肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。     

人白细胞介素2受体α链在因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。通过计算机分析发现ＩＬ２Ｒα基因第三内含子具有典型的Ｇ↓ＧＵ……Ｐｙｒｉｃｈ（∽１５ｂｐ）ＮＣＡＧ↓Ｇ结构特点，但在３’剪接点５’上游５００ｂｐ范围内未发现分支点结构，该序列的确定为进一步了解ＩＬ２Ｒα基因组的结构和变异剪接的机理奠定了基础     

白细胞介素2受体α基因负调控元件相关结合蛋白的筛选与克隆

白细胞介素２受体（IL-２R）α亚基的胞内末端较短，可能不直接参与IL-２的信号传递，但它在激活淋巴细胞中的特异表达以及与IL-２结合参与淋巴细胞增殖和免疫应答强度的调控。本组曾报道IL-２Rα基因５'端顺式调控元件NRE不仅与其３'端下游NRE反向重复序列（NIRS）共同参与对I     

硫酸软骨素A及C的分离与提纯

本文报道了从牛气管中分离及提纯硫酸软骨素A(ChS-A)及硫酸软骨素C(ChS-C)的方法。为了除去与硫酸软骨素结合的蛋白质并尽量减少硫酸软骨素的降解,我们采用了两种蛋白质水解酶,即胰蛋白酶及木瓜蛋白酶,使大部分的蛋白质分解。然后再采用有机溶剂沉淀法,活化浮石土吸附法以及离子交换树脂等,以去除少量的残余蛋白。加入氯化十六烷吡啶使ChS-A及ChS-C沉淀,并利用此沉淀在不同浓度的氯化钠溶液中溶解度不同的这一特性以去除可能与ChS-A及ChS-C同时存在的其它酸性粘多糖。最后用乙醇分段沉淀法将ChS-A及ChS-C分开。用本法所提制出的ChS-A及ChS-C经化学及物理化学分析证明纯度很高。     

白细胞介素2基因的表达及热休克对它的影响

研究人外周血T淋巴细胞中白细胞介素2(IL-2)mRNA的表达和分泌IL-2的活力,实验结果表明植物血凝素(PHA)单独诱导IL-2的能力很弱,诱导过程较长;加入促癌剂12-0-十四酰佛波-13-乙酯(TPA)后能诱导IL-2的早期转录,并增强16h后PHA诱导的转录作用和培养细胞的上层液中IL-2的活力。45℃,10min的热休克不影响IL-2的诱导合成。在分析、比较PHA,TPA和/或热休克影响的基础上,对T淋巴细胞激活过程中IL-2基因表达的调控机制进行了讨论。     

野生型90β对热休克蛋白90β基因表达的调控作用

为了阐明野生型p53在热休克蛋白90β(hsp90β)基因表达调控中的作用,我们利用野生型p53的表达质粒转染Jurkat细胞,发现野生型p53可以剂量依赖方式抑制hsp90β基因的启动子活性,并且证实hsp90β基因的表达在mRNA和蛋白水平均明显减少.     

mRNA的提取和cDNA的合成——介绍一种高效、简便的方法(简报)

为了进行基因结构分析和编码蛋白的体外表达,必须尽可能获得完整的cDNA片段。为此,我们比较了多种反应体系和条件,探索出高效,简便地从mRNA提取到制备双链cDNA的方法。 一、mRNA的提取和纯化 真核细胞的离心沉淀物按压积加入4～5倍量的4mol/L硫氰酸胍-N-十二烷基甲基甘氨酸钠裂解液,充分混悬后在5.7mol/L CsCL中进行超速离心,使总时数和g的乘积等于1,750,000g/h。此时,总RNA沉降于管底。重新溶解再经酚-氯仿抽提后,可保存于-70℃的乙醇中。离心收集总RNA加于     

地塞米松对人白细胞介素2受体α链基因表达的影响

白细胞介素２／白细胞介素２受体（ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ）系统在免疫系统中起极重要作用，研究糖皮质激素对ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ系统的影响有助于了解糖皮质激素免疫调节作用的分子机理。通过荧光素酶报告基因的表达及狭缝杂交，发现在Ｊｕｒｋａｔ细胞中地塞米松对ＩＬ－２Ｒα链基因ｍＲＮＡ的基础表达及ＰＨＡ的诱导表达均有直接促进作用，这种正调节作用与ＩＬ－２Ｒα链基因５＇上游一４８２ｂｐ以内近端已知的诱导转录元件无关，且与ＰＨＡ的活化机制不同，两者间具有协同效应。     

热休克蛋白与免疫

这是在柏林召开的最热列的专题讨论会之一:参加会的人们有的坐在地板上、有的站在门口进行着讨论直至茶点以后,正如D.H.Raulet最近在“自然”杂志上发表的关于γδT细胞时所指出的那样,如果认为热休克或应激蛋白(HSP_s)最初至多只引起免疫学家的一种好奇心,那么,现在则对它们产生了极大的兴趣和关注:从传染免疫到自身免疫病,从免疫球蛋白的组装到抗原提呈,从炎症到癌,所有这些内容都贯穿在该讨论会中,在大会的其它以热休克蛋白为主题的讨论会及座谈会中也是如此。