TNFα引起的微血管内皮细胞功能障碍及其分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦα)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα 引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｍＴＮＦα(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞的功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的部分分子机制。1 细胞增殖动力学　在体外培养的肺微血管内皮细胞 (ＰＭＶＥＣ)中发现 ,加入ＴＮＦ( 2 0ｎｇ/ｍＬ)后 ,细胞形态从圆形、多角形变成梭形 ,细胞的纵轴拉长 ,横轴缩小 ,…     

TNFα对血管内皮细胞的损伤作用及其分子机制

ＴＮＦα是一种重要的炎症介质。血管内皮细胞是ＴＮＦα作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα引起的血管内皮细胞损伤在很多炎症性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｒｈＴＮＦα（简称ＴＮＦ）引起大血管内皮细胞（人脐静脉内皮细胞）和微血管内皮细胞（大鼠肺微血管内皮细胞）形态、功能、代谢的损伤以及其与内皮细胞中原癌基因表达的关系,试图从中说明ＴＮＦ引起血管内皮细胞早期损伤的部分分子机制。１－细胞增殖动力学：在体外培养的大血管内皮细胞（ＨＶＥＣ,第３～４代）中发现,加入ＴＮＦ（２０～４０ｎｇｍＬ）后…     

国内微循环研究的若干进展

近年来微循环研究已深入到细胞分子水平,微血管分子医学的研究已广泛开展。本文主要环绕血管内皮细胞功能障碍的细胞分子机制、血管新生、血管平滑肌细胞病变和缺血再灌注损伤四个方面对2001年国内的主要研究进展作一综述。 1血管内皮细胞功能障碍的细胞分子机制 LPS和TNFα引起内皮细胞功能障碍的细胞分子机制是研究的重点。在研究脂多糖(LPS)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌内皮素-1(ET-1)与肾上腺髓质素(Adm)的机制时发现,LPS刺激HVEC分泌ET-1     

TNF-α引起的微血管内皮细胞功能障碍及其细胞分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦ α引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｒｈＴＮＦ α(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的表现及其部分细胞分子机制。实验是在体外培养的第二代大鼠肺微血管内皮细胞(ＲＰＭＶＥＣ ,简称内皮细胞 )中进行的。细胞经光镜、电镜的形态观察 ,ｖＷＦ免疫组化阳性 ,ＣＤ3 1免疫…     

008 抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的: 探讨NFκB以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达的作用及其机制. 方法: 通过免疫组化染色ABC法用抗内皮细胞抗体CD31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定. Griess法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映NO的生成. Northernblot结合RT-PCR分析iNOS mRNA水平. EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性. 结果: TNFα(100 U/ml)加LPS(1 ug/ml)处理内皮细胞2 h后iNOS mRNA水平明显上升(P<0.05), 24 h后能明显增加NO的生成(P<0.01). 用放线菌酮(10 mg/ml)或抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC, 0.1 mmol/L)或氮乙酰基半胱氨酸(N-acetylcystenine, NAC, 20 mmol/L)处理内皮细胞能降低TNF-α和LPS诱导的亚硝酸盐(NO)生成和iNOS mRNA表达(P<0.05). 抗氧化剂PDTC和NAC对NO诱导生成的抑制作用呈现剂量-效应关系. TNF-α(100 U/ml)加LPS(1 μg/ml)能刺激内皮细胞中NFκB的激活和转位. 当内皮细胞培养体系中加入PDTC(0.1 mmol/L)或NAC(20 mmol/L)1.5 h后这种激活作用被阻滞. 结论: ① TNF-α加LPS能够在转录或转录后水平诱导iNOS基因表达. ② TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达依赖于NFκB的激活. ③抗氧化剂能够通过抑制NFκB的激活来抑制iNOS基因的诱导表达.     

内毒素增加微血管通透性的细胞信号机制

内毒素(LPS)主要激活PMNs和内皮细胞,通过复杂的信号转导通路,引起微血管内皮细胞屏障功能和形态的损伤,使血管通透性增加,血容量下降,是导致内毒素性休克和多器官功能损害的重要原因.     

子痫前期患者胎盘上HO-2及TNF-α表达的研究

目的探讨妊娠高血压疾病子痫前期患者胎盘中HO-2及TNF-α表达及其与妊高病发病机制之间的关系。方法采用免疫组织化学方法测定24例子痫患者和24例正常妊娠妇女(对照组)胎盘中HO-2、TNF-α表达水平,并分析两者相关性。结果 1.HO-2主要表达于血管内皮细胞、平滑肌细胞胞浆及胞膜上、而滋养细胞及间质细胞中表达较少。且HO-2在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,轻度子痫前期与正常对照组相比差别无显著性,而重度子痫前期与正常对照组比较,差别有显著性。2.TNF-α主要表达于滋养细胞、血管内皮细胞胞膜中,而间质细胞内表达最少。且TNF-α在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,差别均有显著性。3.正常组、PIH组HO-2及TNF-α存在负相关关系(r=-0.536、-0.574)。结论 HO-2可能是胎盘血管内皮细胞的保护性因素,而TNF-α可能引起胎盘血管内皮细胞损伤,可导致血管调节因子失衡,两者存在负相关关系,在妊高病发病过程中起一定作用。     

TNF-α基因多态性在中国人群中的分布及其与冠心病相关性的研究进展

除单核巨噬细胞可以分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）外,心肌细胞也可以合成并分泌TNF—α,当心肌缺血时可诱导心肌细胞表达TNF—α增强。TNF-α可以直接或间接损伤血管内皮细胞,产生促炎症、促凝血、抗纤溶反应,提示其参与冠心病的发生发展过程。TNF-α基因启动子区的多态性位点影响TNF—α基因的表达,TNF—α基因在不同种族和不同地区人群间的多态性分布使冠心病在不同种族、不同地区间具有不同的发病率和临床特点。     

低温体外循环致血管内皮损伤的临床研究

目的 :探讨低温体外循环对血管内皮细胞损伤及其可能机制。方法 :用酶联免疫法测定 2 0例先天性心脏病患者围术期血浆中血管性假血友病因子 (vWF)及肿瘤坏死因子α(TNF α)的浓度 ,同时对患者血中循环内皮细胞 (CEC)进行计数及形态学观察。结果 :转流后各时相点vWF水平及CEC数较体外循环前显著升高。体外循环期间TNF α浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,停体外循环后TNF α浓度下降 ,停机后 4h浓度与转流前无明显差别。结论 :体外循环可导致血管内皮细胞激活或损伤 ,细胞因子TNF α可能参与体外循环致内皮细胞激活或损伤的过程。     

TNF-α在热疗降低胶质瘤侵袭性过程中的作用

 目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在热疗抑制肿瘤侵袭性过程中的作用。方法 热处理大鼠恶性胶质瘤细胞(C6细胞)和胶质瘤大鼠后,放射免疫法监测培养液和脑胶质瘤组织内TNF-α的浓度;免疫组化法检测经热疗/ TNF-α/生理盐水处理过的胶质瘤组织内增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。利用Transwell构建肿瘤侵袭模型,通过结晶紫染色法检测肿瘤侵袭性。电镜观察C6恶性胶质瘤大鼠肿瘤血管内皮细胞的凋亡。结果 热疗可增加C6细胞培养液和胶质瘤大鼠肿瘤组织内的TNF-α含量及降低胶质瘤侵袭性,均于热疗后120min时达高峰(P＜0.01)。热疗与TNF-α单独作用于胶质瘤大鼠后,均可引起胶质瘤大鼠肿瘤血管内皮细胞的凋亡。且TNF-α引起内皮细胞的凋亡水平与热处理后C6细胞培养液中TNF-α含量一致。结论 热疗可能是通过增加TNF-α引起肿瘤血管内皮细胞凋亡而抑制了肿瘤侵袭性。     

卡巴胆碱抑制肿瘤坏死因子所致微血管内皮细胞通透性增高

目的探讨卡巴胆碱对肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的增加微血管通透性的作用。方法采用FITC标记白蛋白漏出法、考马斯亮蓝染色法观察卡巴胆碱对TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性，细胞形态和细胞骨架变化的影响。结果与对照组比较，TNF-α明显增加微血管内皮细胞通透性（P〈0．05），诱导细胞皱缩，细胞间隙增大和细胞骨架排列紊乱。给予卡巴胆碱可以明显抑制TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性增加，并呈剂量依赖性，同时可以使细胞间隙明显减小，细胞骨架排列有序。结论卡巴胆碱可能通过抑制TNF-α对细胞骨架的损伤，进而抑制微血管通透性增加。     

CRRT治疗MODS患者血清对体外培养血管内皮细胞分泌TF及PAI-1的影响

目的: 研究连续性肾脏替代治疗(CRRT)过程中多器官功能障碍综合征(MODS)患者血清对体外培养血管内皮细胞分泌组织因子(TF)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响.方法: 16例MODS患者随机分为两组, 一组给予无肝素CRRT治疗, 另一组给予普通肝素抗凝的CRRT治疗.观察患者行CRRT治疗8h过程中的变化, 在治疗0 min、 15 min、 1 h、 2 h、 8 h时分别留取血样5 mL.ELISA法检测患者血清TNF-α、 IL-1β水平.观察CRRT治疗不同时间点血清对内皮细胞分泌TF及PAI-1蛋白水平的影响, RT-PCR法检测TF及PAI-1mRNA水平的表达.结果: MODS患者血清可明显增加体外培养血管内皮细胞TF及PAI-1的分泌, 经CRRT治疗后, 患者血清对内皮细胞分泌TF及PAI-1的影响逐步减小.无肝素组内皮细胞分泌TF及PAI-1蛋白水平与相应干预血清TNFα水平均呈正相关, 相关系数分别为0.902, 0.939(P＜0.05);肝素组内皮细胞分泌TF及PAI-1水平与相应干预血清TNFα水平均无相关性(P＞0.05).结论: MODS患者血清促进内皮细胞分泌TF及PAI-1, 内皮细胞功能明显异常, 可能与炎症介质有关.CRRT治疗可清除血液中激活/损伤内皮细胞的成分, 改善患者内皮细胞功能.     

TNFα对微血管内皮细胞的损伤作用及其分子机制(摘要)

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的。ＴＮＦα（简称ＴＮＦ）引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞早期损伤的部分分子机制。 １细胞增殖动力学在体外培养的肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）中发现,加入 ＴＮＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）后,细胞形态从圆形、多角形变成梭形,细胞的纵轴拉长,横轴缩小。此种变化从培养６ｈ开始,７２ｈ最显。光镜下未见明显细胞损伤表现,电镜下（透射电镜及扫描电镜）细胞器无明显改变,但见内皮细胞表面微绒毛减少。当ＴＮＦ的浓度增高到４０ｎｇ／ｍｌ以上,将其与ＰＭＶＥＣ共同孵育培养７２ｈ后,ＴＮＦ组内皮细胞总数比对照组（ＰＢＳ组）显著减少（５．２３ ±０．５０减到４．３０±０．３４,Ｐ＜０．０１）。用流式细胞仪分析细胞增殖周期发现,ＴＮＦ组处于Ｇ_１期的细胞明显增多,Ｓ期和Ｍ期的细胞明显减少（Ｐ＜０．０５）。结果提示,高浓度ＴＮＦ抑制内皮细胞增生,使细胞分裂延缓。 ２ ＰＧＩ_２和ｔ－ＰＡ前列腺素Ｐ     

TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞的损伤作用。方法 :将培养的内皮细胞分为对照组和实验组 ,实验组培养液中含有TNFα(4× 10 5U/L) ;通过普通光镜、扫描电镜、透射电镜观察TNFα对内皮细胞形态和超微结构的影响 ,并运用免疫组化染色来观察TNFα对内皮细胞表达细胞间粘附分子 (ICAM 1)的影响。结果 :(1)光镜、电镜观察结果显示 :实验组内皮细胞拉长 ,由原来的多边形变为成纤维状 ,细胞间距不均且变大 ;微绒毛变短甚至呈泡状 ,个别拉长 ,有些部位细胞膜有缺损以及内质网扩张、线粒体凝聚等改变。并且这些改变有时间依赖性。 (2 )实验组内皮细胞ICAM 1表达明显增强。结论 :TNFα(4× 10 5U/L)对内皮细胞有明显的损伤作用     

妊高征胎盘、脐血管中TNF-α表达及组织病理变化的研究

目的研究妊高征患者胎盘和脐血管组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达及组织的病理变化情况.方法采用SABC法对轻、中、重度妊高征共27例和正常妊娠组10例的胎盘和脐血管组织进行TNF-α的免疫组化染色,观察各组TNF-α的定位、分布和表达量的差异.同时常规HE染色观察胎盘等形态学变化.结果各组均可见TNF的表达,其定位和分布无差异,主要见于合体滋养细胞、蜕膜细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞等.但中、重度妊高征组TNF的表达量较正常组显著升高(P<0.05,P<0.01).此外,中、重度妊高征组可见细胞滋养细胞增生,合体细胞结节、纤维素样坏死显著增多等病理变化,与正常组相比有显著性差异.结论妊高征时,胎盘、脐血管亦可能是TNF-α的重要产生释放部位.且TNF-α可能通过某些直接或间接的途径,参与了妊高征损伤和代偿并存的复杂变化,在妊高征的发生发展中起着重要作用.     

不同剂量TNF-α对Nrf2转录调节活性的影响

目的:研究不同剂量肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺微血管内皮细胞NF-E2相关因子2(Nrf2)转录调节活性的影响。方法:肺组织块贴壁法培养大鼠肺微血管内皮细胞,Ⅷ因子相关抗原间接免疫荧光鉴定所培养的细胞。采用含有0μg/L、2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L和40μg/LTNF-α的无血清培养基处理肺微血管内皮细胞4h后,以免疫细胞化学技术观察细胞内Nrf2的亚定位及含量的变化;提取细胞核蛋白和总RNA,以变动迁移率分析技术检测Nrf2转录调节活性的变化以及采用RT-PCR技术检测细胞Nrf2 mRNA表达水平的变化。结果:采用2.5、5.0、10.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平和Nrf2转录调节活性随浓度的增加而呈现上升趋势;而采用20.0μg/L、40.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平及其转录调节活性有所下降;不同剂量TNF-α对细胞Nrf2基因转录水平没有明显影响。结论:不同剂量TNF-α对肺微血管内皮细胞Nrf2转录调节活性产生不同影响:中、低剂量TNF-α增强Nrf2转录调节活性,而大剂量TNF-α引起Nrf2转录调节活性下降。     

旁路活化补体协同TNF-α对血管内皮细胞ICAM-1表达和粘附作用的影响

目的 :探讨旁路活化补体协同TNF -α对血管内皮细胞ICAM - 1表达及中性粒细胞 -内皮细胞(PMN -EC)粘附的影响。方法 :采用酵母多糖活化人血清 (ZAHS)单独、和TNF -α协同作用于体外培养的内皮细胞单层 ,用直接细胞计数和改良细胞ELISA方法检测中性粒细胞 -内皮细胞粘附率的变化和细胞间粘附分子 (ICAM -1)的表达。结果 :旁路活化补体单独作用于内皮细胞对PMN -EC粘附和ICAM - 1的表达仅有轻微影响 ;和 4 0 μg/L的TNF -α共同作用可以明显促进PMN -EC粘附率和ICAM - 1的表达。结论 :旁路活化补体对TNF -α诱导的PMN-EC粘附及ICAM - 1的表达具有促进作用 ,从而引起炎症反应     

双重特异性磷酸酶5介导地塞米松对血管内皮细胞炎症反应的抑制作用

<正>目的:探讨双重特异性磷酸酶5(dual specificity phosphatase 5,DUSP5)在糖皮质激素抑制血管内皮细胞炎症反应中的作用。方法:体外培养人血管内皮细胞,观察糖皮质激素受体激动剂地塞米松对内皮细胞DUSP5表达的影响;运用siRNA技术降低内皮细胞中DUSP5的表达,观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)刺激引起的炎性因子和黏附分子表     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨NFκB在大鼠肺微血管内皮细胞iNOS基因诱导表达中的作用及抗氧化剂对内皮细胞iNOS诱导表达的影响及其机制。方法 :Griess法测定细胞培养上清液NO-2 水平以反映NO的生成 ,Northern印迹分析iNOSmRNA水平 ,EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性。结果 :抗氧化剂可阻断内皮细胞培养体系LPS和TNFα诱导的NO生成及iNOSmRNA的表达 ;LPS和TNFα可诱导大鼠肺微血管内皮细胞NFκB的激活并可被抗氧化剂阻断。结论 :LPS和TNFα诱导的内皮细胞iNOS基因表达依赖于NFκB的激活 ;抗氧化剂可通过抑制NFκB的活化而阻断iNOS基因的诱导表达