双价痢疾菌苗株免疫小鼠后GALT中ASC的观测

为了观测两株菌苗ＦＳＭ－２１１７（Ｉｐａ－）、ＦＳ－５４１６（Ｉｐａ＋）免疫后所引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的免疫反应，以小鼠灌胃免疫为模型，应用ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法检测了ＧＡＬＴ中诱导部位派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）和抗原特异性抗体分泌细胞（ＡＳＣ），发现两菌苗株免疫小鼠后，ＰＰ结、ＭＬＮ中福氏、宋内氏抗原ＳＩｇＡ、ＩｇＧ抗体分泌细胞明显增加，尤以ＳＩｇＡ－ＡＳＣ为甚。株间差别无统计学意义。两株菌苗与对照组相比，都具有显著性差别     

痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答

目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～７和４×１０～７ＣＦＵ／只滴鼻跟 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４次涧隔两 ｗｂ。分离鼻相关淋巴组织（ＮＡＬＴ）、鼻通道（ＮＰ）及脾、小肠的ＰＰ结淋巴细胞。一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化；另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养，于不同时间点取出，提取ＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ。结果两株菌苗经鼻内免疫后，ＮＡＬ、ＮＰ和ＰＰ结的淋巴细胞中ＣＤ３Ｔ细胞显著增加，其中以ＣＤ４＋Ｔ细胞增加为主。ＴＳＭ－２１１７株免疫组的脾细胞中，Ｂ２２０＋细胞显著增加；而ＦＳ－５４１６株免疫组的脾细胞中，ＣＤ３＋Ｔ细胞显著增加。免疫小鼠的ＮＡＬＴ、ＮＰ和ＰＰ结淋巴细胞，在体外经抗原刺激后，均在不同时间出现ＩＦＮ－γ和ＩＬ-４ｍＲＮＡ的表达，ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ的表达在免疫前后无明显变化。结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫，可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生。     

Th1和Th2细胞在痢疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答 …

目的 在初步了解ＣＤ４＾＋细胞参与痢疾疫苗诱导小鼠肠粘膜免疫应答的基础上，从细胞及分子水平进一步探索Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞在小鼠肠粘膜对痢疾疫苗免疫应答中的调节作用。方法 以本室构建的福氏２ａ及宋内氏双价痢疾疫苗株ＦＳ－２１１７或ＦＳ－５４１６灌胃免疫小鼠，从细胞表型及几种细胞因子ｍＲＮＡ表达水平两方面观察小鼠肠粘膜中Ｐａｙｅｒ氏结（Ｐｅｙｅｒ’ｓ ｐａｔｃｈ，ＰＰ）及肠系膜巴结等免疫诱导部位Ｔｈ１和     

痢疾菌侵袭性质粒抗原（Ipa）及O抗原与侵入细胞能力的…

采用痢疾菌Ｉｐａ＾＋Ｏａｇ＾－，Ｉｐａ＾－Ｏａｇ＾＋及Ｉｐａ＾＋Ｏａｇ＾＋等三种不同的菌株分别进行了毒力及毒力相关表型实验。结果发现，Ｉｐａ＾＋ＯａＧ＾－株Ｓ１Ｒ１０１／ｐＨＳ４１０８与Ｉｐａ＾＋Ｏａｇ＾＋株ＢＳ１６９／ｐＨＳ４１０８都有侵入ＨｅｌＡ细胞的能力，而Ｉｐａ＾－Ｏａｇ＾＋株Ｔ３２则无侵入ＨｅＬａ细胞的能力，只表达多肽ａ、ｃ、ｄ的菌株Ｓ１Ｒ１０２／ｐＪＭ５６亦不能侵入ＨｅＬａ细胞。从而证     

CD4+T细胞在痢疾疫苗诱导小鼠肠粘膜免疫应答中的作用

以本室构建的双价痢疾候选疫苗株ＦＳ５４１６ 作为口服免疫原,检测了小鼠ＰＰ 结（Ｐｅｙｅｒ ,ｓ ｐａｔｃｈｅｓ） 中Ｔ 淋巴细胞的体外增殖反应, 观察了腹腔注射抗Ｌ３Ｔ４ ｍ Ａｂ 对小鼠肠粘膜部位产生特异性Ｉｇ 分泌细胞的影响。结果表明：①小鼠口服免疫后,ＰＰ 结中的ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞可产生明显的特异性增殖反应：②选择性地删除ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞后,小鼠肠粘膜无抗原特异性Ｉｇ 分泌细胞产生。以上提示,小鼠肠粘膜对痢疾疫苗的免疫应答需要ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞的参与。     

痢疾菌侵袭性质粒抗原（Ipa）及O抗原与侵入细胞能力的关系研究

采用痢疾菌Ｉｐａ＋Ｏａｇ－，ＩｐａＯａｇ＋及Ｉｐａ＋Ｏａｇ＋等三种不同的菌株分别进行了毒力及毒力相关表型实验。结果发现，Ｉｐａ＋ＯａＧ－株Ｓ１Ｒ１０１／ｐＨＳ４１０８与Ｉｐａ＋Ｏａｇ＋株ＢＳ１６９／ｐＨＳ４１０８都有侵入ＨｅＬａ细胞的能力，而Ｉｐａ－Ｏａｇ＋株Ｔ３２则无侵入ＨｅＬａ细胞的能力，只表达多肽ａ、ｅ、ｄ的菌株Ｓ１Ｒ１０２／ｐＪＭ５６亦不能侵入ＨｅＬａ细胞。从而证明，侵袭性质粒抗原（Ｉｐａ）对于细菌侵入ＨｅＬａ细胞则是足够的，其中多肽ｂ起关键性作用，而Ｏ抗原并不参与侵入过程或不成为其必要的前提条件。     

痢疾杆菌口服免疫小鼠肠道相关淋巴组织中CD45R^＋和CD45RB^＋…

为了解肠道相关淋巴细胞（ＧＡＬＴ）对痢疾杆菌口服免疫的应答状况，分离了Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｅｒｉ四次免疫后Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾（ＳＰ），肠系膜淋巴结（ＭＬＮ），Ｐｅｙｅｒ’ｓ结（ＰＰ），固有膜（ＬＰ）和上皮内（ＩＥ）淋巴细胞，对末次免疫后１～３ｄ内免疫组与对照组ＧＡＬＴ中的ＣＤ４５Ｒ＾＋和ＣＤ４５ＲＢ＾＋细胞群作了ＦＣＳ分析，结果免疫后起动７ｄＩＥ和ＬＰＣＤ４５Ｒ＾＋细胞增加而ＭＬＮ和ＰＰＣＤ４     

双价痢疾菌苗免疫小鼠后抗体记忆反应的观测

目的：FSM－2117和FS－5416是我室构建的具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株,前者不表达侵袭蛋白,无侵袭力,而后者表达侵袭蛋白（Ipa）,具有侵袭力。拟观测两株菌苗FSM－2117（Ipa^-）、FS－5416（Ipa^ ）免疫后所引起的肠粘膜局部和系统中的免疫记忆反应,为研制痢疾菌苗提供理论依据。方法：以小鼠灌胃免疫为模型,3次免疫后,间隔3个月再次免疫,第7天取血清和小肠冲洗液,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果：两菌苗株免疫组,血清中局部抗原特异性sIgA、IgG抗体明显升高。两株菌苗与对照组相比,都具有显著差异。结论：两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后,可产生一定的记忆反应。     

双价痢疾候选疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答机制的初步研究

目的探讨痢疾疫苗诱导粘膜产生免疫应答的调节机制，为研制安全有效的痢疾疫苗提供免疫学的理论依据。方法以本室构建的两株福氏２ａ、宋内氏双价痢疾候选疫苗ＦＳ－２１１７与ＦＳ－５４１６经不同途径免疫小鼠，分离小鼠ＰＰ结（Ｐｅｙｅｒｓｐａｔｃｈｅｓ）与脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞并以ＭＴＴ法检测其对疫苗不同抗原成分的增殖反应。结果（１）口服痢疾疫苗可诱导ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，而未对脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生刺激作用；（２）皮下注射痢疾疫苗能使小鼠脾脏中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生显著的增殖反应，但未见ＰＰ结中的ＣＤ４＋Ｔ细胞产生明显的免疫应答；（３）痢疾疫苗可能有多种抗原成分参与了刺激肠粘膜ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的增殖反应。结论口服痢疾候选疫苗可有效地诱导肠道粘膜产生免疫应答；免疫应答的产生可能依赖多种抗原成分的共同作用。ＰＰ结中ＣＤ４＋Ｔ细胞的特异性活化可能是诱导肠道粘膜免疫应答最重要的早期事件。     

HD,NHL及MM患者PBMC的CD和HLA表达

本文采用间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测霍奇金病（ＨＤ）,非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）,多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者ＰＢＭＣ－ＨＬＡ－ＤＲ＾＋、－ＤＱ＾＋、－ＤＰ＾＋及ＣＤ＾＋Ｔ细胞表型,以了解这些患者Ｔ细胞被选择性活化的差异性。     

人正常骨髓CD34^＋造血细胞体外扩增形成粒单系造血祖细胞 …

ＣＤ３４＾＋造血细胞以其独特的生物学功能正成为造血调控，造血干细胞移植和基因治疗最理想的靶细胞本文探讨人正常骨髓ＣＤ３４＾＋造血细胞在体外扩增形成单个核细胞（ＭＮＣ）及粒单系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的能力，采用ＣＩＭＳ－１００新型免疫磁性无菌分离术可获得纯度〉９０％的ＣＤ３４＾＋造血细胞，其直接形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力要较骨髓ＭＮＣ提高６５倍，并有在含ＥＧＩＩＳ组合造血生长因子的无基质液培养系统     

TH1和TH2细胞在痢疾疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答中的调节作用

目的　在初步了解ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞参与痢疾疫苗诱导小鼠肠粘膜免疫应答的基础上,从细胞及分子水平进一步探索ＴＨ１ 和ＴＨ２ 细胞在小鼠肠粘膜对痢疾疫苗免疫应答中的调节作用。方法　以本室构建的福氏２ａ 及宋内氏双价痢疾疫苗株ＦＳ２１１７ 或ＦＳ５４１６ 灌胃免疫小鼠,从细胞表型及几种细胞因子ｍ ＲＮＡ 表达水平两方面观察小鼠肠粘膜中Ｐａｙｅｒ 氏结（ Ｐｅｙｅｒ’ｓ ｐａｔｃｈ , ＰＰ） 及肠系膜淋巴结等免疫诱导部位ＴＨ１ 和ＴＨ２ 细胞的动态变化规律。结果　（１） 痢疾疫苗灌胃免疫后早期,小鼠肠粘膜的免疫诱导部位表现为ＴＨ１ 型细胞亚群百分率的显著降低;免疫后晚期ＴＨ１ 型细胞亚群百分率则显著升高,且高于未免疫的正常小鼠。（２） 痢疾疫苗免疫后从小鼠ＰＰ 中分离的ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞,在特异性痢疾疫苗抗原刺激下,先出现ＩＬ５ 、ＩＬ６ 的高表达,后出现ＩＦＮγ、ＩＬ２ 的高表达。结论　痢疾疫苗免疫后小鼠肠粘膜免疫的诱导部位早期表现为ＴＨ２ 型细胞亚群的优势活化,晚期逆转为ＴＨ１ 型细胞亚群的优势活化。     

雷公藤抑制致敏小鼠CD4^＋T细胞核因子GATA3,NFAT的活性

目的 探讨致敏小鼠ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核转录因子ＧＡＴＡ３、ＮＦＡＴ活性的变化及雷公藤内酯醇（ＴＰ）的作用。方法 采用卵蛋白（ＯＶＡ）致敏的方法建立模型；运用ｐａｎｎｉｎｇ法分离ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞；通过凝胶电泳迁移率实验（ＥＭＳＡ）对ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核因子ＧＡＴＡ３、ＮＦＡＴ的ＤＮＡ结合活性及ＴＰ的作用进行检测，同时就ＴＰ的作用与地塞米松（ＤＭ）相比较。结果 正常小鼠ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核因     

人工细胞抗高血压因子对人脐静脉VSMC胞浆及核内Ca^2＋水平的影响

采实验用Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ染色在激光扫描共聚焦显微镜下观察了红细胞抗高血压因子（ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ,ＡＨＦ）对人脐静脉ＶＳＭＣ胞浆（〗Ｃａ＾２＋〖）及核内（〖Ｃａ＾２＋〗ｎ）游离钙离了瓣影响。结果表明：ＡＨＦ（１０＾－４ｇ／ｍＬ）明显抑制Ｂａｙ ｋ８６４４（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）ＫＣｌ（６０ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＡｎｇⅡ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）及ＩＰ３（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）     

两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后GALT中CD4+、CD8+ T细胞亚群的反应

目的 FSM-2117和FS-5416是两株具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株,FSM-2117无侵袭表型,无溶血活性,不表达侵袭蛋白抗原(Ipa-),FS-5416则为Ipa+,本实验是为了观测两株菌苗(Ipa-,Ipa+)免疫后引起的肠粘膜相关淋巴组织(GALT)中的细胞免疫反应,以探明痢疾菌苗在肠粘膜的免疫保护机制.方法 以BALB/c小鼠随机分成两组,每组25只,灌胃免疫FSM-2117及FS-5416,8×108CFU/只,分别在1,4,7,10,13天随机取各组小鼠5只分离GALT淋巴细胞;同时设一组PBS对照组,以间接免疫荧光法检测GALT中诱导部位[派伊尔小结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)]及效应部位[上皮间淋巴细胞(IEL)、粘膜固有层(LPL)]T细胞亚群的变化,荧光显微镜计数200个细胞计算阳性率.结果 用SAS软件,单因素方差分析,表明两株双价菌苗株均可引起肠粘膜GALT中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群改变,不同粘膜部位免疫反应不同.诱导部位(派氏小结、肠系膜淋巴结)CD4+细胞亚群明显升高,末次免疫后第7天达峰值,而后迅速下降;在效应部位,粘膜固有层表现为CD4+细胞亚群明显升高,而IEL主要表现为CD8+细胞亚群的升高,均于第7天达峰值.两株菌苗与对照组相比,差异都具有显著性(FSM-2117 P≤0.01,FS-5416 P＜0.01),但两菌苗株之间差别无统计学意义(P＞0.05).结论 两株双价痢疾菌苗均可在小鼠GALT引起免疫反应,说明其均有较好的免疫原性.     

宋内氏志贺氏菌（Ipa^＋,Oag^—）菌株的构建及表达

直接用转化方法将质粒ｐＨＳ４１０８转入宋内氏Ⅱ相菌Ｓ１Ｒ（Ｉｐａ＾－，Ｏａｇ＾－），构建了菌株Ｓ１Ｒ１０１／ｐＨＳ４１０８。该菌株能表达侵袭性外膜多肽ａ，ｂ，ｃ，ｄ，无Ｏ抗原。本实验又将质粒ｐＨＳ４１０８中的１２．５ｋｂ ＳａｌＩ片段克隆到质粒ｐＢＲ３２２上，构建质粒ｐＪＭ５６，并把它转入Ｓ１Ｒ株内所得的重组菌Ｓ１Ｒ１０２／ｐＪＭ５６能表达多肽ａ，ｃ，ｄ，但不表达多肽ｂ。     

高血压病患者遗传性红细胞Na^＋—Li^＋逆向及Na^＋—K^＋同向…

对５３个至少双亲之一患高血压病（ＥＨＴ）的家庭和２５个正常血压（ＮＴ）者家庭（包括父、母及一个子女）成员的红细胞（ＲＢＣ）Ｎａ＾＋－Ｌｉ＾＋逆向转运（ＳＬＣ）及Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋同向协同转运（ＳＰＴ）功能，作它们与平均血压（ＭＡＢＰ）间的家庭内部相关分析，并计算其多基因累加遗传力（ｈ＾２），发现：（１）在ＮＴ、ＮＴ＋ＥＨＴ家庭，ＲＢＣ的ＳＰＴ和ＳＬＣ的双亲均值都和其子女的相应值呈正相关，但配偶间不相     

DNA修复蛋白MGMT基因的克隆及转导脐血CD23^＋细胞后耐药特征的研究

目的：增强脐血ＣＤ３４＾＋造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率和耐药基因特性,以及在脐血造血干细胞保护性基因治疗中的作用和意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从人肝细胞中获得编码六氧甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ－甲基转移酶（Ｏ＾６－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ－ＤＮＡ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＭＧＭＴ）ｃＤＮＡ;利用基因重组技术,将其克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体并构建了逆转录病毒载体Ｇ１Ｎａ－ＭＧＭＴ;应用脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ基因转移法将后者导入ＧＰ＋Ｅ８６和ＰＡ３１７病毒包装细胞,以卡氮芥１,３－Ｂｉｓ（２－Ｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌ）－１－Ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ（ＢＣＮＵ）加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染脐血ＣＤ３４＾＋细胞。应用ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈ     

献血员CD8^＋T细胞的增另对CD4^＋T细胞的抑制作用

实验发现６５％体检合格的献血员外周血ＣＤ８＾＋Ｔ细胞数量明显增加,并伴随ＣＤ１６＾＋淋巴细胞数量的增加。这些异常的淋巴细胞与葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）共同２６ｄ,ＣＤ４＾＋Ｔ细胞无增殖反应。预先用抗ＣＤ８抗体去除ＣＤ８＾＋Ｔ细胞（去除率〉９０％）再用ＳＥＢ刺激淋巴细胞,其应答能力恢复正常,增殖的细胞是ＣＤ４＾＋Ｔ细胞,它们由３４．０４％增加到９９．３４％。ＣＤ８＾＋Ｔ细胞由最初的９．５７％降低到０     

同种骨髓移植后GVHD患者血中CD8~＋S6F1~＋及CD8~＋CD57

同种骨髓移植后ＧＶＨＤ患者血中ＣＤ８￣＋Ｓ６Ｆ１￣＋及ＣＤ８￣＋ＣＤ５７￣＋细胞显著增高［英］／ＦｕｋｕｄａＨ…／／ＢｏｎｅＭａｒｒｏｖｖＴｒａｎｓｐｌａｎｔ．—１９９４，１３．—１８１～１８５同种骨髓移植（ａｌｌｏ－ＢＭＴ）后发生的免疫异常与ＧＶＨ...