环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ_1基因表达的调控初探

目的 :探讨环核苷酸 (ｃＡＭＰ/ｃＧＭＰ)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)与转化生长因子 β1基因表达调节中的作用 ,为心肌肥大的防治提供一定的理论依据。方法 :将Ｗｉｓｔａｒ乳鼠无血清培养 2 4ｈ的细胞分为对照组、ｃＡＭＰ组 ( 8-Ｂｒｏｍｏ -ｃＡＭＰ 0 .1ｍｍｏｌ/Ｌ)、ｃＧＭＰ组 [加入一氧化氮 (ＮＯ)的供体 -硝普钠 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,借此升高心肌细胞内ｃＧＭＰ浓度 ],并在 30ｍｉｎ、3ｈ、2 4ｈ、48ｈ、72ｈ等 5个时相点检测如下指标 :( 1 )细胞生长代谢活性 (ＭＴＴ法 ) ;( 2 )ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ1 的ｍＲＮＡ表达 …     

环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ_1基因表达的调控初探

目的 :探讨环核苷酸 (ｃＡＭＰ/ｃＧＭＰ)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)与转化生长因子 β1基因表达调节中的作用 ,为心肌肥大的防治提供一定的理论依据。方法 :将Ｗｉｓｔａｒ乳鼠无血清培养 2 4ｈ的心肌细胞分为对照组、ｃＡＭＰ组 (8 ＢｒｏｍｏｃＡＭＰ 0 .1ｍｍｏｌ/Ｌ)、ｃＧＭＰ组 [加入一氧化氮 (ＮＯ)的供体硝普钠 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,借此升高心肌细胞内ｃＧＭＰ浓度 ],并在 30ｍｉｎ、3ｈ、2 4ｈ、48ｈ、72ｈ等 5个时相点检测如下指标 :(1)细胞生长代谢活性 (ＭＴＴ法 ) ;(2 )ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ1的ｍＲＮＡ表达 (原位…     

超声微泡介导转染FKBP12.6基因对小鼠H9c2(2-1)心肌细胞中Ca2+浓度的影响

目的:探讨超声微泡介导转染FKBP12.6基因后,对小鼠H9c2(2-1)心肌细胞中Ca2 浓度的影响。方法:将pcDNA3.1-FKBP12.6质粒与白蛋白包裹微泡造影剂混合,经超声转染H9c2(2-1)细胞后,通过倒置显微镜观察心肌细胞生长状况的变化;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 浓度的变化;免疫组织化学方法检测FKBP12.6蛋白的表达。结果:超声触发微泡破裂转染的FKBP12.6基因可在心肌细胞高效表达,细胞生长良好。高表达FKBP12.6的心肌细胞中,总的钙离子浓度增加。结论:超声微泡介导FKBP12.6基因转染心肌细胞,可以明显增加心肌细胞中的Ca2 浓度,心肌细胞的收缩能力增强。     

轮状病毒NSP486-175蛋白对大鼠心肌细胞损伤作用及相关机制研究

目的研究轮状病毒非结构蛋白4的86～175位氨基酸肽段(NSP486-175)对大鼠心肌细胞损伤作用及其相关机制。方法利用前期制备好的活性NSP486-175蛋白处理大鼠H9C2心肌细胞, 观察处理后的细胞生长形态变化, 检测细胞培养液中LDH活性;Fluo-3AM标记细胞内游离的钙离子, 蛋白质处理细胞后, 用激光共聚焦显微镜检测大鼠心肌细胞内钙离子浓度变化。流式细胞术分析蛋白质对细胞凋亡的影响, RT-PCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、78 kDa葡萄糖调控蛋白(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12 mRNA转录水平;Western blot检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达水平。结果正常生长的心肌细胞呈典型的成肌样细胞形态, 细胞呈梭形, 边界清晰。纯化的NSP486-175蛋白刺激后出现明显的细胞病变效应, 细胞空泡变性, 皱缩变圆, 细胞碎裂;蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增高;与对照组相比, NSP486-175处理组细胞的钙离子荧光增强, ...     

儿童T细胞活化时细胞内钙离子的变化

本文用钙指示剂Ｆｌｕｏ－３标记正常儿童外周血单个核细胞，经流式细胞仪分析了几种激活剂对Ｔ细胞内钙离子浓度的影响。结果表明：（１）静止期Ｔ细胞内钙离子浓度为１６２±８７ｎＭ，抗ＣＤ３单克隆抗体交联ＧＡＭＩｇ刺激后，Ｔ细胞内钙离子浓度上升；（２）用抗ＣＤ３单克隆抗体和ＩＬ－２或ＰＭＡ和ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ作用Ｔ细胞，细胞内钙离子浓度上升，但其浓度低于用抗ＣＤ３单克隆抗体交联ＧＡＭＩｇ刺激时的浓度；（３）去除抗ＣＤ３单克隆抗体和ＩＬ－２或ＰＭＡ和ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ对Ｔ细胞的作用，培养后细胞内钙离子浓度又恢复到静止状态，再加入抗ＣＤ３单克隆抗体交联ＧＡＭＩｇ刺激发现细胞内钙离子显著地升高；（４）钙离子阻断测定提示早期钙离子升高是Ｔ细胞内钙离子池释放的，而细胞外钙离子的流入对于维持钙离子持续上升是必要的。     

钙信号早期干预对大鼠心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶信号途径及细胞凋亡的影响

通过建立肥大心肌细胞模型，研究钙通道阻滞剂对心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶II （calcium/calmodulin-dependent protein kinase II，CaMKII）的表达及钙离子浓度的变化对钙泵、ATP凋亡信号调节激酶（apoptosis signal-regulation kinase1 ASK1）、细胞活力及细胞凋亡率的影响，深入了解钙离子拮抗剂在心肌细胞肥大过程中的作用。通过早期应用钙离子拮抗剂，可以明显改善CaMKII信号系统的活性，保持心肌细胞内钙稳态，抑制心肌细胞的凋亡。     

不同参数次声对心肌细胞钙离子的影响

目的：观察不同参数次声对大鼠心肌 细胞钙离子浓度的影响。方法：用8 Hz的90、130 dB次声分别作用于大 鼠1、7、14、21和28 d，每日2 h，观察大鼠心肌细胞钙离子浓度的变化。结果:与对照组比较，次声作用组大鼠心肌细胞钙离子浓度随时间延长及声压级水平升高 而逐渐增加（P<0.01）。结论：次声可引起大鼠心肌细胞钙离子浓 度的变化，其变化与次声暴露参数有关。     

参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响

目的：观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。 方法： 采用原代培养的大鼠心肌细胞，通过化学缺氧法使细胞缺氧5 min，再恢复氧供应15 min，复制心肌细胞缺氧-复氧（anoxia-reoxygenation, A/R）模型。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡百分率；Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子水平。 结果： A/R组心肌细胞凋亡百分率明显高于正常组，细胞内平均钙离子荧光强度也显著强于正常组（P<0.01）。参麦注射液组细胞凋亡率显著小于A/R组，同时细胞内钙超载也明显轻于A/R组（P<0.01）。 结论： 参麦注射液能有效抑制缺氧-复氧心肌细胞的凋亡，这种保护作用的机制之一可能是通过减轻细胞内Ca2+超负荷实现的。     

超声微泡介导转染FKBP12．6基因对小鼠n9c2（2—1）心肌细胞中Ca^2＋浓度的影响

目的：探讨超声微泡介导转染FKBP12．6基因后，对小鼠H9c2（2-1）心肌细胞中Ca^2＋浓度的影响。方法：将pcDNA3．1-FKBP12．6质粒与白蛋白包裹微泡造影剂混合，经超声转染H9c2（2-1）细胞后，通过倒置显微镜观察心肌细胞生长状况的变化；激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^2＋浓度的变化；免疫组织化学方法检测FKBP12．6蛋白的表达。结果：超声触发微泡破裂转染的FKBP12．6基因可在心肌细胞高效表达，细胞生长良好。高表达FKBP12．6的心肌细胞中，总的钙离子浓度增加。结论：超声微泡介导FKBP12．6基因转染心肌细胞，可以明显增加心肌细胞中的Ca^2＋浓度，心肌细胞的收缩能力增强。     

淫羊藿苷对缺血/再灌致神经元损伤的保护作用研究

目的 :观察淫羊藿苷对体外模拟缺血 /再灌致神经元损伤的保护作用 ,初步探讨其可能的作用机制。方法 :原代培养大鼠乳鼠大脑皮层神经元 ,分别在缺氧和缺糖 (6h) /再复氧和复糖培养后不同时间点 (0、3、1 2、2 4h)检测细胞活度、LDH活性、细胞凋亡率和细胞内游离钙离子浓度。结果 :淫羊藿苷 0 .2 5、0 .5和1mg·L 1明显减轻缺氧和缺糖 /复氧和复糖致神经细胞损伤 ,提高神经元MTT值 ,减少乳酸脱氢酶释放 ,减少凋亡和抑制细胞内游离钙离子浓度的升高。结论 :淫羊藿苷具有保护神经元抵抗模拟缺血性损伤的作用 ;其阻止细胞内钙离子超载可能是…     

联合成像系统研究心肌细胞微区力学及细胞内钙离子变化

目的 使用联合成像系统在亚细胞水平研究心肌细胞微区力学性质及细胞内钙离子的快速变化,并探讨两者之间的关系.方法 应用原子力显微镜(AFM)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)组合成的联合成像系统对急性分离的大鼠单个心室肌细胞微区力进行检测,同时测定细胞内钙离子浓度的变化,分析细胞微区力和细胞内钙离子浓度变化两者之间的相关性.结果 观察到心肌细胞内钙离子浓度的快速变化引起了钙波的传递.通过AFM微悬臂的偏转可以计算出细胞微区力,细胞微区力的大小与细胞内钙离子浓度呈正相关(r=0.701,P=0.003).结论 联合成像系统可以同步研究心肌细胞微区力学及细胞内分子快速变化,进而在亚细胞水平研究心脏疾病的发病机制.     

硫化氢及硫化氢与细胞内钙离子关系的研究概况

硫化氢作为一种新型的气体信号分子,广泛参与机体各个系统的生理活动。硫化氢能够通过改变细胞内钙离子的浓度对细胞的功能状态产生一定影响。表皮细胞内存在胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合酶体系,烧伤应激会抑制大鼠表皮细胞内硫化氢/胱硫酶-γ-裂解酶体系功能,使硫化氢生成减少。严重烧伤应激使多种脏器出现功能障碍,同时再灌注损伤促使机体产生大量氧自由基。各种酶类的激活、炎性因子的释放可加重细胞的水肿,在细胞内发生钙离子超载。因此研究硫化氢对于表皮细胞的作用机制,进一步探究硫化氢在表皮细胞内是否通过钙离子介导信号转导途径具有重要意义。本文对现有国内外关于硫化氢及硫化氢与细胞内钙离子关系的研究进行总结,旨在丰富硫化氢功能研究的理论基础,研究硫化氢与胞内钙离子浓度的相关性从而探讨钙离子是否在硫化氢胞内的信号通路中发挥一定的作用。     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

钙离子对重组创伤弧菌溶细胞素诱导THP-1细胞损伤的影响机制

目的 研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)诱导人单核细胞白血病细胞(THP-1)的凋亡机制及其Ca2+的变化.方法 采用CCK-8法、激光共聚焦显微镜结合Fluo 3/AM法、流式细胞术结合AnnexinV -PI标记等检测rVvhA对THP-1细胞的影响,并观察胞内Ca2+浓度变化.结 果rVvhA可诱导THP-1细胞发生凋亡并引起细胞内Ca2+浓度升高,细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM处理组胞内钙离子升高幅度远高于细胞外钙离子螯合剂EGTA处理组.结论 rVvhA具有诱导THP-1细胞凋亡的生物学活性,并能引起细胞内Ca2+浓度升高,升高的Ca2+主要源于胞外钙离子内流.     

淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响及其机制研究

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ与刀豆素A(Concanavalin A,ConA)体外处理小鼠脾淋巴细胞,观察淫羊藿次苷Ⅱ对细胞增殖的影响,初步确定其发挥作用的最佳浓度;然后以最佳浓度淫羊藿次苷Ⅱ在不同时间点与ConA协同处理细胞,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测增殖能力;运用流式细胞仪检测细胞周期分布;用荧光定量分析仪检测细胞内游离Ca2+浓度的变化。结果:淫羊藿次苷Ⅱ在10-12～10-9mol/L的浓度范围作用48小时,对细胞增殖有一定的促进作用,呈浓度依赖性。在10-7～10-4mol/L范围出现抑制作用。以10-9mol/L的淫羊藿次苷Ⅱ处理细胞,发现其与ConA在不同时间点促进细胞增殖作用显著优于ConA单独应用;并且促进细胞由G0/G1期进入S与G2/M期,并以第24小时效果更明显;促进细胞内Ca2+浓度升高,效果以第12小时最明显。结论:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞增殖具有促进作用,有浓度、时间依赖性,这种促增殖作用的机制可能与升高细胞内Ca2+浓度,进而加快细胞由G0/G1期进入S与G2/M期有关。     

TNFα，LPS，oxLDL和AngⅡ诱导U937细胞PDGF-B基因转录

在动脉粥样硬化等重要血管疾病的发生过程中 ,内皮细胞与循环血细胞之间的相互作用无疑起着关键的作用。许多致病因素除对内皮细胞直接作用外 ,还可通过作用于循环血细胞而引起放大效应。血小板源生长因子Ｂ链基因 (ＰＤＧＦ -Ｂ)是普遍存在的促有丝分裂剂 ,与动脉粥样硬化关系密切。我室前期工作观察到ＴＮＦ -α等可刺激内皮细胞ＰＤＧＦ -Ｂ基因表达。目的 :观察心血管疾病相关因素对Ｕ937单核细胞中ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及ＰＫＣ与ＭＡＰＫ通路可能参与的调节作用。方法 :培养的Ｕ937细胞以 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦ ,1 0 0ｎｇ/ｍＬ…     

重组人EGF对培养的角膜缘上皮细胞增殖的影响

本实验采用重组人ＥＧＦ作用于体外培养原代生长的角膜织上皮细胞，观察重组人ＥＧＦ对细胞生长的影响，记录细胞生长曲线、集落形成率，并用ＭＴＴ法测定细胞增殖状况。结果表明：在合适的ＥＧＦ浓度作用下，细胞有丝分裂增强，细胞生长明显加快。在各浓度以１０ｎｇ／ｍＬ组对细胞作用最为明显。     

cAMP,cGMP在大鼠心肌细胞bFGF基因表达调节中的 …

目的：研究ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ在心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达调节中的作用。方法：分离培养大鼠心肌细胞，加入８－溴－ｃＡＭＰ的硝普钠，升高细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度，用原位杂交及免疫细胞化学的方法观察细胞内ｂＦＧＦ的表达，图象分析检测ｂＦＧＦ表达量的变化。结果：在培养中加８－溴－ｃＡＭＰ的心肌细胞，２４ｈ时ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ及蛋白表达均明显高于对照组，４８ｈ、７２ｈ仍然较强表达     

脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞株耐受与致敏并存的研究

目的 :全身炎症反应综合征 (ＳＩＲＳ)和多器官衰竭 (ＭＯＤＳ)时血中出现多种炎症介质 ,一般认为这是白细胞致敏 (ｐｒｉｍｅｄ)的结果。我们用巨噬细胞株作为研究对象 ,建立了代表单克隆细胞水平耐受与致敏并存的细胞模型 ,并对其机制做了初步探讨。方法 :巨噬细胞株ＲＡＷ 2 64.7以不同刺激作用后测上清中ＴＮＦ -α(Ｌ92 9杀伤活性 )、ＮＯ(Ｇｒｉｅｓｓ反应 )、ＩＬ - 1 (胸腺细胞增殖 ,ＭＴＴ法 )和细胞内游离浓度 ( [Ｃａ2 ]ｉ,用荧光显微镜成像系统 ,Ｆｒｕａ- 2负载 )。结果至少重复 6次。结果及结论 :1 0ｎｇ/ｍＬＬＰＳ预处理 (…     

子痫前期血清通过PLCγ1-IP3R信息途径促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子聚集

目的探讨子痫前期血清对脐动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响以及磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）-三磷酸肌醇受体（IP3R）信息途径对其的调控作用。方法体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,子痫前期血清处理共培养细胞,MTT检测平滑肌细胞活力,Western blot检测PLc—γ1（磷酸化）、三磷酸肌醇受体（IP3R）活性,Fluo-3／AM检测平滑肌细胞内钙离子浓度,PLC-γ1siRNA沉默平滑肌细胞PLC-γ1表达后,观察子痫前期血清对共培养平滑肌细胞IP3R及细胞内钙离子浓度变化的影响。结果子痫前期血清可促进共培养平滑肌细胞PLC-γ1、IP3R磷酸化及钙离子浓度,平滑肌细胞PLC-γ1沉默可逆转子痫前期血清引起的共培养平滑肌细胞内IP3R活性及细胞内钙离子增加。结论子痫前期血清通过PLC—γ1-IP3R信息通路促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子增加,PLC-γ1-IP3R激活引起平滑肌细胞内钙离子增加可能在子痫前期血管平滑肌细胞病理过程中起重要作用。