK和JNK磷酸化增强,而磷酸化ERK无变化.p38MAPK和JNK阻滞剂可显著降低异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞诱导HUVEC的TF表达.抗TF抗体和p38MAPK、JNK阻滞剂均可下调异基因T淋巴细胞诱导的HUVEC中VCAM-1、TNF-α、IFN-γ和IL-6的表达.结论 TF通过细胞内信号通路p38MAPK和JNK参与了GVHD导致的血管内皮细胞损伤和活化.     

p38MAPK和JNK在大鼠肾缺血-再灌注损伤模型中的表达及意义

目的 观察p38MAPK、JNK在肾缺血-再灌注损伤大鼠肾组织中的表达和活化,从而探讨p38MAPK、JNK信号转导通路与肾缺血-再灌注损伤的关系.方法 用缺血1 h再灌注1 h 制备缺血-再灌注模型,20只健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]随机分为假手术组(n=10)、缺血-再灌注损伤组(n=10).检测肾组织丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度.观察肾组织光镜、电镜下的形态学变化,用RT-PCR技术检测两组肾组织p38MAPK、JNK mRNA的表达情况,Western印迹法观察p38MAPK、JNK的活化情况.结果 缺血-再灌注损伤后,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,BUN、Cr、MDA浓度均高于假手术组(P<0.01),SOD活性低于假手术组(P<0.01),p38MAPK、JNK磷酸化蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血-再灌注损伤后磷酸化p38MAPK、JNK呈阳性表达(P<0.01).p38MAPK、JNK mRNA在缺血-再灌注损伤组的表达较假手术组显著增高(P<0.01).结论 肾缺血-再灌注可增加p38MAPK、JNK的磷酸化水平及p38MAPK、JNK mRNA的转录水平,p38MAPK、JNK可能在肾缺血-再灌注损伤中起到至关重要的作用.     

电磁场作用下大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化与增殖

目的研究15Hz 1mT的正弦波电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的细胞外信号调节激酶（ERK）和丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）p38的激活规律及相互作用特点,探讨ERK和p38 MAPK信号通路在电磁场促成骨效应中的作用。 方法选取第3代体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞,分为对照组、曝磁组、曝磁+PD98059组和曝磁+SB202190组四个大组。曝磁组细胞置于带有电磁发生器的培养箱中培养,曝磁+PD98059组和曝磁+SB202190组细胞分别加入ERK信号通路阻断剂PD98059和p38 MAPK信号通路阻断剂SB202190后再置入带有电磁发生器的培养箱中培养,对照组细胞正常培养。用免疫印迹（Western blot）法检测ERK和p38 MAPK的蛋白表达及磷酸化水平变化。按照细胞碱性磷酸酶（ALP）试剂盒说明书操作步骤对各组细胞ALP活性进行检测,其活性变化可间接反映细胞的分化成骨活性;用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖活性变化。 结果①电磁场作用下,骨髓间充质干细胞内p38 MAPK信号通路可被快速激活,曝磁15min后出现p38磷酸化水平升高（P<0.05）;加用SB202190后,再行电磁场刺激,细胞内p38磷酸化水平仍然维持在较低水平,与曝磁组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。②与对照组比较,曝磁5d后细胞内ALP活性显著升高(P<0.05),SB202190可明显阻断该效应(P<0.05)。③与对照组比较,曝磁3d后骨髓间充质干细胞的增殖活性明显升高(P<0.05),SB202190不能阻断该效应(曝磁+SB202190组与曝磁组比较,P>0.05)。④SB202190阻断p38 MAPK信号通路并曝磁5min后,ERK MAPK磷酸化水平明显强化(P<0.05);PD98059阻断ERK MAPK信号通路并曝磁30min后,p38 MAPK磷酸化水平明显强化(P<0.05)。 结论ERK和p38 MAPK信号通路分别参与了电磁场对骨髓间充质干细胞增殖和分化成骨过程的调节,并在电磁场作用下两通路表现出串扰现象。     

miR-188-5p通过靶向调控丝裂原活化蛋白激酶信号通路对大鼠移植肾慢性排斥反应的作用

目的探讨miR-188-5p通过靶向调控丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路对大鼠移植肾慢性排斥反应的作用。方法 SPF级F344大鼠20只和Lewis大鼠40只,其中以Lewis大鼠供体10只、受体10只进行肾移植为对照组;以F344大鼠20只为供体,Lewis大鼠20只为受体行肾移植建立大鼠慢性排斥反应模型,并分为模型组和过表达组。3组均于术后连续注射环孢素A 1.5 mg/kg 10 d。过表达组术后当天同时注射miR-188-5p高表达慢病毒颗粒0.1 mL,对照组与模型组分别注射等量生理盐水。术后12周观察3组大鼠存活情况,比较3组大鼠肾功能指标;观察3组大鼠移植肾组织病理变化情况,采用慢性移植肾损伤指数评分系统评价移植肾损伤情况;采用反转录PCR法检测移植肾组织miR-188-5p、p38MAPK、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase 1/2, ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测p38MAPK、ERK1/2、JNK蛋白及其磷酸化蛋白相对表达量,并比较p-p38MAPK/p38MAPK、(p-ERK1/2)/(ERK1/2)、p-JNK/JNK。结果术后12周3组大鼠均存活。模型组和过表达组血清肌酐水平、24 h尿蛋白定量、慢性移植肾损伤指数评分高于对照组(P0.05),模型组高于过表达组(P0.05)。移植肾组织病理学观察,对照组存在交界性改变,仅少量炎症细胞浸润;模型组慢性排斥反应病理改变明显,过表达组较轻。过表达组移植肾组织miR-188-5p相对表达量(1.90±0.22)高于模型组(0.62±0.18)和对照组(1.02±0.25)(P0.05),对照组高于模型组(P0.05);模型组p38MAPK、ERK1/2、JNK mRNA相对表达量,p-p38MAPK、p38MAPK、p-ERK1/2、ERK1/2、p-JNK蛋白相对表达量及p-p38MAPK/p38MAPK、(p-ERK1/2)/(ERK1/2)、p-JNK/JNK高于过表达组和对照组(P0.05),过表达组高于对照组(P0.05)。结论 miR-188-5p可有效抑制大鼠移植肾慢性排斥反应,其机制可能与靶向调控MAPK信号通路中相关基因的表达及蛋白磷酸化过程有关。     

抑制NHE1和p38 MAPK通路增加白血病细胞对伊马替尼的敏感性

本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病（CML）患者细胞的BCR／ABL下游分子网络。对CML患者原代白血病细胞或K562／DOX,K562／G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白（Pgp）基因及蛋白表达,药物在细胞内蓄积。考察细胞酸化后原代白血病细胞ERK1／2、p38MAPK磷酸化水平的变化。结果表明：细胞酸化后进展期患者细胞内药物蓄积增加,对伊马替尼的敏感性增强。随着细胞内pH的降低,进展期CML患者的细胞内p38MAPK磷酸化水平呈下降趋势,ERK1／2磷酸化水平3min时升高、30min后下降。特异性p38MAPK抑制剂SB203580可与NHEl抑制剂卡立泊来德协同下调Pgp蛋白的表达。结论：抑制NHE1活性能够显著降低耐药细胞中Pgp表达,增加CML疾病进展期患者细胞中罗丹明123及阿霉素的累积,增加细胞对伊马替尼的敏感性,p38MAPK信号传导通路参与其中。     

TDP-43介导信号通路对骨关节炎大鼠作用机制分析

目的 探讨TDP-43基因表达干预炎症因子和缺血缺氧应激依赖的JNK和p38MAPK信号通路的机制。方法 选取60只SD大鼠,分为正常对照组(正常SD大鼠,不进行任何处理)、骨关节炎(OA)模型组和TDP-43-m MSCs+OA组,每组20只。OA模型组和TDP-43-m MSCs+OA组,采用胶原酶注射建立大鼠OA模型。对TDP-43-m MSCs+OA组大鼠进行TDP-43-m MSCs移植。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的水平;采用Western blot法检测各组大鼠软骨组织中TDP-43、RACK1、MTK1、MAPKKK磷酸化的表达、应激颗粒(SGs)的形成及JNK和p38 MAPK信号通路的蛋白变化。结果 OA模型组大鼠软骨组织中TDP-43的蛋白表达显著低于正常对照组,TDP-43-m MSCs+OA组显著高于正常对照组和OA模型组,TDP-43-m MSCs移植成功。与正常对照组相比,OA模型组大鼠软骨组织中胞质SGs的形成量显著降低,TDP-43-m MSCs+OA组显著高于模型组;与正常对照组相比,OA模型组大鼠软骨组织中RACK1、JNK和p38 MAPK的蛋白表达、MTK1、MAPKKK磷酸化的表达量,大鼠血清中TNF-α和IL-1β的分泌量均显著高于正常对照组,而TDP-43-m MSCs+OA组以上指标均显著低于模型组。结论 TDP-43基因的过表达,可以干预炎症因子的分泌,抑制缺血缺氧应激依赖的JNK和p38 MAPK信号通路的激活,从而逆转软骨细胞病变的分子机制。上述结论为OA的治疗提供新的理论依据。     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附☆

背景:促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。目的:观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。结果与结论:重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P<0.01),黏附细胞数亦明显增加(P<0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

热休克反应对内毒素所致小鼠巨噬细胞炎症因子表达的抑制作用与MAPK信号转导通路的关系研究

【目的】探讨热休克反应(HSR)对内毒素(LPS)所致MAPK信号通路的影响。【方法】采用400ng／ml LPS处理小鼠巨噬细胞(RAW264．7),通过免疫印迹,抗磷酸化抗体检测ERK、JNK、p38的磷酸化。热休克反应是将巨噬细胞在42℃的条件下培养1h,随后在37C,5％CO2条件下恢复12h。【结果】ERK、JNK、p38在LPS处理15min后即被活化,30min达高峰并持续至45min,90min后开始恢复。RT—PCR检测发现TNF—α、IL-15 mRNA水平增高。细胞经HSR(42℃ 1h,并恢复12h)后,再经LPS刺激则TNF—α、IL-15 mRNA转录受抑制,但HSR对JNK、p38、ERK等三种MAPK的活化(磷酸化)无影响。【结论】HSR抑制LPS所致的炎症因子表达不涉及MAPK信号通路。     

微波辐射致大鼠海马损伤中MAPK传导通路的差别激活

目的探讨微波辐射对海马神经神经细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导系统的影响,以及MAPK信号转导通路在微波辐射导致海马神经损伤中的作用.方法采用抗磷酸化形式的细胞外调节蛋白激酶(extracellular synal-regulated kinase,ERK1/2),C-Jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase,JNK),P38 MAPK抗体,进行Western blot,动态观察微波辐照后大鼠海马神经细胞ERK,JNK/SAPK,P38MAPK蛋白质磷酸化情况,以此反映MAPK信号通路的功能状态.结果微波辐照后12 h内ERK,JNK持续激活,ERK的激活高峰在辐照后即刻,JNK激活高峰出现于辐照后3,24 h后两者活化均受抑制;P38MAPK辐射后24 h内一直处于激活,并在3,24 h出现两次激活高峰.结论微波辐射可使海马神经细胞3条MAPK信号转导通路出现差别激活,并且微波辐射导致的海马神经损伤可能是通过MAPK信号转导通路的差别激活实现的.     

普伐他汀对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨普伐他汀干预对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)凋亡的影响及其相关细胞信号传导通路。方法:应用普伐他汀干预体外培养的第6代人MSCs,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测作用前后ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt通路蛋白的表达及磷酸化情况。将10μmol/L普伐他汀预处理人MSCs 1 h后,换用含1 mmol/L H2O2的完全培养基培养1 h,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;进一步在普伐他汀干预前用特异的细胞信号通路抑制剂或激动剂阻断或激活ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt途径,观察其对普伐他汀作用的影响。结果:普伐他汀可使人MSCs的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,使p38MAPK通路磷酸化水平降低,而其对人MSCs的ERK1/2通路和总Akt、总p38MAPK蛋白水平无显著影响。普伐他汀能抑制H2O2诱导的人MSCs的凋亡(P<0.05),PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002预处理后这种作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对这种作用影响不显著。结论:普伐他汀可激活人MSCs的PI3K/Akt通路,抑制p38MAPK通路,并可抑制H2O2诱导的人MSCs凋亡。PI3K/Akt通路的激活参与了其抗凋亡作用的调控。     

血管生成素-1,2经p38丝裂原活化蛋白激酶调节失血性休克血管低反应性

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用.方法 观察失血性休克后不同时间点肠系膜上动脉(SMA)中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化,p38MAPK抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,以及给予Ang-1、Ang-2和Tie-1抑制剂后缺氧血管内皮细胞(VEC)和血管平滑肌细胞(VSMC)混合细胞中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化.结果 失血性休克后p38MAPK磷酸化水平显著增高;p38MAPK抑制剂可显著改善缺氧4 h血管低反应性并拮抗Ang-2进一步降低缺氧4 h血管低反应性的作用;Ang-1和Tie-2抑制剂可显著抑制缺氧4 h的p38MAPK磷酸化增高(P<0.01).结论 p38MAPK参与了Ang-1和Ang-2对休克晚期血管低反应性的调节,但不是休克早期血管高反应性的主要调节分子.     

肺癌细胞促进单核吞噬细胞MAPK相关通路活化诱导炎性细胞因子表达上调的研究

目的：通过建立人单核吞噬细胞系（THP‐1）和人肺腺癌细胞系（SPC‐A1）共培养体系,检测共培养体系中THP‐1的炎性细胞因子mRNA表达水平和丝裂原活化蛋白激酶通路（MAPK）的表达情况,初步阐明肺癌微环境对THP‐1中炎性细胞因子表达的影响。方法体外培养SPC‐A1细胞系、THP‐1细胞系,并建立二者共培养体系,设置THP‐1单独培养组为对照组。24h后,收集各组THP‐1细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real‐TimePCR）检测白细胞介素（IL）‐1β、‐6、‐8及肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的mRNA表达水平;Westernblot检测MAPK通路蛋白c‐Jun氨基末端激酶及其磷酸化形式（JNK／p‐JNK）、丝裂原活化蛋白激酶p38亚单位及其磷酸化形式（p38MAPK／p‐p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化形式（ERK／p‐ERK）的表达。结果共培养24h后,共培养组THP‐1的IL‐1β、IL‐8mRNA表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）,分别为对照组的5．81、4．21倍;Westernblot结果显示共培养组p38MAPK、p‐p38MAPK的表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）。结论肺癌细胞可引起肺癌环境中单核吞噬细胞中p38MAPK通路的活化,进而诱导IL‐1β、IL‐8mRNA表达上调,有利于肿瘤炎症微环境的维持和促进肿瘤的进展。     

广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果研究及对p38MAPK/ERK通路蛋白的调控作用分析

目的对广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果及对p38MAPK通路蛋白的调控作用进行分析,为临床治疗提供参考。方法 48只清洁级SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD98059组和广藿香油低、中、高剂量治疗组,每组8只。对照组大鼠给予正常光照射,其余各组采用长波段紫外线+中波紫外线(UVA+VUB)光源照射制备大鼠皮肤光老化模型。PD98059组和广藿香油组大鼠分别给予对应药物治疗,对照组给予生理盐水灌胃。分析各组大鼠血清中氧化还原酶、细胞凋亡蛋白及p38MAPK/ERK通路蛋白的表达。结果对照组皮肤无明显异常。模型组大鼠皮毛光泽度下降,皮肤颜色变深,且表皮干燥、粗糙、增厚、纹理增宽加深,弹性丧失;模型组大鼠血清中MDA、p38MAPK、Ras、Raf、MEK、ERK1/2、Bax、Caspase9及C-Fos和C-Jun水平明显升高而Bcl2、SOD、GSHPX和CAT蛋白水平明显降低(P0.01),而广藿香油治疗后上述蛋白异常得到明显的恢复,且与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01);同时,广藿香油治疗具有剂量依从性,低剂量组、中剂量组和高剂量组之前差异有统计学意义(P0.01)。结论藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果与其调控p38MAPK/ERK通路相关蛋白及Bax、Bcl2、C-Fos和C-Jun表达有关。     

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P〈0.05）;K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P〈0.05）;CD11b表达升高（P〈0.01）;ERK1/2磷酸化水平升高（P〈0.05）,而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。     

MAPK通路参与小鼠骨实质来源间充质干细胞向成骨的分化

本研究探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase,MAPK）通路对间充质干细胞（mesen chymal stemcell,MSC）向成骨分化的影响。采用骨片法分离培养C57／BL小鼠骨实质来源的MSC;取第4代MSC进行成骨诱导,利用Western blot检测在MSC向成骨分化过程中MAPK所包含的细胞外信号调节激酶（ex—tracellular signal—regulated kinase,ERK）、c-JunN端激酶（c—Jun N—terminal kinase,JNK）和p38通路磷酸化水平的变化,以及分别加入3种相应通路抑制剂PD98059、JNK Ⅱ和SB203580后碱性磷酸酶（ALP）和钙沉积的相应变化。结果表明：MSC在向成骨分化过程中MAPK通路所包括的ERK、INK和p38通路均发生活化;加入PD98059后,ALP的表达在诱导早期显著提高,而后无显著改变;加入JNKII后不影响ALP和钙的沉积;而加入SB203580后,可显著抑制MSC中ALP的表达和钙的沉积。结论：p38通路在MSC向成骨分化中起正调控作用,ERK通路可能在早期起负调控作用,而JNK通路在其中未见显著作用。     

百里醌通过磷酸化p38MAPK途径介导NSCLC细胞毒性作用的机制研究

目的探讨百里醌(TQ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞毒性作用的分子机制。方法 NSCLC鳞癌细胞SK-MES-1接种于96孔板,予20、40、60、80、100μmol/L TQ培养24 h,观察浓度依赖性,计算TQ的IC50值;予接近IC50浓度TQ培养SK-MES-1,观察时间依赖性;予ERK抑制剂U0126和p38抑制剂SB203580分别作用于SK-MES-1、95-D,观察细胞存活率;Western blot检测U0126预处理1 h,加TQ孵育SK-MES-1 30 min后测p-p38、p38,p-ERK1/2、ERK1/2,p-JNK、JNK蛋白表达。结果 (1)TQ呈浓度和时间依赖性降低NSCLC细胞存活率;(2)30μmol/L TQ和10μmol/L U0126+30μmol/L TQ比较其细胞存活率有显著差异(P=0.000),但与10μmol/L SB203580+30μmol/L TQ比较无显著差异(P=1.00),10μmol/L SB203580+30μmol/L TQ与10μmol/L U0126+30μmol/L TQ组比较有显著差异(P=0.000);60μmol/L TQ、10μmol/L U0126+60μmol/L TQ、10μmol/L SB203580+60μmol/L TQ两两比较均无显著差异(P0.05);随TQ浓度增加,SB203580对95-D细胞的保护作用逐渐减弱,10μmol/L SB203580+40μmol/L TQ组与40μmol/L TQ组比较细胞存活率仍有显著差异(P=0.033);(3)Western blot结果表明U0126显著抑制ERK1/2磷酸化,p38随TQ浓度增加而磷酸化增加,但ERK1/2磷酸化减少,JNK磷酸化无明显改变。结论 TQ透过磷酸化p38途径介导NSCLC毒性作用,而不是ERK1/2途径。     

乌苯美司增强全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化的体外研究

目的探讨氨肽酶N抑制剂乌苯美司（ubenimex）对全反式维甲酸（ATRA）诱导人急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化的影响及可能机制。方法采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b，四氮唑蓝（NBT）还原实验检测细胞分化；Western blot法检测细胞c—Myc、ERK1／2及P—ERK1/2 、p38MAPK及p—p38MAPK蛋白表达。结果ubenimex单独应用对NB4细胞的NBT还原能力及CD11b表达无明显影响，但ubenimex能增强ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力及CD11b的表达。100μg／mlubenimex能增强10nmol／LATRA诱导原代APL细胞的NBT还原能力。100μg／mlubenimex增强10nmol／LATRA下调NB4细胞c—Myc蛋白的表达；抑制10nmol／LATRA引起的NB4细胞的p38MAPK磷酸化。结论ubenimex能够增强ATRA对APL细胞的诱导分化作用，可能与抑制p38MAPK的磷酸化及对原癌基因c—Myc表达的调控有关。     

过表达miR-338-3p对炎症信号通路的影响

目的研究过表达miR-338-3p在内皮细胞系EOMA中对炎症信号通路的影响。方法将EOMA细胞分为四组即对照组、miR-338-3p过表达组、TNF-α处理组、miR-338-3p与TNF-α共处理组。用Real time PCR检测miR-338-3p及黏附分子VCAM-1和ICAM-1mRNA表达水平,Western blot分析ERK/p38 MAPK信号通路活性。结果与对照组比较,miR-338-3p过表达组的黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显降低,而TNF-α处理组的黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显升高;miR-338-3p与TNF-α共处理组与TNF-α处理组比较,黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显降低;miR-338-3p与TNF-α共处理组与miR-338-3p过表达组比较,黏附分子表达水平及ERK/p38信号通路活性不再升高。结论过表达miR-338-3p抑制ERK/p38信号通路活性,降低黏附分子VCAM-1和ICAM-1mRNA表达水平;过表达miR-338-3p能够逆转TNF-α对ERK/p38通路的激活和TNF-α对黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达的促进作用。     

肠道病毒71型激活人横纹肌肉瘤细胞中JNK1/2信号转导通路

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)信号转导通路在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法台盼蓝染色法检测不同浓度抑制剂SP600125对人横纹肌肉瘤细胞(RD)活性的影响;实时荧光定量PCR及western blot检测EV71感染RD细胞后VP1 mRNA及蛋白质的表达水平;western blot检测JNK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白及其磷酸化水平,并分析JNK1/2抑制剂SP600125对EV71复制及JNK1/2信号通路的影响。结果台盼蓝染色结果表明,与空白对照组比较,5和10μmol/L实验组存活率差异无统计学意义(P均0.05),而20μmol/L抑制剂组细胞存活率明显降低(P0.05);实时荧光定量PCR及western blot结果表明,与对照组相比,实验组在EV71感染RD细胞8 h后,其VP1 mRNA及蛋白质的表达水平均明显下降(P均0.01)。此外,western blot检测结果证实EV71感染RD细胞后,其JNK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白质磷酸化水平均明显升高(P均0.05)。而经抑制剂SP600125处理可明显下调其JNK1/2、c-Fos、c-Jun磷酸化水平(P均0.05)。结论 JNK1/2信号通路可被EV71感染有效激活,并与EV71复制有关。