乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

目的　构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果　酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论　毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制     

随机扩增DNA多态性技术在A组链球菌分型上的应用

目的 了解A组乙型溶血性链球菌的基因分型状况。方法 采用随机扩增多态性DNA技术(Random amplified polymorphic DNA，RAPD)，对1988～1994年度．从广东城市和农村，1993～1994年度，从湖北、吉林9～11岁学龄儿童分离的179株GAS进行RAPD分析。结果 ①同一T型的菌株有特征性条带，但有些亚型带型间差异较大：②不同T型间可有相同的带型；③分型率比T分型高，达到96．6％；④有主导RAPD型菌株流行的情况存在。结论 RAPD方法对GAS分型及流行病学中有一定的应用价值，可以区别同一血清型不同地区来源的GAS。     

野生型stathmin 1及其C末端突变体的功能研究

目的： 研究stathmin 1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin 1生物功能的影响。方法: 构建stathmin 1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型stathmin 1对于黑色素细胞生长以及细胞特异性功能的影响。结果: 成功构建含有野生型stathmin 1的克隆载体pAdTrack-stathmin 1及其定点突变载体pAdTrack-stathmin 1-mut;MTT法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin 1 都能有效抑制黑色素细胞生长、诱导细胞凋亡;分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin 1的转染而受到明显影响。结论: Stathmin 1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义,高表达可以抑制细胞生长以及细胞特异性功能,C末端模序结构的破坏并不能影响stathmin 1的生物学功能。     

Stathmin 1 RNA干扰载体的构建及功能检测

目的 构建用于stathmin 1 RNA干扰的重组质粒并验证其干扰效果,初步探讨stathmin 1 对于黑色素细胞生长的影响.方法 两步PCR法构建含有shRNA编码序列的重组质粒,脂质体转染黑色素细胞.RT-PCR、Western 印迹等方法检测stathmin 1在黑色素细胞中表达水平改变;MTT、流式细胞仪等方法检测黑色素细胞生长状态.结果 成功构建3个stathmin 1特异性的RNA干扰载体,在黑色素细胞中能有效降低stathmin 1在mRNA水平的表达,蛋白质表达水平分别降低为对照组的6 %、17 %和15 %;黑色素细胞的生长由于stathmin 1 减弱表达而受到明显抑制,凋亡率提高到约60 %.结论 干扰质粒能有效介导stathmin 1的RNA干扰;stathmin 1对于黑色素细胞的生长具有重要意义.     

EGFR基因突变及其检测方法的研究进展

表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化.在癌症中发现EGFR酪氨酸激酶区常发生各种突变,这些突变和酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关.因此,EGFR突变的检测对癌症的个体化治疗具有重要的参考价值.目前常用的EGFR突变检测方法有测序法、PCR-SSCP、突变体富集PC...     

转导入baxα基因的CNE—2B细胞株凋亡及其裸鼠成瘤能力的改变

目的 观察导入ｂａｘα基因并稳定表达的人低分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２Ｂ）生物学行为变化。方法 琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ片段化；γ－射线照射。结果 ＣＮＥ－２Ｂ在进行正常及受γ－射线照射后传代培养时，其细胞总数的增加速度比导入载体的对照组ＣＮＥ－２Ｐ细胞株明显减慢；自发性细胞凋亡数明显增加。ＣＮＥ－２Ｂ细胞中到１０只裸鼠双侧北部皮下均未风形成移植瘤（０／２０），而对照的１０只裸鼠的成瘤率为１００％     

脑转移瘤的CT诊断与手术选择

<正> 我院自1987年10月～1999年6月经CT诊断、手术治疗和病理症实的脑转移瘤50例。现就其CT影像学特点及手术选择进行分析讨论。 1 临床资料 1.1 一般资料:50例中男27例,女性23例;发现原发病灶者46例,年龄43岁～65岁,平均56岁。 1.2 肿瘤部位:额叶者25例,占50％;顶叶者15例,占30％;颞     

树突状细胞与HIV-1免疫治疗

抗原提呈细胞(APC),尤其是树突状细胞(DCs)的抗原靶向及活化作用,在疫苗研究中是非常重要的。在HIV-1感染中,DCs具有诱导和维持抗原特异性T细胞免疫反应功能。目前临床试验表明DC免疫治疗在HIV-1感染患者身上是安全和有效的。本文主要对DCs的分化、迁移、成熟及HIV-1的DCs免疫治疗效应、抗原类型、临床试验等进行阐述。     

应用亲和磷酸蛋白质组学筛选氧化应激重塑型LPS通路的侯选信号分子

目的： 研究低剂量LPS刺激的Thp-1细胞在有或无H₂O₂预处理时磷酸化蛋白组的差异，以初步筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法： 使用PMA刺激Thp-1单核细胞36 h使之分化成为成熟的巨噬细胞，静息36 h后，先以等体积的培养基或100 μmol/L H₂O₂刺激1 h，再以培养基或10 μg/L LPS刺激 30 min。采用PMAC ( phosphoprotein metal affinity column)富集各组细胞的磷酸化蛋白质，经超滤除盐后进行二维凝胶电泳，比较LPS组和H₂O₂+LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异，并挑选部分斑点进行质谱鉴定。结果： 相对于LPS组（仅用LPS刺激的细胞)，在H₂O₂+LPS组（LPS刺激前经H₂O₂提前处理的细胞)中，有29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出可重复的差异，其中，17个斑点发生了上调（包括新出现的斑点），12个发生了下调（包括消失的斑点）。我们已经鉴定出其中5个差异蛋白，这些蛋白参与多种多样的细胞过程例如蛋白质降解、信号转导和蛋白质折叠等。其中，在H₂O₂+LPS组中显著下调的proteasome beta-4亚基与LPS信号传递关系密切。结论： 亲和磷酸蛋白组学有效减少了高丰度的结构蛋白的干扰并增加了信号分子检出的可能性。上述５个蛋白尤其是proteasome beta-4亚基可能是氧化应激重塑型LPS通路的重要调节分子。     

免疫介导再生障碍性贫血小鼠血清诱导骨髓造血细胞凋亡及？…

目的：探讨再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓造血细胞损伤的机制。方法：以重组的人ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３作为造血细胞存活因子，实验组以再障小鼠血清加入正常小鼠骨髓细胞培养体系，同时设立正常小鼠血清培养组和无小鼠血清培养组两个平行对照组。结果：实验从超微结构、流式细胞仪及ＤＮＡ裂解分析三方面证实再障小鼠血清诱导骨髓细胞发生凋亡。在一定浓度范围内，随再障小鼠血清浓度的增高，其诱导ＤＮＡ裂解百分率逐渐增高。再