TNFα引起的微血管内皮细胞功能障碍及其分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦα)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα 引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｍＴＮＦα(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞的功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的部分分子机制。1 细胞增殖动力学　在体外培养的肺微血管内皮细胞 (ＰＭＶＥＣ)中发现 ,加入ＴＮＦ( 2 0ｎｇ/ｍＬ)后 ,细胞形态从圆形、多角形变成梭形 ,细胞的纵轴拉长 ,横轴缩小 ,…     

TNFα对血管内皮细胞的损伤作用及其分子机制

ＴＮＦα是一种重要的炎症介质。血管内皮细胞是ＴＮＦα作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα引起的血管内皮细胞损伤在很多炎症性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｒｈＴＮＦα（简称ＴＮＦ）引起大血管内皮细胞（人脐静脉内皮细胞）和微血管内皮细胞（大鼠肺微血管内皮细胞）形态、功能、代谢的损伤以及其与内皮细胞中原癌基因表达的关系,试图从中说明ＴＮＦ引起血管内皮细胞早期损伤的部分分子机制。１－细胞增殖动力学：在体外培养的大血管内皮细胞（ＨＶＥＣ,第３～４代）中发现,加入ＴＮＦ（２０～４０ｎｇｍＬ）后…     

TNFα对微血管内皮细胞的损伤作用及其分子机制(摘要)

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的。ＴＮＦα（简称ＴＮＦ）引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞早期损伤的部分分子机制。 １细胞增殖动力学在体外培养的肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）中发现,加入 ＴＮＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）后,细胞形态从圆形、多角形变成梭形,细胞的纵轴拉长,横轴缩小。此种变化从培养６ｈ开始,７２ｈ最显。光镜下未见明显细胞损伤表现,电镜下（透射电镜及扫描电镜）细胞器无明显改变,但见内皮细胞表面微绒毛减少。当ＴＮＦ的浓度增高到４０ｎｇ／ｍｌ以上,将其与ＰＭＶＥＣ共同孵育培养７２ｈ后,ＴＮＦ组内皮细胞总数比对照组（ＰＢＳ组）显著减少（５．２３ ±０．５０减到４．３０±０．３４,Ｐ＜０．０１）。用流式细胞仪分析细胞增殖周期发现,ＴＮＦ组处于Ｇ_１期的细胞明显增多,Ｓ期和Ｍ期的细胞明显减少（Ｐ＜０．０５）。结果提示,高浓度ＴＮＦ抑制内皮细胞增生,使细胞分裂延缓。 ２ ＰＧＩ_２和ｔ－ＰＡ前列腺素Ｐ     

TNF-α引起的微血管内皮细胞功能障碍及其细胞分子机制1

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子(TNF-α)作用的靶细胞之一. 由TNF-α引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义. 本工作主要研究不同浓度的rhTNF-α(简称TNF)引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系, 试图从中说明TNF引起微血管内皮细胞功能障碍的表现及其部分细胞分子机制.     

FAS， NF-κB及Caspases在TNFα介导的微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 :研究肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及ＦＡＳ ,ＮＦ -κＢ和Ｃａｓｐａｓｅｓ在此种凋亡中的作用。方法 :用ＴＵＮＥＬ ,流式细胞仪等方法测定ＴＮＦ引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(内皮细胞 )凋亡。用免疫组化方法测定ＴＮＦ引起内皮细胞ＮＦ -κＢ的活化 ,研究其活化对ＴＮＦ引起的内皮细胞凋亡的影响。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、ＦＡＳ抗体测定ＴＮＦ对内皮细胞ＦＡＳ表达的影响及ＦＡＳ在内皮细胞凋亡中的作用。用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫组化测定ＴＮＦ作用后凋亡蛋白酶Ｃａｓｐａｓｅ- 8,Ｃ…     

TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响

目的 :目前认为动脉粥样硬化 (ＡＳ)是一种炎症性疾病 ,其致病因素多种 ,细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用。因而通过ＴＮＦ α作用于内皮细胞 (ＥＣ)后 ,观察单核细胞对其粘附的变化 ,粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子 (ＮＦκＢ)变化 ,以探讨ＴＮＦ α在ＡＳ发生早期细胞行为中的作用。方法 :人脐静脉内皮细胞和γＴＮＦ α(5ｎｇ/ｍｌ)作用 4ｈ后 ,用细胞计数法测Ｕ937细胞以ＥＣ粘附率 ,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＣ膜上粘附分子ＶＣＡＭ 1、ＩＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达 ,以及采用细胞免疫化学方法测…     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨ＮＦκＢ以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对ＴＮＦ α加ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ基因表达的作用及其机制。方法 :通过免疫组化染色ＡＢＣ法用抗内皮细胞抗体ＣＤ31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映ＮＯ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＲＴ ＰＣＲ分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平。ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦκＢ的结合活性。结果 :ＴＮＦα(10 0Ｕ/ｍｌ)加ＬＰＳ(1ｕｇ/ｍｌ)处理内皮细胞 2ｈ后ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平明显上升 (Ｐ <0 .0 5 ) ,2 4ｈ后能明显增加…     

细胞因子诱导的生长因子在人脐内皮细胞的基因表达

众所周知 ,内皮细胞能产生许多生在子而参与各种不同的促生长过程 ,如血管生成、动脉粥样硬化、造血过程。血管内皮细胞生长因子 (ＶＥＧＦ)和碱性纤维生长因子(ｂＦＧＦ)主要参与内皮细胞增殖、新血管形成 ;血小板源性生长因子 (ＰＤＧＦ Ｂ)、ｂＦＧＦ主要参与动脉粥样硬化过程 ;在造血过程中 ,干细胞因子 (ＳＣＦ)、粒细胞集落刺激因子 (Ｃ ＣＳＦ)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (ＧＭ ＣＳＦ)非常重要。所有这些生长因子在内皮细胞于一定的因素或条件下 (如缺氧、应激等 )可以被诱导产生。白介素 1(ＩＬ 1α)和ＴＮＦ α被认为是内皮细…     

大鼠局部脑缺血区VCAM-1表达和单核/巨噬细胞浸润的研究

正常生理情况下血管内皮细胞不表达或者弱表达ＶＣＡＭ 1,但在炎症病灶区和免疫反应时产生的细胞因子可诱导血管内皮细胞ＶＣＡＭ 1的表达 ,从而导致单核 /巨噬细胞的浸润。研究证实 ,ＶＬＡ 4(ｖｅｒｙｌａｔｅａｐｐｅａｒｉｎｇａｎｔｉｇｅｎ 4)抗体能完全阻滞ＶＣＡＭ 1依赖性的细胞 细胞间的粘附。正常脑内存在少量ＥＤ2阳性单核/巨噬细胞。而在自发性高血压鼠和老龄鼠其数量增加。细胞因子ＩＬ 1(ｉｎｔｅｒ ｌｅｕｋｉｎ 1)和ＴＮＦ α(ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ α)对单核 /巨噬细胞的浸润起调节作用。本次实验 ,旨…     

TNF-α促进鼠模型中免疫复合物的清除

近来研究证明ＬＰＳ能显著增强ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠单核吞噬细胞系统 (ＭＰＳ)清除免疫复合物 (ＩＣ)的功能。该实验作者以同源ＩｇＧ致敏红细胞 (ＥＡ)作为ＩＣ ,给小鼠静脉注射 ,建立鼠模型 ,用以研究小鼠注射ＬＰＳ后最早诱导释放的细胞因子之一—ＴＮＦ α在清除ＩＣ中的作用。方法 :给ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠静脉注射 5 0 μｇ/ｍｌＬＰＳ 1 0 0 μｌ,1小时后血清ＴＮＦ α达最高峰 ,取此时血清为ＴＮＦ α( )血清 ,血清ＴＮＦ α浓度用Ｌ92 9细胞测定 ,注射后 4小时和 2 4小时ＴＮＦ α活性与注射前及盐水处理组无差别。取注射后 4小时血清为ＴＮ…     

肿瘤坏死因子与移植肝的保存再灌注损伤

肝移植过程中的保存再灌注损伤是缺血再灌注损伤的特殊类型。肝移植过程中肿瘤坏死因子水平升高，可能与内毒素的产生和枯否氏细胞的激活有关。肿瘤坏死因子通过促进血管内皮细胞粘附白细胞及分泌炎性介质，增强中性粒细胞对内皮细胞的粘附、激活巨噬细胞释放白介素等，介导组织损伤，通过使用降低ＴＮＦ合成的药物，设计新型保存液及ＴＮＦ抗体的使用可拮抗ＴＮＦ对原位肝移植功能的影响     

微血管内皮细胞的分离和培养

血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理过程及炎症反应、糖尿病生物膜病变、肿瘤侵袭等病理生理反应 (Ｆｏｌｋｍａｎ，１９９２)。为了对内皮细胞的功能有更多了解 ,人们对人及动物内皮细胞的培养进行了探索。近年来 ,血管内皮细胞的培养已从大血管 (主动脉、脐静脉 )内皮细胞发展到微血管内皮细胞(ＭＥＣｓ)。ＭＥＣｓ的分离和培养在认识正常的血管生成和实体瘤血管新生、炎性细胞的迁移及血管病理生理等过程中发挥了关键作用。ＭＥＣｓ因器官功能不同而有不同的异质性 ,如其形态、抗原表达及对生长因子的反应等。在…     

国内微循环研究的若干进展

近年来微循环研究已深入到细胞分子水平,微血管分子医学的研究已广泛开展。本文主要环绕血管内皮细胞功能障碍的细胞分子机制、血管新生、血管平滑肌细胞病变和缺血再灌注损伤四个方面对2001年国内的主要研究进展作一综述。 1血管内皮细胞功能障碍的细胞分子机制 LPS和TNFα引起内皮细胞功能障碍的细胞分子机制是研究的重点。在研究脂多糖(LPS)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌内皮素-1(ET-1)与肾上腺髓质素(Adm)的机制时发现,LPS刺激HVEC分泌ET-1     

细胞因子与全身性炎症反应综合征发生机理的研究进展

ＳＩＲＳ的发生过程中有多种细胞因子参与。促炎因子的持续性大量产生、促炎／抗炎平衡的破坏以及机体细胞反应性的异常等可能是ＳＩＲＳ及其所致炎性器官损伤的主要原因。基因缺陷小鼠的研究提示：ＬＰＳ刺激ＩＣＡＭ －１ 表达并通过诱导血管内皮细胞和中性粒细胞的相互作用造成器官损伤；ＩＦＮγ／ＴＮＦα则可直接诱导靶器官中的细胞大量凋亡引起器官功能衰竭；ＳＥＢ 则通过活化Ｔ 细胞、产生ＩＦＮγ进而诱导炎症损伤。     

细胞因子与全身性炎症反应综合征发生机理的研究进展

ＳＩＲＳ的发生过程中有多种细胞因子参与。促炎因子的持续性大量产生,促炎／抗炎平衡的破坏以及机体细胞反应性的异常等可能是ＳＩＲＳ及其所致炎性器官损伤的主要原因,基因缺陷小鼠的研究提示：ＬＰＳ刺激ＩＣＡＭ－１表达并通过诱导血管内皮细胞和中性粒细胞的相互作用造成器官损伤;ＩＦＮγ／ＴＮＦα则可直接诱导靶器官中的细胞大量凋亡引起器官功能衰竭,ＳＥＢ则通过活化Ｔ细胞,产生ＩＦＮγ进而诱导炎症损伤。     

系统性红斑狼疮患者中TNF的检测

本研究检测系统性红斑狼疮 (ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙ ｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ,ＳＬＥ)患者外周血ＴＮＦ α、β ,ｓＴＮＦＲ水平以及淋巴细胞ＴＮＦ α、β基因的转录变化 ,从多层面分析ＳＬＥ患者中ＴＮＦ系统的变化。ＴＮＦ α、ＴＮＦ β(也称淋巴毒素α ,ＬＴα)的编码基因位于与免疫调节密切相关的ＭＨＣⅢ类区。最近在该区发现了与ＴＮＦ基因结构相同的新基因 ,编码的蛋白 (称淋巴毒素 β ,ＬＴβ)与ＴＮＦ高度同源 ,可能在免疫调节中起重要作用〔1〕。我们初步观察了ＳＬＥ患者中ＴＮＦ α、ｓＴＮＦＲ以及ＬＴβ可能的转录…     

蜕皮甾酮对肿瘤坏死因子致人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的和方法：实验以培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为研究对象，应用大剂量肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）造成ＨＵＶＥＣ损伤，观察培养上清液血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）及ＨＵＶＥＣ的超微结构变化，研究蜕皮甾酮（ＥＤＳ）对内皮细胞损伤的影响。结果：大剂量ＴＮＦ作用于ＨＵＶＥＣ时，其培养上清液的ＡＣＥ非常明显增高，超微结构破坏；应用ＥＤＳ，则培养上清液的ＡＣＥ有所减少、超微结构的损害程度有所减轻。结论：ＥＤＳ能够减轻人血管内皮细胞的损伤，揭示了ＥＤＳ在抗血管内皮细胞损伤方面的价值。     

rTNF_(-α)、IFN_(γ)对人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响

为了研究细胞因子ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ对内皮细胞表达粘附分子的影响,及ｒＩＦＮγ对ＴＮＦ α的协同效应。采用ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）,以Ｃｅｌ ＥＬＩＳＡ法检测粘附分子ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １的表达。结果表明,ｒＴＮＦ α以浓度和时间依赖的方式诱导ＨＵＶＥＣ表达ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １,ＩＦＮγ促进ｒＴＮＦ α诱导的ＶＣＡＭ １表达。ＩＦＮ α对ｒＴＮＦ α诱导效应无影响。提示ｒＴＮＦ α可诱导ＨＵＶＥＣ表达粘附分子,而ＩＦＮγ可促进ｒＴＮＦ α诱导的ＨＵＶＥＣ表达ＶＣＡＭ １。     

新型人肿瘤坏死因子基因在血管内皮细胞中的靶向表达

目的 探索一条肿瘤特异性基因治疗的新途径。方法 将新型人ＴＮＦ－αＤ１１ａ基因和ＫＤＲ特异性启动子插入到３’ＬＴＲ缺失２９９ｂｐ的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ中,构建成ｐＬＸＳＮ－Ｄ２９９－ＫＤＲｐ－ＴＮＦ－α－Ｄ１１ａ重组逆转录病毒载体,使目的基因转录受ＫＤＲ启动子驱动。通过脂质体介导将该重组载体转染ＰＡ３１７包装细胞,并用病毒上清感染血管内皮细胞和ＮＩＨ３Ｔ３细胞。分别经ＥＬＩＳＡ和ＭＴＴ法测定ＴＮＦ－αＤ１１ａ在血管内皮细胞中的表达及其生物学活性。结果 成功构建了携带ＴＮＦ－αＤ１１ａ和ＫＤＲ启动子的逆转录病毒载体,ＴＮＦ－αＤ１１ａ在血管内皮细胞中的表达水平及细胞增殖抑制作用均高于ＮＩＨ３Ｔ３细胞。结论 ＫＤＲ启动子可使外源ＴＮＦ－αＤ１１ａ在血管内皮细胞中特异性表达。     

氧化应激与自噬在糖尿病血管并发症中的相互作用

血管损伤是糖尿病患者的常见并发症,血管内皮细胞的功能障碍是导致糖尿病血管损伤的主要危险因素。自噬是正常细胞在生长周期中必不可少的维持体内稳态的生理过程,其主要功能是细胞器回收和蛋白质的降解,异常自噬的发生将导致细胞线粒体的损伤并进而促进细胞死亡。内皮细胞线粒体是活性氧(ROS)产生的主要部位,糖尿病引起的高糖血症使细胞氧化应激水平升高,ROS产生增加,导致血管内皮细胞功能障碍。ROS可诱导细胞过度自噬,使内皮细胞发生凋亡与坏死,从而引起血管损伤。本文将对ROS及其诱导的过度自噬在促进糖尿病血管并发症中的病理生理作用和研究作一综述。