氦氖激光对退变颞下颌关节BMP-2表达的影响

目的:探讨氦氖激光对退变颞下颌关节细胞外基质调节因子BMP-2表达的影响,明确氦氖激光干预颞下颌关节退变的作用机制,为临床运用氦氖激光治疗颞下颌关节骨关节病提供依据。方法:将骨骼发育成熟的健康成年雄性新西兰大白兔40只随机分为正常组、假模型组、模型组和治疗组,每组10只,组内又分为造模后第1d、11d两个取材时间点。建立颞下颌关节骨关节病动物模型并行CT检查证实造模成功后纳入。治疗组采用氦氖激光照射患侧颊车、上关、下关、听宫、翳风穴,5min/穴/d,共10d;假模型组仅作关节囊切开后即缝合组织。各组于不同时间点取出颞下颌关节组织,采用Western Blot方法检测BMP-2的表达水平。结果:Western Blot检测发现正常组及假模型组不同时间点之间BMP-2蛋白表达差异无统计学意义;模型组第11dBMP-2表达明显降低;氦氖激光干预10d后BMP-2表达较第1d及模型组明显增加(P0.05)。结论:氦氖激光治疗可上调退变颞下颌关节细胞外基质调节因子BMP-2蛋白表达,促进细胞外基质合成,从而防治颞下颌关节骨关节病。     

氦氖激光对兔退变颞下颌关节髁突软骨基质表达的影响

目的:通过研究氦氖激光对退变颞下颌关节髁突软骨细胞外基质基质胶原2(Col-2)、蛋白多糖4(PRG-4)表达的影响,明确氦氖激光对颞下颌关节退变的保护作用与机制,为临床运用氦氖激光治疗颞下颌关节骨关节病提供依据。方法:将骨骼发育成熟的健康成年雄性新西兰大白兔随机分为正常组、假模型组、模型组和干预组,每组10只,组内又分为造模后第1天、第11天两个取材时间点。参照常嘉等的造模方法,建立颞下颌关节骨关节病动物模型并行CT检查证实造模成功后纳入。干预组采用氦氖激光照射患侧颊车、上关、下关、听宫、翳风穴,5min/穴/d,共10d;假模型组仅作关节囊切开后即缝合组织。各组于不同时间点取出颞下颌关节组织,采用HE染色观察干预前后形态学改变;Western Blot方法检测Col-2、PRG-4的表达水平。结果:退变髁突软骨HE染色可见纤维降解,增殖层及过度层细胞排列紊乱,细胞核出现皱缩,核浓染,经过氦氖激光治疗后的髁突软骨纤维层轻度松解,部分纤维合成,红染增强。Western Blot检测发现正常组及假模型组不同时间点之间Col-2、PRG-4蛋白表达差异无显著性意义;模型组第11天各细胞外基质蛋白表达明显降低;氦氖激光干预10天后各细胞外基质蛋白的表达明显增加。结论:氦氖激光干预可上调退变颞下颌关节软骨细胞外基质Col-2、PRG-4蛋白表达,纠正细胞外基质降解,从而防治颞下颌关节骨关节病。     

氦氖激光重复照射对培养瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法 :以波长 6 32 .8nm、功率密度10 0mW /cm2 的氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞 ,每日 1次 ,每次 30min ,连续照射 3天 ,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定Bcl- 2、Bax、Fas、ICE、p5 3、c -myc蛋白的细胞分布与表达。 结果 :在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布 ,氦氖激光照射后 ,Fas、ICE表达增加 ,Bcl- 2表达降低 ,Bax、p5 3、c -myc的表达无变化。结论 :氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas、Bcl- 2、ICE表达蛋白有关     

舒郁宁心汤对抑郁大鼠海马Bcl-2和Bax表达的影响

目的了解舒郁宁心中药对慢性应激抑郁模型大鼠海马区凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 60只SD大鼠随机分为对照组,模型组,高、中、低剂量组和盐酸氟西汀组。复制孤养加慢性轻度不可预见性应激抑郁模型,造模成功后进行药物干预21 d。采用免疫组化方法观察大鼠海马区Bcl-2和Bax表达。结果与对照组比较,模型组大鼠Bax表达升高、Bcl-2表达降低(P<0.05);与模型组相比,中剂量组、高剂量组、盐酸氟西汀组大鼠海马区Bax表达降低、Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论舒郁宁心汤可能通过调控海马组织Bcl-2和Bax的表达,对抗海马神经元凋亡,发挥抗抑郁作用。     

电针对实验性膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡及软骨基质的影响

目的:观察电针对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡及软骨基质的影响,探讨电针治疗膝骨关节炎的作用机制。方法:将2月龄清洁级雄性SD大鼠40只,适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组10只和造模组30只。造模组在第1、4、7天双膝关节腔注射0.2 m L 4%木瓜蛋白酶。造模成功后,采用随机数字表法分为模型组、电针15 min组(EA15组)和电针30 min组(EA30组)3组,每组10只。EA 15组给予电针治疗15 min/(次·d),5次/周;EA 30组给予电针治疗30 min/(次·d),5次/周;空白组和模型组不给予任何治疗。8周后,处死动物,腹主动脉采血,ELISA法测定Ⅱ型胶原(collagenⅡ)C端肽(CTXⅡ)和Ⅱ型胶原C前肽(CPⅡ);取大鼠右侧胫骨平台内侧软骨组织于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋,TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况;甲苯胺蓝染色观察软骨基质糖胺聚糖的变化;免疫组化染色观察collagenⅡ变化;左侧胫骨平台软骨组织迅速置入液氮中保存,分别用RT-PCR和Western blot检测Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组软骨细胞凋亡率明显升高(P0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P0.05),Bax mRNA和蛋白表达升高(P0.05);糖胺聚糖含量减少,collagenⅡ蛋白表达降低(P0.05),血清CTXⅡ显著升高(P0.05),CPⅡ显著降低(P0.05)。与模型组比较,电针组均能显著降低软骨细胞凋亡率(P0.05),增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达(P0.05),降低Bax mRNA和蛋白表达(P0.05);增加糖胺聚糖含量和collagenⅡ蛋白表达(P0.05),下调CTXⅡ(P0.05),上调CPⅡ水平(P0.05)。结论:电针治疗膝骨关节炎的作用机制是通过降低软骨细胞凋亡和减轻关节软骨基质破坏,进而减缓关节软骨退变。     

灯盏花素减轻顺铂对大鼠肾损害及肾细胞凋亡机制的研究

目的探讨应用灯盏花素减轻顺铂对大鼠肾损害及肾细胞凋亡的作用机制。方法48只SD大鼠分为对照组、模型组、25mg／kg灯盏花素组（灯盏花素1组）和50mg／kg灯盏花素组（灯盏花素2组）各12只。对照组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃,模型组、灯盏花素1组和2组均腹腔注射顺铂8mg／kg造模。灯盏花素1组和2组分别以25mg／kg和50mg／kg灯盏花素灌胃,给药7d后计算4组肾脏指数,采用原位缺15末端标记法检测肾细胞凋亡情况,左肾采用蛋白质印迹法检测肾皮质Bax、Bcl-2表达水平,右肾采用免疫组织化学法检测肾组织凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达水平。结果模型组、灯盏花素1组和2组肾脏指数、凋亡指数及Bax、Bcl-2表达水平高于对照组（P〈0．05）;灯盏花素2组肾脏指数、凋亡指数、Bax表达水平及Bax／Bcl-2比值低于模型组、Bcl-2表达水平高于模型组（P〈0．05）;灯盏花素1组肾脏指数和凋亡指数高于2组（P〈0．05）。结论灯盏花素可增强凋亡蛋白Bcl-2表达、降低Bax表达,影响线粒体凋亡通路,从而减轻顺铂对肾损害大鼠肾细胞的凋亡。     

奥扎格雷钠对心肌缺血心肌细胞的抗凋亡作用

目的探讨奥扎格雷钠通过抑制缺血大鼠心肌细胞Bax蛋白的表达,调节Bcl-2／Bax水平,从而抑制大鼠缺血心肌细胞的凋亡。方法将健康的Wistar大鼠40只随机均分为5组,空白组,模型组,预防组,治疗组和联合硝酸甘油治疗组．2周后除空白组外其余各组制作心肌缺血模型,检测心肌细胞Bcl-2及Bax蛋白表达。结果心电图：各组造模成功后5分钟时心电图ST段及造模成功时心电图ST段比较,各组均有显著性差异（P〈0．05）。免疫组化结果：预防组中的Bcl-2和Bax与模型组、治疗组、联合治疗组中的比较有显著性差异（P〈0．05）。结论奥扎格雷钠可以减少心肌缺血大鼠中心肌细胞Bax蛋白的表达,调节Bcl-2／Bax水平。     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的研究人脑挫裂伤后神经细胞的凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax在蛋白水平的表达。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL),免疫组织化学方法检测人脑挫裂伤后急诊行开颅脑挫裂失活组织清除术和/或额极、颞极切除内减压术所得脑组织神经细胞的凋亡和Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果15例研究病人中所有病人标本都表达Bax蛋白,8例表达Bcl-2蛋白,10例表达TUNEL阳性染色细胞。表达Bcl-2蛋白患者比不表达Bcl-2蛋白患者生存率明显升高(P=0.01)。结论虽然人脑挫裂伤的主要病理改变是坏死,但实验表明人脑挫裂伤后存在神经细胞的凋亡现象,Bcl-2基因家族参与了人脑挫裂伤后神经细胞凋亡。脑挫裂伤患者表达Bcl-2蛋白与预后有一定关系。     

揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Fas表达的影响

背景：现代研究证实细胞的过度凋亡加速软骨组织的退变,而手法的力学刺激对关节软骨影响的分子层面研究至今少有报道。目的：观察揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas表达的作用。方法：50只新西兰兔随机等分为正常组、假手术组、模型组、手法组和针剂组,后3组建立右下肢骨内高压型膝关节骨性关节炎模型。造模1周后,手法组使用揉髌手法隔天治疗1次,每次10min,共治疗5周共17次;针剂组关节内注射玻璃酸钠液0.6mL,每周1次,共5次。结果与结论：造模后8周末取兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,苏木精-伊红染色提示模型组软骨组织退变明显,软骨细胞凋亡率明显增加（P〈0.01）,胫骨平台软骨组织中Bcl-2、Bax、Fas表达率明显升高（P〈0.01）,而手法组和针剂组软骨组织退变轻微,软骨细胞凋亡率及Bax、Fas表达率较模型组降低（P〈0.01）,但胫骨平台软骨组织中Bcl-2表达升高（P〈0.01）。说明揉髌手法与关节内注射玻璃酸钠一样可以明显降低兔膝关节软骨细胞的凋亡率,其作用机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Fas表达有关。     

揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Fas表达的影响

背景:现代研究证实细胞的过度凋亡加速软骨组织的退变,而手法的力学刺激对关节软骨影响的分子层面研究至今少有报道.目的:观察揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas 表达的作用.方法:50 只新西兰兔随机等分为正常组、假手术组、模型组、手法组和针剂组,后3 组建立右下肢骨内高压型膝关节骨性关节炎模型.造模1 周后,手法组使用揉髌手法隔天治疗1 次,每次10 min,共治疗5 周共17 次;针剂组关节内注射玻璃酸钠液0.6 mL,每周1 次,共5 次.结果与结论:造模后8 周末取兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,苏木精-伊红染色提示模型组软骨组织退变明显,软骨细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),胫骨平台软骨组织中Bcl-2、Bax、Fas 表达率明显升高(P < 0.01),而手法组和针剂组软骨组织退变轻微,软骨细胞凋亡率及Bax、Fas 表达率较模型组降低(P < 0.01),但胫骨平台软骨组织中Bcl-2 表达升高(P < 0.01).说明揉髌手法与关节内注射玻璃酸钠一样可以明显降低兔膝关节软骨细胞的凋亡率,其作用机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Fas 表达有关.     

沉默信息调节因子2相关酶1通过PINK1-Parkin线粒体自噬减轻创伤性脑损伤研究

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)通过PINK1-Parkin线粒体自噬发挥在创伤性脑损伤(TBI)中的神经保护作用及机制.方法 第一阶段实验,小鼠随机分为4组:空白组(野生型小鼠建立假模型后接受溶剂处理)、对照组(野生型小鼠建立假模型后接受20 mg/kg SRT1720处理)、模型组(野生型小鼠建立TBI模型后接受溶剂处理)、治疗组(野生型小鼠建立TBI模型后接受SRT1720处理).第二阶段实验小鼠随机分为5组:空白组(野生型小鼠建立假模型后接受溶剂处理)、对照组(Parkin-/-小鼠建立假模型后接受溶剂处理)、模型组(野生型小鼠建立TBI模型后接受溶剂处理)、治疗组(野生型小鼠建立TBI模型后接受SRT1720处理)、敲除组(Parkin-/-小鼠建立TBI模型后接受SRT1720处理).采用控制性皮层损伤法建立小鼠TBI模型.比较PINK1、Parkin、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达、脑水肿、神经功能及神经细胞凋亡情况.结果 第一阶段,与空白组比较,模型组小鼠皮质组织中PINK1及线粒体Parkin表达显著增加,细胞质Parkin表达显著下降;与模型组比较,治疗组小鼠皮质组织中PINK1及线粒体Parkin表达显著增加,细胞质Parkin表达显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).第二阶段实验,与空白组比较,模型组小鼠神经细胞凋亡率及Bax表达显著增加,Bcl-2表达显著下降;与模型组比较,治疗组小鼠神经细胞凋亡率及Bax表达显著下降,Bcl-2表达显著增加;与治疗组比较,敲除组小鼠神经细胞凋亡率及Bax表达显著增加,Bcl-2表达显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).与空白组比较,模型组小鼠脑水肿及神经功能缺损评分(mNSS)显著增加;与模型组比较,治疗组小鼠脑水肿及mNSS评分显著下降;与治疗组比较,敲除组鼠脑水肿及mNSS评分显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SIRT1通过上调PINK1-Parkin线粒体自噬减轻TBI小鼠神经细胞凋亡,并改善神经功能障碍.     

塞来昔布对戊四氮点燃小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察塞来昔布对戊四氮点燃小鼠癫癎发作及脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和给药组各10只,给药组予塞来昔布灌胃,对照组和模型组予生理盐水灌胃,模型组和给药组以戊四氮点燃法制备小鼠癫癎模型,通过行为学检测观察塞来昔布对小鼠癫癎发作的影响,免疫组织化学法测定塞来昔布对小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:模型组小鼠脑组织Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞数显著高于对照组(P0.01),Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P0.01);给药组Bax蛋白阳性细胞数显著低于模型组(P0.01),Bcl-2蛋白阳性细胞数及Bcl-2/Bax比值显著高于模型组(P0.01)。结论:塞来昔布能下调戊四氮点燃小鼠脑组织Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平,提高Bcl-2/Bax比值。     

阿魏酸对阻断兔主动脉血流所致脊髓神经元凋亡的影响

目的探讨阿魏酸对阻断家兔主动脉血流所致脊髓神经元凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将24只家兔按随机数字表法分为假手术组、缺血／再灌注（I／R）损伤组和阿魏酸组。采用阻断腹主动脉血流40min、再灌注7d制备脊髓I／R损伤模型；阿魏酸组于阻断腹主动脉前15min一次性静脉注射阿魏酸50mg／kg；假手术组仅松套腹主动脉，不阻断血流。分别测定腹主动脉阻断前10min（C-10）、开放前即刻（C40）及开放后60min（R60）和处死前即刻（R7d）血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；检测脊髓凋亡神经元以及Bax和Bcl-2蛋白的表达；观察术后动物后肢神经功能评分。结果①I／R损伤组MDA含量明显高于C-10值及假手术组相应时间点值（P〈0．05或P〈0．01），SOD活性变化与MDA变化相反；阿魏酸组MDA含量明显高于C-10值（P〈0．05），但显著低于I／R损伤组相应时间点值（P〈0．05或P〈0．01），较假手术组比较差异无显著性，SOD活性变化与MDA变化亦相反。②I／R损伤组Bax蛋白表达明显高于假手术组（P〈0．05），Bcl-2蛋白表达则明显低于假手术组（P〈0．01）；阿魏酸组Bax蛋白表达明显低于I／R损伤组，但显著高于假手术组（P〈0．01和P〈0.05），Bcl一2蛋白表达明显高于I／R损伤组及假手术组（P均〈0.01）。③I／R损伤组脊髓神经元凋亡指数明显高于假手术组（P〈0．01）；阿魏酸组明显低于I／R损伤组，但高于假手术组（P〈0．01和P〈0．05）。④阿魏酸组瘫痪发生率明显低于I／R损伤组，其后肢神经功能评分明显高于I／R损伤组（P均〈0．01）。结论阿魏酸能显著抑制阻断家兔主动脉所致脊髓神经元凋亡的发生，其机制可能与其通过抗氧化反应进而抑制Bax蛋白、增强Bcl-2蛋白的表汰有关．     

EPO对心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)在心肺复苏后对大鼠脑海马神经元细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响。方法雄性Wistar大鼠32只,随机分4组:正常对照组(A组)、假手术组(B组)、心肺复苏模型组(C组)、EPO干预组(D组)。C组、D组采用窒息的方法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,后行心肺复苏治疗(CPR),D组CRP同时静脉给予EPO 3000U/kg;B组仅静脉给予等剂量生理盐水,4小时的脑海马组织,采用免疫组化法观察各组神经元细胞凋亡、Bcl-2及Bax的表达情况。结果光镜下A、B组未见凋亡细胞,C组可见较多凋亡细胞,D组凋亡细胞数少于C组(P0.01)。A、B组少量Bcl-2、Bax阳性细胞,C、D组Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于A、B组(P0.01),D组Bcl-2阳性细胞数高于C组(P0.01),D组Bax阳性细胞数低于C组。结论心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡明显增加,Bcl-2、Bax表达上调。EPO可抑制心肺复苏后海马神经元的细胞凋亡、上调Bcl-2表达同时下调Bax表达。     

p38 MAPK在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨p38 MAPK在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为5组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、给药组及溶媒组。除对照组及假手术组外各组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。给药组和溶媒组分别侧脑室注射p38 MAPK特异性抑制剂SB202190及1%DMSO。每组分别进行行为学评分和检测Bcl-2、Bax表达的变化。结果①行为学结果:空白对照组及假手术组,缺血再灌注后24 h大鼠神经功能评分降低,给药组大鼠神经功能评分高于缺血再灌注组,有统计学差异(P<0.01)。②免疫印迹检测结果:空白对照组及假手术组可见少量Bcl-2、Bax蛋白表达,两组间无统计学差异(P>0.05);缺血再灌注组再灌注后24 h可见Bcl-2表达减少,但与空白对照组及假手术组相比无统计学差异(P>0.05),而再灌注后24 h可见Bax蛋白表达明显增加,与空白对照组及假手术组相比有统计学差异(P<0.05);给药组与缺血再灌注组相比再灌注后24 h可见Bax蛋白表达明显减少(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论抑制p38 MAPK激活可以减轻大鼠脑缺血再灌注时的脑神经元的凋亡。     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。