Ad-apoptin通过AMPK/ACC信号通路抑制肺癌细胞脂代谢

目的:探讨溶瘤腺病毒Ad-apoptin对非小细胞肺癌细胞脂代谢的影响及分子机制.方法:CCK-8法检测细胞活性;JC-1染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测脂代谢和凋亡相关蛋白;siRNA干扰肺癌细胞AMPK的表达;Co-IP检测Ad-apoptin与AMPK蛋白相互间作...     

shRNA 干扰长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头癌IHH-4 细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:慢病毒 转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT鄄PCR 检测PVT1 的表达,CCK8 检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot 检测细胞Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot 检 测肿瘤组织Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达。结果:sh-PVT1 转染细胞24 h 后,IHH-4 细胞PVT1 的表达水平明显降低(P< 0.01);转染细胞4 d 后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67 表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1 能显 著升高IHH-4 细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3 表达(P<0.01);此外,sh-PVT1 还可诱导细胞G2/ M 期阻滞,抑制周期 蛋白Cyclin A 的表达(P<0.05,P<0.01)。干扰PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67 和 Cyclin A 的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3 表达(P<0.01)。结论:沉默PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4 细胞 增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞。     

罗哌卡因对结肠癌细胞增殖和裸鼠人结肠癌皮下瘤生长的影响

目的:探究罗哌卡因对结肠癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法:罗哌卡因处理细胞,CCK8 检测细胞活性,确定用药浓度;肿瘤成球实验检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot 检测细胞增殖、凋亡标记蛋白及细胞周期标记蛋白的表达。复制结肠癌Xenograft 模型,统计肿瘤生长情况及裸鼠存活率,Tunel 法检测细胞凋亡情况。结果:根据CCK8 实验结果确定罗哌卡因给药浓度分别为20、50、100 μg/ ml。罗哌卡因能显著抑制癌细胞集落形成(17.80±0.51,P<0.001) 和增殖标记蛋白Ki67 (0.32±0.68,P<0.01) 、PCNA(0.14±0.24,P<0.01) 的表达,并体现量效关系。罗哌卡因还可明显促进癌细胞凋亡(12.80±1.24,P<0.01) 和凋亡标记蛋白caspase-3(1.76±1.43,P<0.001)、caspase-9 (1.61±1.26,P<0.001) 的表达。同时,罗哌卡因能诱导细胞发生G2 期阻(40.5%,P<0.01) ,促进周期标记蛋白p53 的表达(1.16±0.65,P<0.01) ,抑制Cyclin A 的表达(0.12±0.12,P<0.05) 。此外,罗哌卡因可显著抑制肿瘤生长(1 247.60±1.37,P<0.01) ,提高结肠癌裸鼠的生存率及诱导肿瘤组织细胞凋亡(78.00±1.45,P<0.001) ,且具有量效关系。结论:罗哌卡因能抑制结肠癌细胞增殖和结肠癌皮下瘤的生长。     

羧胺三唑乳清酸盐对人胰腺癌细胞系增殖及脂肪酸合成代谢的影响

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌细胞增殖影响及对其脂肪酸合成代谢的调控作用。方法 以人胰腺癌细胞系AsPC-1、AsPC-1/GEM(简称AR)、PANC-1、MiaPaCa-2为研究对象,用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞存活率,采用qPCR检测胰腺癌细胞系中脂肪酸合成关键基因mRNA水平,用Western blot检测细胞内腺苷单磷酸依赖蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)通路蛋白表达;利用液相色谱-质谱联用代谢组学技术检测细胞内脂质代谢物质差异。结果 与对照组相比,CTO显著降低AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2 4株人胰腺癌细胞活率(P<0.05); CTO下调细胞内脂肪酸合成关键基因的mRNA水平(P<0.05);CTO下调细胞中AMPK、ACC及c-Myc蛋白表达(P<0.05),而增加p-AMPK、p-ACC蛋白表达(P<0.05);CTO减少AR细胞中脂质代谢物含量(P<0.05)。结论 CTO通过抑制癌基因c-Myc蛋白表达及AMPK/ACC通路,下调脂肪酸合成相关基因的表达活性,减弱细胞脂肪酸合...     

miR-7-5p靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡

目的探讨miR-7-5p是否靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11(LKB1)调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。方法通过TargetScanHuman分析miR-7-5p与LKB1的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-7-5p是否靶向LBK1;miR-7-5p mimics过表达或者miR-7-5p inhibitor敲低miR-7-5p的情况下,通过免疫印迹检测凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量,AMPK的总蛋白和是p-AMPK的表达量;通过Annexin-V染色检测非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡水平。结果 miR-7-5p靶向LKB1的3′UTR;过表达miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量上升(P0.05),p-AMPK的表达量减少(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P0.05),但是此种效应能被AMPK的抑制剂BML-275抑制;敲低miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量下降(P0.05),p-AMPK的表达量上升(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-7-5p通过靶向LKB1的3′UTR通过AMPK通路促进非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡。     

iASPP对表达野生型p53基因的乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

目的： P53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族成员能够调节P53诱导的细胞凋亡。其中ASPP家族抑制成员(iASPP)主要通过特异性地和P53蛋白结合抑制肿瘤细胞的凋亡,本实验通过构建iASPP的RNAi质粒,研究在体内外抑制iASPP基因后对表达野生型p53基因的乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法: 采用分子生物学方法构建iASPP的腺病毒RNAi质粒pAd-iASPP-RNAi;体外转染MCF-7细胞,同时建立MCF-7细胞的裸鼠移植瘤模型;分别采用RT-PCR和Western blotting检测转染后瘤细胞iASPP mRNA和蛋白质表达的变化;采用流式细胞术检测转染前后瘤细胞凋亡的变化。结果: 转染iASPP RNAi后,MCF-7细胞的iASPP mRNA及蛋白表达量降低（抑制率分别为95.4%和96.8%,P<0.01）;MCF-7细胞的凋亡百分率、坏死百分率与对照组相比具有显著差异（P<0.01）。裸鼠移植瘤模型经pAd-iASPP-RNAi处理后,iASPP mRNA及蛋白表达量也明显降低（抑制率分别为87.4%和89.2%,P<0.01）;移植瘤细胞的凋亡百分率和坏死百分率显著上升（P<0.01和P<0.05）。结论: 在体内外抑制iASPP基因的表达能够通过p53途径诱导表达野生型p53的乳腺癌细胞凋亡。     

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05...     

过表达Homer1a对神经元机械性损伤模型的保护作用及可能机制

目的:探讨过表达Homer1a对神经元机械性损伤模型细胞凋亡和AMP活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响。方法:分离培养大鼠大脑皮层神经元,随机分组为对照组、模型组、空载组和Homer1a过表达(Exp-Homer1a)组。构建神经元机械性损伤模型,转染Homer1a过表达载体。采用MTT法检测各组细胞活力,qPCR检测各组细胞Homer1a的mRNA表达水平,使用乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定各组细胞上清液LDH活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组Hormer1a、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AMPKα和AMPKα蛋白的表达。结果:与对照组比较,机械性损伤神经元的活力显著降低,上清液LDH活性和神经元凋亡率显著增加(P0.05),且Homer1a mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05);与模型组比较,Exp-Homer1a组的上清液LDH活性和神经元凋亡率显著降低,神经元中cleaved caspase-3和Bax的表达水平显著降低(P0.05),Bcl-2和p-AMPKα的表达水平显著升高(P0.05)。结论:过表达Homer1a可能通过促进激活AMPKα磷酸化及抑制神经元凋亡来提高机械性损伤神经元的存活率。     

抑制c-FLIP_L表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞的研究

目的:探讨抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞株的可行性。方法:构建c-FLIPL序列特异性siRNAs表达载体并转染A549细胞抑制c-FLIPL基因表达,化学抑制剂他莫昔芬抑制c-FLIPL蛋白表达。RT-PCR和Western blot法检测c-FLIPL的mRNA和蛋白表达的变化。Western blot法检测caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,MTT法检测联合应用RNAi+rhTRAIL和他莫昔芬+rhTRAIL对A549细胞的杀伤活性。结果:特异性siRNA片段能显著降低A549细胞中c-FLIPL的mRNA水平和蛋白水平。他莫昔芬可以显著抑制c-FLIPL蛋白的表达。两者均可以实现caspase-8的活化,并促进rhTRAIL对A549细胞诱导凋亡作用,凋亡率从2.52%提高到64.5%和59.2%(P<0.05),他莫昔芬和siRNA均可显著促进rhTRAIL蛋白对A549细胞的增殖抑制作用,抑制率分别提高到73.2%和69.5%(P<0.05)。结论:靶向抑制FLIP蛋白表达能增加A549细胞对rhTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的研究应用。     

AMPK激活剂抑制PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的: 观察血小板源性生长因子(PDGF)及一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷(AICAR)干预后血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖变化,探讨PDGF对平滑肌细胞的促增殖效应及激活AMPK抑制增殖机制。 方法: SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞经PDGF及AICAR干预24 h、48 h、72 h后,分为A组(AICAR)、P组(PDGF)、A+P组(AICAR+PDGF)和对照组,4个组用MTT法测量细胞的增殖情况;并检测不同AICAR作用时间下(30 min、1 h、3 h、6 h、12 h)AMPK的活化情况和mTOR 的蛋白活性,以及上述各组中AMPK活化和mTOR 蛋白活性。结果: (1)与对照组相比,PDGF干预组的MTT值显著增加(P<0.05),AMPK激活组能显著抑制PDGF诱导的MTT值的增加效应(P<0.05);(2) AICAR可诱导细胞AMPK的磷酸化水平增加(P<0.05),AICAR的诱导效应有随药物干预时间增加而逐渐增强的趋势;(3)与对照组相比, AICAR干预后p-mTOR表达活性显著减弱(P<0.05),随着药物干预时间延长,p-mTOR表达也呈逐渐减弱的趋势;(4)各组干预12 h后分别检测p-AMPK表达强度,与对照组比较,P组显著减弱(P<0.01),A+P组显著增强(P<0.01),而A+P组与P组比较,A+P组强于P组(P<0.01),A组较对照组显著增强(P<0.01);检测p-mTOR表达强度,与对照组比较,P组显著增强(P<0.05),A+P组较低(P<0.05),A+P组低于P组(P<0.05),A组低于对照组(P<0.05)。结论: PDGF刺激能促进VSMCs增殖,该促增殖效应可被AMPK激活剂AICAR所抑制;细胞mTOR活性下调可能参与AMPK活化诱导的抑制VSMCs增殖的作用。     

生理性周期性张应变通过激活AMPK磷酸化抑制血管平滑肌细胞迁移

目的 探讨细胞能量代谢的关键调节因子 AMP激活的蛋白激酶AMPK在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）响应生理性周期性张应变力学刺激后对VSMCs迁移的影响。方法 采用 Flexcell-5000T体外细胞张应变加载系统,对大鼠原代培养的 VSMCs 施加10%幅度、1.25 Hz 频率的周期性张应变,模拟VSMCs在体内的生理性力学环境;以未加载周期性张应变的静态细胞为对照组,Western blotting 检测 VSMCs的 p-AMPK蛋白表达;划痕实验检测 VSMCs 迁移功能。结果 与静态组的细胞相比,生理性周期性张应变加载24 h后显著减少划痕愈合面积,提示生理性周期性张应变抑制VSMCs迁移;生理性周期性张应变加载3 h后,VSMCs的p-AMPK蛋白表达显著升高,而加载24 h后p-AMPK蛋白表达显著降低。在生理性周期性张应变加载条件下,孵育AMPK抑制剂可以在张应变加载3 h后显著降低 p-AMPK蛋白表达,而在张应变加载24 h后显著促进VSMCs迁移;在静态条件下孵育AMPK激活剂 AICAR 3 h后显著诱导p-AMPK蛋白表达,孵育24 h后显著抑制VSMCs迁移;提示p-AMPK蛋白表达参与调控VSMCs迁移。结论 生理性周期性张应变能通过激活p-AMPK蛋白表达,进而抑制VSMCs迁移,提示生理性周期性张应变调控VSMCs迁移对维持血管稳态具有重要意义。     

转染缺氧诱导因子-1α对肺癌细胞A549生长的影响

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肺癌细胞株A549体内、外生长的影响,并探讨其可能机制。方法:将HIF-1α转染人肺癌细胞A549中,观察A549细胞生长。建立人肺癌裸鼠模型,随机将其分为两组:对照组(A组,10只),HIF-1α转染细胞组(B组,10只)。1月后,切除瘤灶、称瘤重、计算促瘤率。标本用免疫组化测定增殖细胞核抗原(PCNA),同时用Westernblot检测HIF-1α、凋亡抑制蛋白survivin和bcl-2的表达。结果:HIF-1α转染A549细胞后,细胞生长速率加快。转染HIF-1α的裸鼠肿瘤生长较对照组快,A组、B组的瘤重分别为(2.51±0.33)g,(3.44±0.40)g,促瘤率为37%。免疫组化和Westernblot提示:B组的PCNA表达比A组高,B组HIF-1α、survivin、bcl-2的蛋白水平明显高于A组。结论:转染HIF-1α体内、外均可促进肺癌A549细胞的生长,其机制可能与其能促进细胞恶性增殖和抑制凋亡有关。     

四元复合体介导C-MYC反义RNA抑制肝癌细胞生长增殖

目的探讨四元复合体介导的C-MYC反义RNA转移系统对肝癌细胞系HepG2.2.15致瘤性的体内外抑制作用。方法C-MYC反义RNA四元复合体体外瞬时转染HepG2.2.15细胞,流式细胞术检测C-MYC蛋白的表达水平、细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞增殖代谢活性。以HepG2.2.15细胞制备荷瘤裸鼠模型,局部瘤内注射C-MYC反义RNA四元复合体或联合注射IFN-α,称量瘤重,免疫组化方法检测肿瘤组织C-MYC蛋白的表达。结果C-MYC反义RNA可显著降低细胞C-MYC蛋白的表达水平,使细胞生长停滞于G0/G1期。体内抑瘤实验显示,反义治疗组瘤体C-MYC蛋白表达降低,瘤重(1.72±0.16)g,显著低于生理盐水对照组(P<0.05)。联合IFN-α注射组抑瘤效果更佳。结论肿瘤组织靶向性C-MYC反义RNA转移系统在体内外均可有效降低C-MYC蛋白的表达,抑制细胞的生长增殖。体内联合IFN-α可取得更佳的抑瘤效果。     

Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨Bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。方法采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹杂交、四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)、流式细胞术及凋亡的原位末端标记(TUNEL)检测等方法观察了Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖、凋亡的影响及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。结果MTT法检测显示,Bcl-XL反义寡核苷酸可显著抑制食管癌细胞的增殖(P<0.05);对Bcl-XLmRNA表达抑制率为57.3%,可显著下调Bcl-XL的蛋白表达;应用流式细胞术和TUNEL检测技术,反义寡核苷酸组的凋亡率分别为(31.1±5.8)%和35.0%,与相关对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。反义寡核苷酸组裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到显著抑制(P<0.05)。Bcl-XLmRNA及蛋白表达亦受到明显抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞明显增加。结论Bcl-XL反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长。通过反义寡核苷酸下调Bcl-XL的表达,达到治疗食管癌的目的,为食管癌的基因治疗提供实验依据。     

穿心莲内酯对口腔鳞状细胞癌体内外抑制作用的实验研究北大核心CSCD

目的:研究穿心莲内酯在体内外对口腔鳞状细胞癌(OSCC)生长的抑制作用。方法:穿心莲内酯浓度梯度处理CAL-27细胞,CCK8检测OSCC细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测克隆形成率,RT-PCR检测PCNA和P21表达水平,Hoechst观察细胞形态,Western blot检测caspase-9、caspase-3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和TGF-β1蛋白表达水平。OSCC细胞系CAL-27皮下注射裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67、caspase-3和Vimentin表达水平。结果:与0μmol/L穿心莲内酯组比较,15μmol/L、30μmol/L穿心莲内酯处理组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成率显著降低(P<0.05),PCNA mRNA表达水平下调,P21 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),caspase-9、caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组比较,50 mg/kg和100 mg/kg穿心莲内酯组肿瘤重量明显下降(P<0.05),caspase-3细胞阳性率显著增高,Ki67和Vimentin细胞阳性率显著减少(P<0.05)。结论:穿心莲内酯在体内外均能抑制OSCC细胞生长。     

TRAIL与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡时Fas和cFLIP表达的改变及其意义

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其基因Ad／GT-TRAIL和顺铂(DDP)联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用,并分析细胞表面Fas蛋白和细胞内cFLIPmRNA表达对凋亡的影响。方法:将TRAIL(100μg/L)、Ad／GT-TRAIL和顺铂作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达、RT-PCR检测cFLIPmRNA表达,观察和分析TRAIL及其基因Ad／GT-TRAIL对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂协同作用的机制。结果:Ad／GT-TRAIL和100μg/LTRAIL对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52.5%和43.5%,凋亡诱导率为12.95%和10.26%,联合应用顺铂,生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用(P<0.05),FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达,RT-PCR显示cFLIPmRNA表达下降,与联合应用组细胞凋亡率增加相一致。结论:TRAIL和Ad／GT-TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长,联合应用顺铂可显著提高疗效。     

氯喹对S_(180)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的探讨氯喹(CQ)对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑瘤作用及其可能机制。方法采用40只S_(180)荷瘤小鼠分为模型组,氯喹低剂量组,氯喹中剂量组,氯喹高剂量组进行体内抑瘤实验,观察不同浓度氯喹对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用;透射电子显微镜观察氯喹作用下荷瘤鼠肿瘤细胞超微结构的变化;流式细胞术检测氯喹诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡的情况;免疫组织化学方法检测相关凋亡因子Bcl-2、细胞色素C和Cle-Caspase-3的表达情况;Western blotting检测荷瘤组织Bcl-2和Cle-Caspase-3蛋白表达水平的变化以及线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量的变化。结果与模型组相比较,氯喹处理组小鼠移植肉瘤S_(180)生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小(P0.05);透射电子显微镜观察发现,与模型组比较氯喹处理组肿瘤细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成;各剂量组氯喹均可诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡,使抗凋亡因子Bcl-2表达下调,凋亡因子Cle-Caspase-3表达上调(P0.05);并且氯喹能够降低线粒体内细胞色素C蛋白的表达,提高细胞质细胞色素C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内细胞色素C向细胞质内释放。结论氯喹能够抑制小鼠S_(180)肉瘤的生长,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,从而发挥抑瘤的作用。     

STING激动剂联合PD-1抗体通过激活T细胞的抗肿瘤活性抑制肺癌进展的研究北大核心CSCD

目的:探索STING激动剂联合PD-1抗体是否可以有效激活体内的T细胞,发挥抑制肺癌进展的作用。方法:通过CFSE检测T细胞的体外增殖情况;通过ELISA法检测T细胞的细胞因子分泌能力;利用小鼠皮下移植瘤模型验证STING激动剂联合PD-1抗体对肿瘤细胞的体内抑制作用;利用免疫荧光实验检测CD3+T细胞的肿瘤浸润情况;通过流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞IFN-γ分泌情况;利用免疫组化法检测肿瘤组织中PD-1的表达水平。结果:STING激动剂可以在体外显著增强T细胞的增殖能力(P<0.0001)以及分泌IL-2(P<0.01)和IFN-γ(P<0.01)的能力;STING激动剂联合PD-1抗体显著抑制路易斯肺癌细胞LLC在小鼠体内的生长(P<0.0001);STING激动剂联合PD-1抗体可以显著增强肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润情况(P<0.0001),增加肿瘤组织中IFN-γ阳性的T细胞比例(P<0.0001),同时还可以显著降低肿瘤组织中PD-1的表达水平(P<0.0001)。结论:STING激动剂联合PD-1抗体可以有效激活体内T细胞的抗肿瘤免疫应答,抑制肺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤进展,该研究对在肺癌的临床治疗中实践这一联合疗法具有重要意义。     

重组腺相关病毒介导黑色素瘤分化相关基因7对人肝癌细胞体内外抑制效应的研究

目的 观察PEG启动子调控腺相关病毒介导的黑色素瘤分化相关基因7(MDA-7)在体内外抑制肝癌细胞的生物学活性,探讨重组腺相关病毒介导MDA-7基因用于肝癌基因治疗的应用前景.方法 构建重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统,体外感染人肝癌细胞株HepG2细胞.Western印迹检测转染细胞内MDA-7蛋白;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡变化.构建肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,尾静脉注射rAAV-PEG-MDA-7,观察其对肝癌生长的抑制作用;ELISA方法检测血浆MDA-7蛋白浓度;TUNEL法分析MDA-7对肿瘤细胞的凋亡诱导情况;免疫组织化学分析MDA-7在肿瘤组织中的表达.结果 重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可特异性转染HepG2细胞,MDA-7蛋白在HepG2细胞中高效表达,并呈时间依赖性.重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,GO/G1期细胞百分比明显增多,G2/M期的细胞显著减少(P＜0.05).全身系统性给予rAAV-PEG-MDA-7后,血清中可持续检测到MDA-7蛋白,且注射后2周浓度达高峰(200 ng/m1);肿瘤生长受抑制,抑瘤率为62%(P＜0.05);免疫组化结果显示MDA-7在肿瘤组织中表达;TUNEL结果显示rAAV-PEG-MDA-7可诱导肿瘤细胞凋亡.结论 构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统具有良好的肿瘤靶向性,通过抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡发挥抗肝癌作用.     

阿糖胞苷通过调控miR-126表达抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡的分子机制研究北大核心CSCD

目的:探讨阿糖胞苷是否可通过调控微小RNA-126(miR-126)表达抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡。方法:体外培养急性髓系白血病细胞HL-60,分别加入不同浓度的阿糖胞苷处理;采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-126的表达量;分别将miR-126 mimics、antimiR-126转染至HL-60细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原67(Ki67)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达量。结果:阿糖胞苷可显著降低细胞增殖率(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.05),抑制Ki67、p-PI3K、p-AKT表达(P<0.05),促进miR-126、Cleaved-caspase-3表达(P<0.05);转染miR-126 mimics后,细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Ki67蛋白水平显著降低(P<0.05),Cleavedcaspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),而转染anti-miR-126的作用与之相反;转染anti-miR-126可降低阿糖胞苷对HL-60细胞增殖及凋亡的作用,并可促进p-PI3K、p-AKT的表达(P<0.05)。结论:阿糖胞苷可能通过上调miR-126表达及抑制PI3K/AKT信号通路的活化从而抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡。