四川地区无关供血者Rh血型系统基因分型及结果分析

目的探讨人类红细胞Rh血型基因在四川地区汉族人群中的分布频率以及与Rh血清学表型之间的关系。方法采用PCR-SSP技术对随机选取的200名四川地区汉族无关供血者进行RHD基因和RHCE基因检测。同时,采用常规血清学技术检测RhD、C、c、E、e抗原表现型。结果共检出RhD阳性198例,RhD阴性2例。C基因频率为0.675,c基因频率为0.325,E基因频率为0.2475,e基因频率为0.7525。RHC/c、RHE定型结果与血清学一致;1例表现型为Ccee RhD阴性样本带有RHD基因外显子10和内含子10;7例RHe基因与血清学结果不相符,均出现基因检测阳性,而无相应的表现型。结论使用PCR-SSP技术能够准确对红细胞Rh血型系统基因分型。200份样本中,RHC/c、RHE基因定型可获得与血清学表现型完全一致结果;1例表型为dCcee个体,为RhD抗原阴性带有不完整的RHD基因外显子,揭示RHD基因多态性;3.5((7/200)样本RHe基因阳性而未见相应的抗原表达,提示可能遇到罕见的RHCE单体型或是新的RHe基因。     

番禺地区RhD阴性献血者部分D频率调查发简

目的 分析番禺地区RhD阴性献血者部分D（partial D）基因分型特征.方法 采用微量板法对献血者进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法对初筛RhD阴性的样本进行确认;采用PCR-SSP法（RH基因变异体分型检测试剂盒）对献血者基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断部分D基因分型.结果 初筛检出60例RhD阴性,经抗人球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率约为0.23％.59例RhD血清学筛选阴性的基因分型检测发现2例部分D,血清学筛选RhD阴性中出现部分D的频率约为3.4％.结论 本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD-CE （5）-D、RHD-CE（6-9）-D等位基因型,采用PCR-SSP法对RhD阴性表型献血者进行基因分型,可以准确鉴定RHD基因型.     

118例汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性分析

目的观察汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性。方法采用常规血清学技术检测RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法同时检测RHD基因和RHCE基因。结果抗球蛋白试验(IAT)证实的118例RhD阴性个体中,PCR-SSP方法检测RHD基因结果有28例Del表型个体(23.7%)。在余下的90份真正RhD阴性标本中,有69份标本(76.7%)RHD基因完全缺失;21份标本带有不表达RHD基因。Del表型个体均带有C抗原,带有不表达RHD基因的真正RhD阴性个体大多表现为RhC阳性。结论汉族人群IAT证实的RhD阴性个体呈现RHD基因结构多态性,不表达RHD基因主要以RHD-CE(2-9)-D2为主。     

1例含RHD基因的RhD阴性表现型分析

目的 分析1例RhD阴性表现型而RHD基因分型阳性的献血者样本,了解其发生的分子基础.方法 采用微量板法对献血者进行RhD阴性筛查,采用抗人球蛋白法对初筛RhD阴性样本进行确认,从静脉血中提取献血者基因组DNA,采用PCR-SSP法进行RHD基因分型,并对RHD基因进行直接测序.结果 经抗人球蛋白法确认33例RhD阴性献血者中,发现RHD阳性基因型1例.对该例样本测序分析,发现其RHD基因外显子5存在纯合的基因变异,即在744的位置插入了AG,同时删除了GTGGTGACAGCCATC15个碱基.结论 利用PCR-SSP法对血清学RhD阴性样本进行基因型检测,并结合RHD基因测序分析,更能准确鉴定RhD血型.     

1名RhD弱表现型个体携带D~(el)等位基因

目的　探讨 1名RhD弱表现型个体的RH基因型及RHD基因的分子机制。方法　采用常规血清学方法检测RhD、C、c、E和e抗原表型 ,间接抗球蛋白试验确认D抗原 ,用序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)测定RHD/RHCE基因 ,然后分析RHD编码区全长序列 ,并用PCR检测RhD杂合型。结果　血清学结果显示该个例为D抗原弱表现型 ,Rh因子为D +C +c +E e +,PCR SSP检测RHD/RHCE基因与之相符 ;RHD编码区序列析发现第 9外显子存在 1 2 2 7G→A碱基突变 ,其余外显子序列则与正常RHD基因一致 ,表明该个体携带RHD1 2 2 7A等位基因。RhD合子型鉴定结果为RHD +/RHD -杂合型 ,拟定RHCE和RHD为cis遗传 ,提示该个体基因型为CDe/cde。结论　该RhD弱表现型个体携带RHD 1 2 2 7A等位基因 ,而这一等位基因是Del表型的主要等位基因 ,提示该等位基因在不同个体RhD分子的表达效率不同     

两种技术分析Rh D-先证者形成机制的效果评价

目的 比较和评价血清学和序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型技术对RhD-先证者及家系成员Rh血型分型和遗传背景分析的效果.方法 对RhD-先证者及其家系成员,采用血清学分型技术检测其RhD、C、c、E、e抗原;采用PCR-SSP基因分型技术检测其RHD、RHCE基因.结果 先证者家系成员Rh表型正常,...     

番禺地区RHD变异体基因分型研究

目的研究分析番禺地区RHD变异体基因分型特征。方法采用微量板法对2010年11月～2011年8月到本站参加献血的26 172名次献血者进行RhD阴性筛查;采用抗球蛋白法对初筛RhD阴性的标本进行确认,采用吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性的标本进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断RHD基因分型。对血清学与基因分型结果不符的标本进行测序分析。结果初筛检出60名RhD阴性,经抗球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23%;吸收放散试验检出10例Del表型。60例初筛阴性的基因分型检测发现40例RHDEXON1～10全缺失基因型,发生频率约为67.8%;10例RHD 1227A DEL基因型,发生频率约为16.9%;7例部分D,发生频率约为11.9%;1例RHD弱D15基因型,发生频率约为1.2%;2例RHD基因分型阳性需作进一步碱基测序分析。结论本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD 1227A DEL、RHD-CE(2-9)-D,RHD-CE(5)-D、RHD-CE(6-9)-D和RHD弱D15等基因型,血清学结合基因分型能更准确鉴定RhD血型。     

D—变异体的分析——附1例报告

目的分析1例D—变异体的分子背景。方法分别采用血清学方法和序列特异性引物PCR(PCR-SSP)方法检测标本RhD、C、c、E、e抗原和RHCE基因,同时序列分析RHAG、RHCE基因全长编码区序列,最后进行RHD合子型分析和家系分析。结果先证者血清学测定Rh表型为D—,PCR-SSP结果为DC-;RHAG第1-10外显子测序显示,编码区与Gen Bank NC-000006标准序列一致,未观察到形成Oldeide和Duclos-Like抗原的碱基变异,亦未见形成高频抗原Duclos(RHAG1)的RHAG316CG突变,所有序列均未见杂合峰;RHCE基因第1-10外显子扩增显示,缺失第3-5外显子,其余外显子序列与标准序列一致,分析第1、2外显子序列为RHC,提示该等位基因为RHCE(e)-D(3-5)-CE(e);家系分析其父母、弟弟的RHAG序列与先证者完全一致,父母Rh血清学表型分别为DCCee和Dcc EE,其父亲的PCR-SSP和测序结果一致,其母亲PCR-SSP结果 DCc EE与测序结果一致,而与血清学结果不符(Dcc EE),其弟血清学表型、PCR-SSP和测序结果,均与先证者一致,结合RHD合子型分析结果,该家系父母分别为DCe/DC-和Dc E/DC-基因型,先证者和弟弟为DC-/DC-。结论 RHCE-D(3-5)-CE等位基因形成D—表型并稳定遗传。     

湖北汉族RhD阴性个体Rh表型及RHD基因多态性研究

目的研究湖北人群Rh阴性个体RHD基因多态性的分布及血清学表型与RH基因型之间的关系。方法应用PCR-SSP技术检测湖北地区172名Rh阴性献血者的RHD基因外显子和RHCE基因。结果172例Rh阴性个体中,ccee表型98例、Ccee 53例、CCee 13例、CcEe 6例、ccEe 2例;172例Rh阴性个体中103例RHD基因外显子完全缺失、42例完整、27例为部分缺失者。吸收放散试验检测出39例RhD放散型。结论湖北汉族Rh阴性人群的RHD基因结构呈现多态性,携带D基因的吸收放散试验阴性个体中具有C抗原者比例较高,但亦有cc表型存在。     

江西地区RhD阴性个体的RHD基因与RhCcEe抗原的表达分析

目的调查江西地区RhD表型确认为阴性者的RhCcEe表型与RHD基因型间的关系,确认RHD基因的外显子模式对RhCcEe抗原表达的影响。方法血清学直接凝集法检测D、C、c、E、e抗原,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认RhD阴性血型,对IAT确认为RhD抗原阴性的样本,随机抽取111例,使用PCR-SSP法行RHD基因分型。结果 464例标本中,确认为RhD阴性者451例(97.1983%),RhD变异性13例(2.8017%),111例确认RhD阴性的标本中,共检出六种RHD基因型,包括RHD(-)5例,RHD-CE(2-9)-D 71例,DVI III 1例,DEL RHD1227A 12例,弱D152例,RHD(+)20例,血清学上,111例标本中共检出ccee61例(54.96%),Ccee36例(32.43%),CCee8例(7.21%),CcEe和ccEe各3例(2.70%)。结论 RhD阴性人群中RHD基因序列的不同影响RHCcEe各表型的表达。     

RhCE抗原基因分型和表型不一致与等位基因变异的相关性研究

目的 探讨变异RhCE抗原的分子背景及RHCE基因的遗传学特征与基因多态性.方法 采用单克隆抗-C、-c、-E和-e试剂检测10373例RhD阳性和635例RhD阴性献血者的RhCE表型;选择942例标本PCR-SSP技术做RHCE基因分型,对基因分型与血清学分型不一致标本采用PCR-SSP检测22个主要RHCE变异等位基因,部分RHCE等位基因采用测序技术鉴定.结果 共有54例标本(占94.27％)基因分型结果与血清学表型结果不一致,经PCR-SSP检测出22种与弱表达抗原相关的RHCE等位基因变异体,经血清学复检有36例标本RhCE抗原存在弱反应或极弱反应.结论 在血清学检测时表达弱反应的RhCcEe抗原标本中检出多种RHCE等位基因类型,变异的等位基因可以影响基因分型预测血型抗原的准确性:RhCE表型和基因型不一致的原因可能由变异的等位基因或未发现的等位基因引起.     

RHCE alleles detected after weak and/or discrepant results in automated Rh blood grouping of blood donors in Northern Germany

BACKGROUND: More than 170 weak or partial RHD alleles are currently known. A similar heterogeneity of RHCE alleles may be anticipated, but a large-scale systematic analysis of the molecular bases of altered C, c, E, and e antigenicity in European blood donors was lacking.
STUDY DESIGN AND METHODS: Between November 2004 and October 2006, samples collected from 567,105 blood donors in the northwest of Germany were surveyed for weakened and/or discrepant serologic reaction patterns of the C, c, E, or e antigens in automated testing. Samples from 187 donors with systematic typing problems were further investigated by manual typing and in 122 donors by DNA typing. The polymorphisms determining C, c, E, and e, as well as three repeatedly found substitutions, M167K, G96S, and L115R, were tested by PCR-SSP. Further analysis consisted of sequencing of the exons of RHCE . In addition, 13 referred samples were analyzed.
RESULTS: RHcE (M167K) known as E variant I was the most frequent allele, found in 70 of 122 analyzed donors. Among 13 referred samples, C typing problems predominated. Overall, 34 different underlying alleles were detected, 23 of which were new. Molecular causes included single-amino-acid substitutions, gene conversions, multiple dispersed amino acid substitutions, protein extensions, and in-frame amino acid deletions.
CONCLUSION: In addition to RHcE (M167K), a large number of different alleles are underlying CcEe typing problems. Molecular mechanisms parallel those found in RHD . Elucidation of the molecular bases of variant antigens is important to improve serologic and molecular typing methods.     

中国汉族人群RHCE和RHD基因结构研究

目的 研究中国汉族RhD(-)个体Rh血型系统RHCE基因4种外显子和RHD基因8种外显子的构成情况。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对80名汉族RhD(-)个体的RHD基因及RHCE基因进行研究。扩增RHD基因的第2、3、4、5、6、7、9、10外显子和内含子4以及RHCE基因的第1、2、4、5外显子和内含子4。结果 80名RhD(-)供者的Rh表型为ccdee38人,ccdee34人,ccdEe4人,ccdEe4人。在表型为ccdee和ccdEe的42人中,D基因8种外显子全部缺失。在表型为ccdee和ccdEe的38人中,RHD基因则表现出多态性,16人存在全部D基因8种外显子,11人缺失全部D基因8种外显子,8人存在D基因第2外显子,3人存在D基因第2、10外显子。结论 中国汉族RhD(-)个体D基因外显子具有多态性。Rh表型为cc的个体D基因8种外显子全部缺失,在表型为cc的个体中观察到4种D基因多态性。中国汉族人群D基因结构不同于高加索人种,故应用RHD基因定型时,临床医生应慎重对待。     

RHCE基因结构研究

目的研究中国人RHCE基因结构特征。方法根据文献设计RHCE基因检测的引物,采用PCR-SSP法检测RhD阳性100例,RhD阴性300例的RHCE基因结构。结果RHE/e和RHC/c等位基因定型结果表明,RHE/e和RHc的定型结果与血清学的一致,没有发现假阳性和假阴性。利用RHCE基因外显子1的nt48的C→G多态性检测RHC等位基因将产生6.06%的假阳性,未发现假阴性。利用109bp插入序列这一多态性来检测RHC等位基因,总的假阴性率为4.00%,没有发现假阳性。结论RHE/e和Rhc基因定型可获得准确结果,对RHC等位基因的定型必须使用2种方法或利用至少2个以上的多态性位点。     

汉族、藏族和维吾尔族人群RHD基因启动子区检测

目的探讨汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性与RhD阴性机制相关性。方法对476例汉族(200例RhD阳性、228例RhD阴性、6例弱D和42例Del型)、57例藏族(50例RhD阳性和7例RhD阴性)和120例维吾尔族(50例RhD阳性和70例RhD阴性)标本,使用PCR-SSP方法检测RHD基因的Upstream盒、Down-stream盒和hybrid盒,使用PCR-SSP法和多重PCR法检测RHD基因启动子区-1~-1 246 bp内的4个RHD基因多态性位点。结果 348例RhD阳性标本(含6例弱D和42例Del型)、76例表型为RhD阴性但RHD基因型为RHD+/RHD-杂合子和RHD+/RHD+纯合子标本中均检测到4个RHD基因特异性多态性位点;而所有229例表型为RhD阴性基因型为RHD-/RHD-纯合子标本均未检测到RHD基因启动子区多态性位点。结论汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性可能与RhD阴性机制无关;本研究所建立的RHD基因启动区4个多态性位点PCR-SSP检测方法可用于RHD基因启动区多态性位点研究。     

RhCE抗原弱表达的分子基础与RHCE变异等位基因相关性研究

目的探讨血清学检测中弱反应的C,C,E或e抗原的分子生物学基础以及RHCE基因多态性,为Rh抗原在临床输血医学、遗传学和免疫学等方面的应用提供理论依据。方法随机选择2010年1月至2011年12月于本中心行全血捐献的RhD阳性献血者10373例为研究对象。采用U型微板法,单克隆抗-C,-c,-E,和-e试剂检测其RhCE血清学表型,通过血清学试管法复检,并鉴定携带弱C,c,E或e抗原的样本。采用多重PCR-序列特异性引物（SSP）技术检测基因银行公布的22个RHCE等位基因,DNA序列分析技术鉴定特异的RHCE等位基因（本研究遵循的程序符合本中心人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该伦理会批准,并与之签订临床研究知情同意书）。结果10373例全血捐献者中,检测到229例样本携带弱C,c,E或e抗原,其中共检测出22种具有明确单核苷酸突变的等位基因,多态性基因RHces（R114W）,RHcE（E1,Ew;M167K）,RHCE（M267K）,RHCe（L297P）,RHce（VS;L245V）,RHces（G331C）和RHcE（L303Q）检出频率最高,最可能的变异单倍型为Dce,dce,DCe,DcE。这些RHCE等位基因变异体与C,c,E和e抗原的血清学免疫原性减弱相关,且大多数变异的RHCE等位基因和正常的RHCE等位基因以杂合体形式存在。结论RHCE基因的分子机制与RHD基因具有相似性,在弱表达CcEe抗原的样本中多种RHCE等位基因类型被检出,变异的等位基因可以影响Rh抗原的免疫反应性。阐明RhCE抗原表达异常的分子基础有助于优化血清学检测准确率。     

海南汉族RhD阴性个体RHD基因研究

目的探讨海南汉族Rh阴性献血者的RHD基因结构,为建立适合本群体的正确的RHD基因定型方法提供依据。方法采用常规盐水法和抗球蛋白法筛选RhD阴性献血者,通过吸收放散试验确定其中RhDel,并采用PCR SSP技术分析其RHD基因存在情况,对存在全部外显子的个体进一步检测RHD内含子2、10和RHDψ假基因。结果筛选获得的106名RhD阴性个体中,31例(29.25%)为RhDel,存在完整RHD基因;剩下75例中,67例(63.21%)完全缺失RHD基因,8例缺失部分RHD基因;存在全部外显子的31例RhDel个体均存在RHD内含子2、10而无RHDψ基因。另外,在1例ccdEe样本中检测到外显子1、3、4、6、7、9及10,仅缺少外显子5。结论海南汉族RhD阴性群体中存在高比率的RhDel,且所有RhDel样本均可检测到全部的RHD基因外显子;海南汉族真实RhD阴性个体的RHD基因呈多态性,缺失部分RHD基因的个体均未检测到RHD外显子5,提示对本群体而言,特异性扩增外显子5在RHD基因定型中具有重要意义。     

四川部分地区汉族献血者RhD阴性个体RHD基因多态性研究

目的了解四川部分地区汉族献血者中RhD阴性个体的基因多态性。方法用PCR-SSP及基因序列测定技术对经间接抗球蛋白试验(IAT)、吸收放散试验检测RhD均为阴性的标本分型。结果 69例RhD真正阴性的标本中,包括RHD基因完全缺失个体54例、13例携带RHD-CE(2-9)-D等位基因、1例携带RHD-CE(8-9)-D等位基因、1例携带RHD(711delC)等位基因。结论四川部分地区汉族献血者RhD阴性个体分子机制具有丰富的多态性和不同的遗传背景,主要为RHD全缺失为主,其次为RHD-CE(2-9)-D型,并存在其他稀有的基因型。     

中国汉族Rh(-)个体D基因完整者与C基因的关联调查

目的观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系的Rh阴性D基因完整者与C基因间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)扩增技术,扩增Rh血型C/E基因,D基因的外显子,检测192例RhD阳性个体,166例RhD阴性个体的血样品。结果192例RhD阳性个体,均有D基因8个外显子。在166例RhD阴性个体中,100例有ce/ce或ce/cE基因型的个体RHD外显子阴性;66例有Ce/Ce或Ce/ce基因型的个体中,34例RHD外显子完整,19例RHD外显子部分完整,13例RHD外显子阴性。结论中国人RhD阴性个体D基因完整者与C基因间可能存在联系,其在中国各民族、各地区Rh阴性个体中的发生频率和机制有待于进一步调查。