脂多糖刺激人血管内皮细胞分泌内皮素和肾上腺髓质素及其机制研究

目的:研究脂多糖(LPS)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌内皮素-1(ET-1)与肾上腺髓质素(Adm)的机制。方法:在培养的HVEC上,用放射免疫法测定不同浓度LPS刺激HVEC分泌的ET-1与Adm,以及不同的细胞信号转导阻断剂对其分泌的影响。结果:LPS呈时间和浓度依赖性地增加HVEC分泌ET-1和Adm,ET-1/Adm比值与对照组比较无明显差异(P＞0.05)。在LPS刺激基础上,细胞外信号调节激酶(ERKs)抑制剂PD₀₉₈₀₅₉和P38蛋白激酶抑制剂SB₂₀₂₁₉₀可明显降低LPS刺激HVEC分泌ET-1(P＜0.01),仅SB₂₀₂₁₉₀显著降低Adm的分泌(P＜0.05),其余PKC抑制剂H₇,钙调素(CaM)抑制剂W₇,Ca²⁺阻断剂nicardipine,钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环孢霉素(CsA)对LPS刺激HVEC分泌ET-1和Adm均无明显影响(P＞0.05)。结论:LPS刺激HVEC分泌ET-1可能与ERKs和P38两条途径有关,LPS刺激HVEC分泌Adm只与P38信号通路有关,两者均不取决于PKC、Ca²⁺、CaM、CaN依赖的信号通路。     

不同剂量内毒素刺激枯否细胞分泌肿瘤坏死因子-α及内皮素-1的体外观察

目的:探讨体外脂多糖(LPS)刺激枯否细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内皮素-1(ET-1)的作用。方法:采用大鼠肝KC分离与培养技术,动态观察LPS刺激KC分泌TNF-α和ET-1的作用。结果:LPS具有明显活化KC作用,在一定LPS浓度范围内对KC分泌的TNF-α及ET-1有促进作用。结论:LPS可促进体外培养的KC分泌TNF-α及ET-1,这可能与内毒素血症导致的肝损伤有关。     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞分泌功能的影响

目的：探讨脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法：选择体外培养的人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）为研究对象,用不同剂量的LPS进行处理,采用放免法检测上清液中内皮素-1（endothelin-1, ET-1）的含量,用流式细胞仪检测内皮细胞细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）的表达量。结果：LPS使ECV-304的ET-1含量显著增加,ICAM-1的表达量明显上调,并在一定范围内随着LPS浓度增加,呈剂量-效应关系。结论：LPS可使内皮细胞合成和释放ET-1增加,ICAM-1表达量增加.     

肝X受体对血管内皮细胞EA.hy926内皮素1表达的调节作用

目的 研究肝X受体(liver X receptor,LXR)对血管内皮细胞珠EA.hy926中内皮素1(endo-thelin-1,ET-1)表达的影响,并初步探讨LXR调节ET-1表达的分子机制.方法 在培养的EA.hy926中加入LXR的特异性配体GW3965,作用28 h后收集细胞及培养上清液.细胞经Trizol法提取总RNA,以RT-PCR检测ET-1 mRNA水平的变化,以放射免疫法测定细胞上清液ET-1含量的变化;将克隆有ET-1启动子区的荧光素酶报告基因质粒phET1-Luc(克隆于pGL3-Basic)、pCMX-LXRα、pCMX-RXRα和内参照质粒psv-β-gal共同转染于EA.hy926细胞,经荧光素酶报告基因检测研究LXR对ET-1启动子活性的影响,从而初步了解LXR调节血管内皮细胞ET-1表达的分子机制.结果 LXR特异性配体GW3965能够抑制血管内皮细胞EA.hy926中ET-1的mRNA和蛋白表达水平,并且抑制ET-1启动子的转录活性.结论 活化血管内皮细胞LXR可下调ET-1的表达,且该作用与LXR抑制ET-1基因启动子的活性有关.     

不同剂量内毒素刺激枯否细胞分泌肿瘤坏死因子-α及内皮素-1的体外观察

目的：探讨体外脂多糖(LPS)刺激枯否细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内皮素-l(ET-1)的作用。方法：采用大鼠肝KC分离与培养技术,动态观察LPS刺激KC分泌TNF-α和ET-l的作用。结果：LPS具有明显活化KC作用,在一定浓浓度范围内对KC分泌的TNF-α及ET-l有促进作用。结论：LPS可促进体外培养的KC分泌TNF-α及ET-1,这可能与内毒素血症导致的肝损伤有关。     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、iNOS mRNA表达的影响

目的：观察脂多糖（LPS）对人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、iNOSmRNA表达的影响，在分子水平上进一步探讨LPS影响人脐静脉内皮细胞分泌ET-1、NO的机制。方法：选用体外培养的第3代人脐静脉内皮细胞，以100 μg/L浓度的LPS与之共孵育6 h。提取总RNA，运用半定量RT-RCR的方法，对ET-1、eNOS、iNOS mRNA的表达情况进行分析。结果：ET-1的灰度比值分别为：正常对照组0.82，LPS组1.32；eNOS的灰度比值分别为：正常对照组1.20，LPS组0.65；iNOS组的灰度比值分别为：正常对照组0.20，LPS组0.19。结论：低浓度的LPS对人脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA的表达有促进作用，对eNOS mRNA的表达有抑制作用，对iNOS mRNA的表达则无显著作用。     

人脐静脉内皮细胞表达CD137分子及其功能的初步研究

目的　了解人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)CD137分子的表达情况 ,探讨其对内皮细胞功能的影响。方法　胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞 ,用RT PCR、定量荧光PCR和流式细胞仪技术 ,分别观测未刺激和用内毒素 (LPS)刺激的内皮细胞CD137mRNA与蛋白的表达情况。用anti CD137单克隆抗体交联内皮细胞表面CD137,ELISA检测其上清液中IL 8的含量。结果　①RT PCR和实时荧光定量RT PCR结果显示 ,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达少量CD137mRNA ,流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137蛋白 ;当用LPS刺激内皮细胞培养 2 4h后 ,mRNA和蛋白表达量均显著提高。②ELISA检测发现 ,anti CD137单克隆抗体交联内皮细胞表面CD137分子后 ,和同型抗体对照组相比 ,其培养上清液中细胞因子IL 8的表达量明显提高 ,与LPS刺激内皮细胞上调IL 8表达的程度相当。结论　人脐静脉内皮细胞组成性表达少量CD137分子 ,LPS可以显著上调其表达。交联内皮细胞表面CD137分子可提高其IL 8产生和分泌 ,提示其具有刺激内皮细胞活化的生物功能     

TNF-α引起的微血管内皮细胞功能障碍及其细胞分子机制1

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子(TNF-α)作用的靶细胞之一. 由TNF-α引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义. 本工作主要研究不同浓度的rhTNF-α(简称TNF)引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系, 试图从中说明TNF引起微血管内皮细胞功能障碍的表现及其部分细胞分子机制.     

脂多糖诱导小鼠内皮损伤早期T细胞亚群的变化

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导内皮损伤早期T细胞亚群的变化。方法:采用扫描电镜观察LPS刺激后内膜的形态学变化,流式细胞术检测外周血中内皮细胞表型CD62P+、CD62P+CD62E+改变,采用胞内外因子染色法检测T细胞亚群的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)及白细胞介素10(IL-10)的分泌状态。结果:LPS可导致小鼠血管内皮完整性受损,脱落内皮细胞CD62P+、CD62P+CD62E+比例明显高于对照组(P<0.05);内皮损伤的同时,小鼠CD3+CD4+T细胞中,TNF-α、IFN-γ、IL-17分泌细胞比例显著增加(P<0.05),而IL-10的分泌在LPS刺激1小时、4小时时升高较为明显(P<0.05)。结论:炎性CD4+T细胞亚群与脱落内皮细胞CD62P、CD62E的高表达状态是血管内膜损伤早期的重要特征性标志。     

小陷胸汤加味含药血清对人脐静脉内皮细胞分泌NO/ET-1的调节作用

目的:探讨小陷胸汤加味中药方对血管内皮细胞的保护作用。方港:建立ox-LDL损伤人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)模型,用小陷胸汤加味含药血清处理模型,并用放免和硝酸酶还原法在药物干预6h和24h后检测细胞上清液中ET-1和NO含量。结果:100 μg/ml的ox-LDL可损伤血管内皮细胞并导致其分泌NO和ET-1功能失调,小陷胸汤加味含药血清通过影响NO/ET-1的分泌而明显改善此失调状态。结论:小陷胸汤加味中药通过调节NO/ET-1水平显著拮抗ox-LDL对血管内皮细胞损害,具有防治AS的作用。