抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的：探讨ＮＦкＢ在大鼠肺微血管内皮细胞ｉＮＯＳ基因诱导表达中的作用及抗氧化睦内皮细胞ｉＮＯＳ诱导表达的影响及其机制。方法：Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞上清液ＮＯ２水平以反映ＮＯ的生成,Ｎｒｔｈｅｒｎ印迹分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平,ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦкＢ的结合活性。结果：抗氧化可阻断内皮细胞培养体系ＬＰＳ和ＴＮＦα诱导的ＮＯ生成及ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达;ＬＰＳ和ＴＮＦα可诱导大鼠肺微血管内皮细胞Ｎ     

FAS， NF-κB及Caspases在TNFα介导的微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 :研究肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及ＦＡＳ ,ＮＦ -κＢ和Ｃａｓｐａｓｅｓ在此种凋亡中的作用。方法 :用ＴＵＮＥＬ ,流式细胞仪等方法测定ＴＮＦ引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(内皮细胞 )凋亡。用免疫组化方法测定ＴＮＦ引起内皮细胞ＮＦ -κＢ的活化 ,研究其活化对ＴＮＦ引起的内皮细胞凋亡的影响。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、ＦＡＳ抗体测定ＴＮＦ对内皮细胞ＦＡＳ表达的影响及ＦＡＳ在内皮细胞凋亡中的作用。用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫组化测定ＴＮＦ作用后凋亡蛋白酶Ｃａｓｐａｓｅ- 8,Ｃ…     

TNF_α对大鼠肺微血管内皮细胞NO的产生及NOSmRNA表达的影响

ＴＮＦα对大鼠肺微血管内皮细胞ＮＯ的产生及ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响上海医科大学病理生理学教研室（上海２０００３２）刘清行金惠铭阐明ＴＮＦα对内皮细胞ＮＯ的产生及ＮＯＳｍＲＮＡ表达的作用及其机制。以大鼠肺微血管内皮细胞为材料，测定细胞培养上清液中ＮＯ?..     

LPS和几种促炎细胞因子促进人血管平滑肌细胞iNOS mRNA的表达

ＬＰＳ、ｒｈｌＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＴｈＦ－ａ和ｒｈＩＦＮ－γ单独或两两组合加于培养的人血管平滑肌细胞（ｈＶＳＭＣ）,测定了ｈＶＳＭＣＮＯＳ活性,ｃＧＭＰ含量,ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达丰度和培养液中ＮＯ２浓度。ＬＰＳ和细胞因子都能诱导ｈＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ　ｍＲＮＡ,升高ｈＶＳＭＣ　ＮＯＳ活性、ｃＧＭＰ含量和培养液中ＮＯ２浓度;ＴＮＦ－ａ是受试细胞因子中唯一能与另外三种细胞因子分别组合都显示出协同效应的细胞因子;ＬＰＳ和其余三种细胞因子间的两两组合都没有显示出协同效应;本研究结果表明：ＬＰＳ、ｒｈＴＮＦ－α、ｒｈＩＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｔｈＴｈＦ－α、ｔｈＩＦＮ－γ都能诱导ｈＶＳＭＣ合成ＮＯ;ＴＮＦ－α可能是诱导ｈＶＳＭＣｉＮＯＳ表达的致炎细胞因子中最为重要的。     

TNFα、LPS诱导EA、hy926细胞一氧化氮合酶基因的转录

一氧化氮 (ＮＯ)由一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)催化Ｌ -精氨酸生成。诱导型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)是ＮＯＳ三种亚型中催化产生ＮＯ较多的一种 ,可被多种炎症因子诱导 ,而诱导环节多在基因转录水平。目的 :观察肿瘤坏死因子α(ＴＮＦα)、脂多糖 (ＬＰＳ)对内皮细胞系ＥＡ .ｈｙ92 6细胞ｉＮＯＳ基因转录的影响 ,并探讨蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)和丝裂素活化蛋白激酶 (ＭＡＰＫ)的作用。方法 :传代培养的ＥＡ .ｈｙ92 6细胞用ＴＮＦα ,ＬＰＳ处理 1 8小时 ,并同时加入或不加蛋白激酶Ｃ抑制剂Ｈ - 7、Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ和丝裂素原活化蛋白激酶抑制…     

外源性一氧化氮抗内毒素致大鼠肺微血管 高通透性的作用及机制研究

目的 :肺内中性粒细胞 (ＰＭＮｓ)聚集及微血管通透性增高是内毒素活性成分脂多糖 (ＬＰＳ)致急性肺损伤 (ＡＬＩ)的重要发病环节。一氧经氮 (ＮＯ)对微血管通透性的病理生理作用迄今尚无定论。本实验旨在观察气管内滴注ＮＯ供体硝普钠 (ＳＮＰ)能否通过促进ＰＭＮ凋亡 ,减轻肺内ＰＭＮ聚集 ,起到抗ＬＰＳ所致的以微血管通透性增高为特征的ＡＬＩ的作用。方法 :动物实验采用气管内滴注给药。分假手术 (Ｓｈａｍ)组、ＬＰＳ( 1 0 0 μｇ/只 )组、ＬＰＳ ＳＮＰ( 5μｇ/只 )组。 6ｈ后测定支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中蛋白含量、肺组织中伊…     

山莨菪碱减轻TNF-α所致内皮细胞凋亡

目的 :从转录因子水平观察山莨菪碱能否减轻ＴＮＦ -α所致内皮细胞的凋亡 ,并探讨其机制是否与其抑制ＮＦ -κＢ活化有关。方法 :培养小牛肺动脉内皮细胞 (ＢＰＡＥＣ) ,将山莨菪碱 ( 0 2ｍｇ/ｍＬ)加入细胞培养基中 ,30ｍｉｎ后再加入ＴＮＦ -α( 2 50 0Ｕ/ｍＬ)损伤 2 4ｈ ,采用Ｈｏｅｃｈｓｔ 332 58染色 ,荧光显微镜观察细胞凋亡情况 ,并进行显微照相。采用Ｓｅｌｌｉｎ法抽提细胞上清片段ＤＮＡ及琼脂糖电泳 ,观察是否出现ＤＮＡ梯状条带 ,用二苯胺法测定上清液及沉淀物中ＤＮＡ含量 ,计算细胞ＤＮＡ断裂百分率。ＢＰＡＥＣ表达Ｉ-κ…     

TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响

目的 :目前认为动脉粥样硬化 (ＡＳ)是一种炎症性疾病 ,其致病因素多种 ,细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用。因而通过ＴＮＦ α作用于内皮细胞 (ＥＣ)后 ,观察单核细胞对其粘附的变化 ,粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子 (ＮＦκＢ)变化 ,以探讨ＴＮＦ α在ＡＳ发生早期细胞行为中的作用。方法 :人脐静脉内皮细胞和γＴＮＦ α(5ｎｇ/ｍｌ)作用 4ｈ后 ,用细胞计数法测Ｕ937细胞以ＥＣ粘附率 ,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＣ膜上粘附分子ＶＣＡＭ 1、ＩＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达 ,以及采用细胞免疫化学方法测…     

α-黑素细胞刺激素体外对星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响

目的：研究α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对ＬＰＳ诱导星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子的影响。探讨α－ＭＳＨ的抗炎作用机制。方法：分别用ＬＰＳ或α－ＭＳＨ＋ＬＰＳ处理体外培养的大鼠脑星形胶质细胞,用Ｇｒｉｅｓｓ试剂测定ＮＯ,以ＭＴＴ显色法检测ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α,采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外培养的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ显著增高;若同时给予ＬＰＳ和α－ＭＳＨ,可明显降低ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α的产生以及ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结论：Ｒ昧α－ＭＳＨ抑制星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子与其抑制中枢神     

鼠脾细胞肿瘤坏死因子的诱生和检测

本文报道采用Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＰＳ刺激ＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞诱生ＴＮＦ的最适条件，并用人ＴＮＦ ＥＬＩＳＡ方法检测小鼠ＴＮＦ。结果显示：脾细胞经ＬＰＳ刺激２ｈ就可在上清液中测出ＴＮＦ，１２ｈ达高峰，ＬＰＳ最适刺激浓度为１０＾－２μｇ／ｍｌ，ＴＮＦ产量依赖于脾细胞的浓度。     

内源性过氧亚硝基阴离子参与介导内毒素致 肺动脉内皮细胞的损伤作用

目的 :在培养的小牛肺动脉内皮细胞 (ＢＰＡＥＣ)水平 ,观察ＬＰＳ对ＢＰＡＥＣ诱生ＯＮＯＯ- 能力及内皮源性ＯＮＯＯ- 在ＬＰＳ致ＢＰＡＥＣ损伤中的作用 ,以探讨ＬＰＳ引起肺动脉内皮细胞损伤的新机制。方法 :用流式细胞分析技术检测ＯＮＯＯ- 生成标志物ＮＴ的荧光强度 (任意单位 ,代表内源性ＯＮＯＯ- 的生成量 )和ＮＴ阳性细胞数 ,计算ＮＴ阳性细胞百分率。结果 :( 1 ) 1 μｇ、5μｇ和 1 0 μｇ/ｍＬＬＰＳ剂量依赖性引起ＢＰＡＥＣ诱生ＮＴ(亦即ＯＮＯＯ- )明显增多 ,分别为 6 36± 0 1 1、6 55± 0 30和 7 2 4± 0 40 ,显著高于…     

针刺对小鼠巨噬细胞基因表达的效应

目的 为了探讨针刺镇痛效应与细胞免疫的关系,研究了针刺对小鼠巨噬细胞中ｃ－ｆｏｓ ｍＲＡＮ ｐｐＥＮＫｍＲＮＡ,ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ活性的效应。方法 ２０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠被随机分成２组;ａ．用５Ｈｚ电针处理的针刺组;ｂ．未用电针处理的对照组。针刺或牵拉前后用钾离子渗透法检测痛阈。实验采用原位杂交,ＮＡＤＰＨＮＢＴ组织化学,ＲＮＡ斑点印迹及蛋白质斑点印迹技术。应用ＴＬＣ扫描仪扫描斑点印迹信号并作统计学处理。结果 杂交信号和ｉＮＯＳ活性呈现蓝紫色,信号均定位于巨噬细胞的胞质。与对照组相比,针刺组的所有印迹信号均增强,Ｐ〈０．０１。针刺组中ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ,ｐｐＥＮＫｍＲＮＡ,ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达及ｉＮＯＳ的活性与提高的痛阈呈正相关。此外,ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ与ｍＲＮＡ与ｐｐＥＮＫｍＲＮＡ之间的变动呈正     

脂多糖诱导地鼠肺泡巨噬细胞中一氧化氮对TNF—α的调节作用

对地鼠肺进行灌洗,利用灌洗液分离纯化出肺泡巨噬细胞（ＡＭ）,并进行培养。脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,分 别加入一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂和一氧化氮（ＮＯ）供体,观察ＮＯ和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨ＮＯ 对ＴＮＦ－α的作用关系。结果显示：ＬＰＳ刺激ＡＭ使ＮＯ和ＴＮＦ－α含量均增加（Ｐ＜０．０１）,特异性ｉＮＯＳ抑制剂使活化 的ＡＭ分泌产生ＴＮＦ－α上调,ＮＯ供体可显著抑制ＴＮＦ－α的释放。不同的ＮＯ抑制剂和ＮＯ供体使ＮＯ和ＴＮＦ－α含 量变化不同。提示 ＮＯ和 ＴＮＦ－α是 ＡＭ分泌的炎症细胞因子, ＮＯ对 ＴＮＦ－α存在着调节作用。     

八肽胆囊收缩素在ONOO~-介导内毒素致肺动脉内皮细胞损伤中的保护作用

目的和方法 :我们以往的实验显示 ,内皮源性过氧亚硝基阴离子 (ＯＮＯＯ- )参与介导ＬＰＳ引起的培养肺动脉内皮细胞损伤 ;在离体血管水平 ,ＣＣＫ对ＬＰＳ损害肺动脉内皮功能有保护作用。本实验在培养的牛肺动脉内皮细胞 (ＢＰＡＥＣ)水平 ,进一步观察八肽胆囊收缩素 (ＣＣＫ - 8)对ＬＰＳ诱生内皮源性ＯＮＯＯ- 和对ＬＰＳ诱导ＢＰＡＥＣ损伤的影响 ,旨在初步探讨ＣＣＫ的保护作用机制。结果 :( 1 )ＣＣＫ可抑制ＬＰＳ诱导的ＢＰＡＥＣ生成ＯＮＯＯ- 增多的标志物硝基酪氨酸 (ＮＴ)的荧光强度由ＬＰＳ组的 6 55± 0 30降低至 4 37± 0 0…     

白细胞介素1,肿瘤坏死因子α和脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达 …

目的 观察细胞因子白细胞介素１（ＩＬ－１）β、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α和脂多糖（ＬＰＳ）是否诱导人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ及蛋白。方法 选取生长汇合的人脐胸脉内皮细胞,在其培养基中分别加入终浓度为２ｎｇ／ｍｌ的ＩＬ－１β、２０ｎｇ／ｍｌ的ＴＮＦβ和１００ｎｇ／ｍｌ的ＬＰＳ,３７℃共育４ｈ后,按照一步法提取其总ＲＮＡ,用γ－＾２２Ｐ标记的寡核苷酸ｄｏｔ ｂｌｏｔ分析     

诱导型一氧化氮合酶活性变化对肺纤维化形成的影响

目的 :以前的工作表明 ,在平阳霉素 (ＢＬＭＡ5)诱导大鼠肺纤维化形成的早期 (注ＢＬＭＡ5 后 7ｄ和 1 4ｄ) ,肺内ＮＯ含量一过性升高 ,且与肺间质ｉＮＯＳ蛋白表达增强有关。在此基础上 ,本文应用ｉＮＯＳ特异性抑制剂氨基胍 (ａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ,ＡＧ) ,观察肺内ｉＮＯＳ活性受到抑制后 ,肺内ＮＯ含量的变化以及对肺纤维化形成的影响 ,进一步探讨ｉＮＯＳ合成的ＮＯ在肺纤维化形成中的作用。方法 :ＳＤ大鼠 2 4只 ,分为ＢＬＭＡ5 ＡＧ 1 4ｄ组、ＢＬＭＡ5 ＡＧ 30ｄ组、ＢＬＭＡ5 ＮＳ 1 4ｄ组和ＢＬＭＡ5 ＮＳ 30ｄ组。每组均…     

致敏大鼠肺组织一氧化氮的变化与气道炎症关系的研究

目的 探讨致敏大鼠肺组织一氧化氮（ＮＯ）的变化及其与气道炎症的关系。方法 采用原位杂交及免疫组化技术（ＡＢＣ法）,观察卵蛋白致敏大鼠过敏性气道炎症肺组织中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达与气道炎性细胞、活化Ｔ淋巴细胞间的关系。结果 ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ主要表达于致敏大鼠肺泡巨噬细胞臁细支乞管上皮细胞,与肺组织匀浆中ＮＯ代谢产物增高相一致。定量表达于致敏大鼠肺泡巨噬细胞及细支气管上皮细胞,与肺组     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

一氧化氮合成酶在白血病细胞的表达

目的：为了探讨一氧化氮合成酶在ＣＤ２３白血病细胞的表达，以及ＣＤ２３与ＮＯ的关系。方法：采用ＣＲＴ－ＰＣＲ和ＦＡＣＳ技术及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ放射自显影方法。结果：发现ＣＤ２３白血病细胞株可以表达ｉＮＯＳｍＲＮＡ和ｉＮＯＳ蛋白，同时ＣＤ２３可上调ｉＮＯＳ的表达。结论：ｉＮＯＳ可能与人ＣＤ２３白血病细胞的增殖和凋亡有关。     

TNF-α导致细胞骨架重排和当归的逆转作用

目的 :探讨ＴＮＦ α导致细胞骨架重排和当归的逆转作用。方法 :常规培养人脐静脉内皮细胞 ,分成下列各组 :①对照组 :常规培养 ;②当归组 :培养液中加入当归注射液2 0ｍｇ/ｍｌ;③ＴＮＦ α组 :培养液中加入ＴＮＦ α 10 0Ｕ/ｍｌ;④ＴＮＦ α 当归组 :培养液中同时加入ＴＮＦ α 10 0Ｕ/ｍｌ和当归 2 0ｍｇ/ｍｌ。4ｈ后用Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎｅｒｈｏｄａｍｉｎｅ标记骨架蛋白Ｆ ａｃｔｉｎ ,用ＯｌｙｍｐｕｓＬＸ70荧光显微镜 (ＣｅｌｌＳｃａｎ ,Ｓｃａｎａ ｌｙｔｉｃｓ Ｂｉｏｎｉｓ)检测细胞骨架分布。结果 :荧光显微镜下 ,在内皮…