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目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白(MCP)的cDNA,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用RT-PCR 方法,从U937细胞总RNA中扩增编码人MCP分子的cDNA片段,快速克隆于pGEM-T Easy载体,测定共序列。将该片段重组于pLXSN载体,电穿孔转染NIH3T3细胞,经FACS检测筛选表达MCP的阳性细胞克隆,用补体容破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 RT-PCR 相似文献
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目的 在大肠杆蓖中表达HGV NS5抗原,以建立HGV抗体血清学检测方法。方法 利用扫转录PCR(RT-PCR)法从人血浆中分离庚型肝炎病毒NS5部分基因,克隆到pRSET A载体,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析,结果表明克隆序列正确。以pPROEX-1为表达载体,转化DK5α,诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量(M 相似文献
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利用套式PCR技术体外扩增蚊体内间日疟原虫SSUrDNA长121bp的特定片段,将此片段克隆到载体PUC18中,转化受体菌株DH5α,测序结果表明,扩增DNA序列与背景序列完全一致,证实为间日疟原虫SSUrDNA目的片段。 相似文献
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目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白( MCP) 的cDNA,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用RTPCR 方法,从U937 细胞总RNA 中扩增编码人MCP 分子的cDNA片段, 快速克隆于pGEMTEasy 载体,测定其序列。将该片段重组于pLXSN 载体,电穿孔转染NIH3T3 细胞,经FACS 检测筛选表达MCP 的阳性细胞克隆,用补体溶破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 RTPCR 扩增得到1 144bp 的编码人MCP 分子的cDNA 片段,序列分析表明该cDNA编码的蛋白为STC+ CYT2 亚型。细胞转染筛选获得多个表达MCP 的NIH3T3 阳性细胞克隆,补体溶破试验证实其具有抑制人补体经典途径和旁路途径溶破的功能。结论 本研究为进一步探讨不同亚型结构的MCP 分子与功能的关系及其应用奠定了基础。 相似文献
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用聚合酶链反应方法从大肠杆菌染色体DNA中扩增得到2000bp的DNA片段,并克隆到PGEM3zf(+)载体中,经限制性图谱分析和部分DNA序列测定,证实2000bp的PCR产物为GroE基因全部编序列。将PCR产物构建在PLPR启动子控制下的PBV220表达质粒中,转入大肠杆菌DH5a,经42℃热诱导,获得GroE基因的表达产物,在SDS-PAGE上出现分子量约60000(GroEL)及1500 相似文献
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CD44H胞外区cDNA片段的克隆及在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以pUC/CD44为模板,用PCR法扩增出H型CD44的cDNA片段。用EcoRI/BcII双酶切保留编码CD44H的信号肽及胞外内DNA片段,插入融合蛋白表达载体PEX31b的EcoRI/Sa1I位点,形成重组质粒PEX-CD44,将PEX-CD44导入大肠杆菌菌RR1(PCI857),经42℃温控诱导,有额外蛋白的产生,分子量与预期大小一致,表达产物形成包涵体,表达产量占菌体总蛋白的21%左右 相似文献
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反义bcl-2 DNA促进裸鼠荷人鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:在裸鼠活体水平上观察bcl-2反义寡聚核苷酸(antisense ioligodeoxynucleotide,ASON)对鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡的影响。方法;DNA合成仪合成22nt ASON片段,RT-PCR检测bcl-2表达,电镜观察细胞凋亡。结果;反义bcl-2 DNA片段局部注射CNE2-baxα致瘤组织,RT-PCR检测肿瘤组织中bcl-2表达被封闭,电镜观察视野下可见 相似文献
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我国2型登革病毒NS1基因的克隆及部分碱基序列的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
将我国登革2型病毒株NS1基因的聚合酶链反应(PCR)扩增片段直接克隆到T-载体DNA中。用限制性内切酶分析经蓝/白斑筛选和PCR鉴定的阳性克隆的DNA,证明插入片段与扩增的NS1片段的大小一致。用双脱氧链末端终止法测序结果表明,NS1基因扩增片段5’端的部分碱基序列并未发生改变。 相似文献
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人α—干扰素与乙型肝炎病毒前S2嵌合蛋白的表达?… 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 重组表达人α-干扰素与乙型肝炎病毒前S2融合蛋白(IFN-Pre S2),探索治疗HBV感染的特异性免疫药物。方法 采用聚合酶链反应(PCR0技术扩增出人IFN-α2b和HBV Pre S2基因片段,分步克隆获取融合基因,构建pBV-IFN-Pre S2重组表达载体,转化E.coli后诱导表达IFN-Pre S2融合蛋白。结果 在E.coli中表达了相对分子质量为27000的目标蛋白,后者以 相似文献
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应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活的相关基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目前丙型肝炎病毒 (HCV)与肝细胞之间相互作用的分子生物学机制尚不清楚 ,病毒编码的蛋白能够影响多种细胞信号转导途径 ,从而影响肝细胞某些基因的表达、调控 ,可能是病毒感染导致肝细胞损伤和肝细胞癌发生、发展的重要原因。本实验应用抑制性消减杂交(SSH) ,构建HCVNS3反式激活的相关基因cDNA消减文库 ,通过对所得片段进行序列同源性分析 ,筛选相关的靶基因 ,为研究HCV致病机制提供资料。应用PCR扩增HCVNS3基因 ,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建成含有 1893bp目的基因的质粒pcDNA3.1… 相似文献
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人MBL相关丝氨酸蛋白酶-1 cDNA的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 获得人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶-1(MASP-1)基因。方法 以人胎肝组织总RNA为模板,采用RT-PCR获取目的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,进行酶切图谱分析和测序鉴定。结果 以RT-PCR方法获得了含信号顺序的全长MASP-1cDNA,将其与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,建立了MASP-1的cDNA克隆,酶切图谱与微机分析结果一致。序列分析表明。与 相似文献
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人脑源性神经生长因子基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用聚合酶链反应(PCR)以人脑DNA为模板,扩增了人脑源性神经营养因子(BDNF)成熟序列的DNA 片断并将此DNA 片段克隆到载体PBV220中。对重组质粒进行PCR鉴定、限制性酶切分析和序列测定后,确定其为含BDNFDNA 的重组质粒。将该质粒转染到大肠杆菌(DH5 α)中,通过温度诱导其表达,其表达量占菌体总蛋白的15% 。用兔抗人BDNF进行蛋白质印迹分析(Westernblot)后,在表达产物位置(14Kd)出现特异性条带,证实该产物为BDNF 相似文献
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人骨形成蛋白2在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及初?… 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:研究hBMP2在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法:将编码hBP2的全长cDNA克隆人转移载体PKS中,重组后的载体与线性化的病DNA经脂质体包裹转染昆虫细胞。重组病毒经蓝白筛选后,提取病毒DNA进行PCR扩增,鉴定目的基因。收集重组病毒感染4d的细胞,进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果:含有目的基因的重组载体经酶切可切下相应大小的基因片段。PCR产物的电泳结果表明,有目的基因片段的扩谱。免 相似文献
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本文从构建cDNA有限文库中分离出含有全部编码区+4/+2830bp的Hsp90αcDNA,经DNaseI有限酶解片段的定向亚克隆和序列测定,获得了含有人Hsp90α的cDNA全序列克隆。 相似文献
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我国登革病毒分离株NS1基因的扩增 总被引:4,自引:1,他引:4
本研究利用逆转录(RT-PCR)技术将由聚乙二醇浓缩的登革病毒制备的RNA合成为双股cDNA,建立了扩增登革病毒大片段cDNA的条件。采用该方法扩增了我国登革2型病毒株的cDNA片段,长度为1383bp。它不但包括完整NS1基因,而且也包括了对NS1编码蛋白的功能起重要作用的位于其上游和下游的部分碱基序列。登革病毒大片段cDNA的扩增有助于对我国毒株NS1基因的克隆与表达的研究。 相似文献