SLE患者外周血中T、B细胞表面Fas和bcl—2表达的研究

目的 探讨活动期SLE患者外周血中T、B细胞表面Fas和bcl-2的表达水平及其与T、B细胞凋亡的关系。方法 采用流式细胞术,测定活动期SLE患者外周血T、B细胞表面Fas和bcl-2的表达,并同时测定患者血中T、B细胞的凋亡。结果 ①活动期SLE患者外周血中B细胞及CD8T细胞表面bcl-2的表达明显高于正常人（分别为P＜0．05）和P＜0．01）;CD4^ 及CD8^ T细胞表面Fas的表达高于正常人（分别为P＜0．05和P＜0．01）;B细胞表面Fas的表达降低（P＜0．01）;CD4^ T细胞bcl-2的表达下降（P＜0．01）。②活动期SLE患者血中B细胞的凋亡率明显下降,CD8^ T细胞数校正常对照组增加,CD4^ T细胞低于正常人（分别为：P＜0．01、P＜0．05和P＜0．01）。结论 SLE患者体内淋巴细胞凋亡的异常与T、B细胞表面Fas和bcl-2基因的表达的异常有关。     

Bcl-2过表达抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡

目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对乙醇诱导的肝细胞癌(HCC)细胞凋亡的影响.方法将含有人bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染到不表达bcl-2蛋白的人肝癌细胞系HCC-9204细胞中,用免疫组织化学ABC法检测bcl-2蛋白的表达情况.连续克隆化直至获得100%表达bcl-2蛋白的单克隆细胞株,并进行流式细胞术检测.用6%乙醇分别作用于上述细胞6h后,用MTT法和TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡发生程度.结果转染pDOR-SB的细胞大部分为bcl-2蛋白表达阳性,而转染pDOR空载体或未转染的HCC-9204细胞均为bcl-2蛋白阴性.连续3次克隆化后,流式细胞检测表明所获得的单克隆细胞株100%稳定表达bcl-2蛋白,命名为HCC-bcl-2.6%乙醇作用后,HCC-bcl-2细胞和未转染的HCC-9204细胞经MTT法检测的吸光度值分别为0.519±0.053和0.366±0.046,前者明显高于后者(P<0.01);TUNEL指数分别为0.387和0.613,亚二倍体凋亡峰比例分别为3.8%和10.7%,前者均明显低于后者(P<0.05).结论bcl-2蛋白过表达能够抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡.     

原发性中枢神经系统淋巴瘤bcl-2蛋白和CD56的表达

目的：探讨原发性中枢神经系统淋巴瘤中bcl-2蛋白的表达情况及bcl-2蛋白阳性表达与CD56表达的相关性。方法：应用免疫组织化学S－P方法对21例原发性中枢神经系统淋巴瘤组织中bcl-2蛋白和CD56进行检测。结果：21例原发性中枢神经系统淋巴瘤中17例bcl-2蛋白表达阳性（81．0％）,阳性瘤细胞多呈弥漫分布,以中心细胞样细胞表达为主。21例原发性中枢神经系统淋巴瘤中bcl-2蛋白有较高的表达率,提示由bcl-2基因产物介导的细胞凋亡障碍与中枢神经系统淋巴瘤的发生有关;而原发性中枢神经系统淋巴瘤亦有CD56的表达,其可能与肿瘤侵袭性有关。     

ROCK对系统性红斑狼疮患者外周血T细胞黏附和迁移的调控

 目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T细胞中Rho激酶（ROCK）活化情况,并探讨其对T细胞黏附和迁移的影响。方法：收集SLE患者33例,正常健康人12例和类风湿关节炎患者9例作为对照组。外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,ROCK活性用磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）蛋白表达来表示,磷酸化MYPT1蛋白检测采用免疫印迹法,T细胞迁移采用Transwell小室测定。结果：新鲜分离的SLE患者外周血T细胞ROCK活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组（均P<0.05）。SLE患者T细胞体外黏附和迁移能力显著高于正常对照组;ROCK特异性抑制剂Y27632显著抑制SLE患者T细胞黏附和迁移。结论：SLE患者存在T细胞ROCK活化异常;ROCK可能参与调控SLE T细胞的黏附和迁移;抑制T细胞异常的ROCK活性可能有助于SLE的治疗。     

Caspase-8信号分子对SLE患者T细胞亚群的双向调节作用研究

目的 分析SLE患者外周血T细胞内活化Caspase-8、Caspase-3和T细胞膜上Fas、CD69以及外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞的表达,探讨他们在SLE患者免疫失衡中的作用.方法 用流式细胞术检测活化Caspase-8、Caspase-3和Fas、CD69以及Foxp3 CD4 CD25 Treg的表达.结果 与健康对照相比,SLE患者外周血CD3 CD4 T细胞上Fas表达显著升高(P＜0.05),无论稳定期或活动期SLE患者CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞中活化Caspase-8的表达均显著增加(P＜0.05),且稳定期和活动期SLE患者CD3 CD8 T细胞中活化Caspase-8的表达高于其在CD3 CD4 T细胞中的表达(P＜0.05);但是仅活动期SLE患者T细胞内活化Caspase-3表达增加(P＜0.05),同时稳定期和活动期SLE患者CD3 CD4 T细胞中活化Caspase-3的表达高于其在CD3 CD8 T细胞中的表达(P＜0.05).同时SLE患者CD3 CD8 T细胞上CD69表达率升高(P＜0.05),但是CD69在CD3 CD4 T细胞上的表达率与健康对照相比无显著性差异(P＞0.05).SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 Treg比例显著低于健康对照(P＜0.05).结论 Caspase-8介导的信号事件同时参与诱导SLE患者淋巴细胞的凋亡与活化,促使SLE患者体内免疫反应向Th2极化,同时由于SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 Treg表达降低所介导的免疫抑制效应缺陷,他们共同作用促使SLE患者外周免疫平衡障碍.     

从CD4+CD25-Foxp3+ T细胞变化看系统性红斑狼疮外周免疫耐受失衡

目的: 检测CD4+CD25-Foxp3+ T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达,探讨该细胞亚群在SLE发病机制中的意义.方法: 采用流式细胞术检测25例SLE患者和15例健康对照的外周血CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例、分析其表型;利用免疫磁珠细胞分选法(MACS)分选出CD4+CD25-T细胞,通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测FOXP3基因表达.结果: 活动期和稳定期SLE患者外周血CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例分别是: (9.89 ±0.85)%和(7.11±0.86)%,与健康对照组 (3.35±0.31)% 比较差异有统计学意义(P<0.01).SLE患者CD4+CD25-Foxp3+ T细胞表达频率与SLEDAI评分呈明显正相关(P=0.0008).活动期SLE患者CD4+CD25-T细胞中Foxp3在蛋白和基因转录水平上的表达均高于健康对照组(P<0.01).SLE患者CD4+CD25-Foxp3+ T细胞表面低表达CD127.结论: SLE患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例变化可能反应了SLE发病中T细胞外周免疫失耐受机制"调节性T细胞的抑制效应被抵抗".     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞中bcl-2基因的表达

<正>细胞凋亡对许多免疫功能有关键作用,凋亡异常可能与多种自身免疫性疾病有关。为了研究系统性红斑狼疮（SLE）中是否存在凋亡调节基因的异常改变,我们用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测了SLE患者外周血细胞中bcl-2基因的表达。     

凋亡抑制基因bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨凋亡抑制基因bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)不同免疫亚型中的表达,以及bcl-2蛋白表达对患者生存期的影响.方法 应用免疫组织化学(EliVision plus和PV-9002法)对214例DLBCL进行CD10、bcl-6、MUM-1、bcl-2及NF-κB检测,采用Hans免疫分型方法将DL...     

尼美舒利对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长调控作用的研究

目的 研究尼美舒利(nimesulide,NIM)体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,对其机制做进一步探讨.方法 MTT法检测不同浓度、时间NIM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制率;流式细胞技术分析细胞周期变化,计算细胞凋亡率;免疫组织化学检测bcl-2,bax,cox-2蛋白表达变化;RT-PCR半定量检测COX-2 mRNA表达改变;ELISA法检测PGE2水平变化.结果 NIM可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,呈浓度、时间依赖性;不同浓度NIM处理48h后,细胞内Bcl-2、COX-2蛋白及COX-2mRNA表达水平均明显降低,Bax蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论 NIM可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和荆量依赖性.其机制与抑制COX-2有关外,还可能与调节bcl-2、bax等表达有关.     

T细胞表达Fas用于评价系统性红斑狼疮活动性和疗效的价值

目的：流式细胞术检测系统性红斑狼疮(SLE)患者T细胞表面Fas表达水平，探讨其用于评价疾病活动指数和疗效的价值。方法:对36例活动期SLE患者和18名正常人群，通过流式细胞仪检测T细胞Fas表达和凋 亡率。对SLE患者分别给予泼尼松、甲泼尼龙、环磷酰胺冲击治疗，在入院3 d内、出院时（平均住院天数为22.6 d）、出院后4周分别检测T细胞Fas表达（Fas+T）。结果:活动期SLE患者T细胞表面Fas表达与T细胞凋亡率和SLEDAI之间，具有明显正相关P<0.01），皮质类固醇或免疫抑制剂治疗活动期SLE患者后，出院时T细胞表面Fas 表达（Fas+T）明显升高；出院后4周复诊时呈下降趋势。结论:SLE 患者T细胞表面Fas表达上调,由Fas介导的T细胞凋亡增强,刺激机体产生抗dsDNA等多种自身 抗体,可能是SLE免疫功能紊乱的主要原因。T细胞表面Fas密度可能是评价SLE疾病活动性和 临床疗效的主要参数。     

Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2ASODN)联合Rituximab[CD20单克隆抗体(mAb)]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:bcl-2ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后,通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果。结果:5~30μmol/L bcl-2和1~16mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2mRNA表达降低,但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显(P<0.01)。体内实验表明,bcl-2ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长(P<0.01)。结论:bcl-2ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长,促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2mRNA表达而起作用。     

非小细胞肺癌中凋亡相关蛋白与伴神经内分泌分化表达的相关性

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中凋亡相关蛋白与神经内分泌(neuroendocrine,NE)分化的表达,探讨其相关性.方法 采用免疫组织化学染色方法,检测NSCLC组织中survivin,bcl-2蛋白与NSE、Syn及CgA等蛋白的表达,并进行相关性作统计学分析.结果 113例NSCLC中,survivin、bcl-2阳性表达率分别为88.5%、58.4%;NSE、Syn和CgA蛋白阳性表达率分别为53.6%、6.2%和26.5%.伴NE分化者占21.2%,其survivin蛋白表达明显高于不伴NE分化组,差异有统计学意义.结论survivin、bcl-2蛋白表达上调可能在NSCLC发生发展中起重要作用.伴NE分化的NSCLC与表达阴性者相比,以survivin为代表的抗凋亡能力明显增强.     

人支气管上皮细胞恶性转化中凋亡敏感性及bcl-2的变化

目的: 揭示细胞凋亡敏感性在人癌细胞体外恶性转化动态过程中的变化。方法:用已获部分恶性的SV₄₀T转染的人支气管上皮细胞系M为材料, 通过凋亡TDT原位标记、染色体FISH、RNA及蛋白检测等技术,研究同一株细胞恶性转化过程中凋亡及bcl-2、P53基因的变化。结果:恶性转化的M后代细胞较未转化的M前代细胞对顺铂诱发细胞凋亡现象不敏感;bcl-2基因的转录和表达在M后代细胞明显高于M前代细胞,而且在M细胞恶性转化进程中呈积累现象;P53蛋白在M前、后代细胞均表达。结论:bcl-2过表达使细胞对凋亡敏感性下降在人支气管上皮细胞恶性转化中起重要作用;P53蛋白的灭活不是此SV₄₀T转染细胞恶性转化进程中bcl-2表达积累的主要原因。     

反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的:观察反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法: 合成bcl-2AS-PS-ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446, 半定量RT-PCR检测bcl-2mRNA表达;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Bcl-2蛋白表达;通过克隆形成率、细胞计数、流式细胞仪DNA倍体分析、TUNEL等指标观察bcl-2 AS-PS-ODN对细胞增殖、活力和凋亡的影响。结果:①bcl-2 AS-PS-ODN能特异性地降低NCI-H446细胞bcl-2mRNA和Bcl-2蛋白的表达。1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后bcl-2mRNA表达量下降69.5%, 48h后Bcl-2蛋白下降62.7%。②bcl-2 AS-PS-ODN能够抑制细胞增殖和活力, 诱导细胞凋亡, 1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后, 细胞凋亡率约为22.3%-32.7%。结论:bcl-2 AS-PS-ODN能够特异性降低bcl-2mRNA、蛋白表达, 抑制NCI-H446细胞的增殖和活力, 并诱导细胞凋亡。     

SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的分析

目的分析SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,以初步阐述其在SLE患者免疫稳态调节中的作用和意义。方法以流式细胞术检测SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达。结果稳定期及活动期SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞比例显著低于健康对照(P<0.05),且活动期SLE患者Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞比例高于稳定期SLE患者(P>0.05)。SLE患者外周血CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上GITR表达显著增加(P<0.05);随着疾病活动性增加,CD3 CD4 T细胞上GITR表达降低(P>0.05),CD3 CD8 T细胞上GITR表达增加(P>0.05)。结论SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞表达降低,而患者T细胞亚群上GITR表达增加,其共同作用在诱导SLE患者外周耐受障碍中具有重要意义。     

层粘连蛋白对兔角膜内皮细胞bcl-2表达的影响

目的：观察层粘连蛋白（LN）对兔角膜内皮细胞bcl-2表达的影响。 方法： 将体外培养的兔角膜内皮细胞分成3组：正常对照组、层粘连蛋白(LN)处理组、阴性对照组,采用免疫组化法和酶联免疫法分别检测3组的染色深浅及吸光度大小，以显示各组间bcl-2表达的水平。 结果： 免疫组织化学染色及评分结果显示LN组bcl-2为强阳性表达，正常对照组bcl-2为弱阳性表达，阴性对照组bcl-2为阴性表达。酶联免疫吸附试验检测3组吸光度分别为1.21±0.18（LN组）、1.05±0.14（正常对照组）和0.04±0.01（阴性对照组）。 结论： 层粘连蛋白能促进兔角膜内皮细胞bcl-2基因表达，从而可以有效地抗细胞凋亡。     

T细胞淋巴瘤1和CD44蛋白在Burkitt淋巴瘤中的表达及其诊断价值

目的 探讨T细胞淋巴瘤1(TCL1)和CD44蛋白在Burkitt淋巴瘤中的表达及其诊断价值.方法 在石蜡包埋的实验组25例Burkitt淋巴瘤和对照组25例非特指弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中采用免疫组织化学EnVision法检测CD44、TCLl以及CD10、bel-2、bcl-6、c-myc、Ki-67等常用抗体表达情况.结果 Burkitt淋巴瘤中瘤细胞96%(24例)呈TCL1阳性,仅4%(1例)CD44阳性;88%(22例)CD10阳性、92%(23例)bcl-6和c-myc阳性,仅4%(1例)bcl-2阳性;Ki-67增殖指数为95%～100%.非特指DLBCL中仅16%(4例)TCL1弱阳性,84%(21例)CD44阳性、32%(8例)CD10阳性、72%(18例)bcl-6和bcl-2阳性、c-myc均阴性,Ki-67增殖指数40%～90%.结论 当形态和免疫表型不典型时,TCL1和CD44两种蛋白的检测有助于提高Burkitt淋巴瘤的确诊率及其与DLBCL的鉴别诊断.     

临产后母血、羊水中PGE2的变化与胎盘上 bcl-2表达的关系

目的探讨临产后母血、羊水中前列腺素E2(PGE2)浓度的变化与胎盘滋养层细胞bcl-2蛋白表达的关系.方法53例足月妊娠妇女分成两组,其中临产组28例,未临产组25例.用放射免疫法测定孕妇母血、羊水中PGE2的浓度,用免疫组化(IHC)法测定胎盘滋养层细胞bcl-2的蛋白表达.结果(1)临产组母血、羊水中PGE2水平均高于未临产组(P＜0.05).(2)临产组胎盘滋养层细胞bcl-2的蛋白表达明显低于未临产组(P＜0.05).(3)母血、羊水中PGE2的浓度变化与bcl-2的蛋白表达呈负相关.结论PGE2及bcl-2介导的胎盘滋养层细胞凋亡在启动分娩发动过程中具有重要作用;且PGE2可能影响bcl-2的表达.     

尼美舒利对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长调控作用的研究

目的研究尼美舒利（nimesulide,NIM）体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,对其机制做进一步探讨。方法 MTT法检测不同浓度、时间NIM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制率;流式细胞技术分析细胞周期变化,计算细胞凋亡率;免疫组织化学检测bcl-2,bax,cox-2蛋白表达变化;RT-PCR半定量检测COX-2mRNA表达改变;ELISA法检测PGE2水平变化。结果 NIM可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,呈浓度、时间依赖性;不同浓度NIM处理48h后,细胞内Bcl-2、COX-2蛋白及COX-2mRNA表达水平均明显降低,Bax蛋白水平明显升高（P〈0.05）。结论 NIM可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。其机制与抑制COX-2有关外,还可能与调节bcl-2、bax等表达有关。     

HIV Tat蛋白增加CD4+ T淋巴细胞bcl-2表达并抑制TRAIL诱导的细胞凋亡

目的探讨HIV Tat蛋白对CD4^＋ T淋巴细胞bcl-2表达的影响，并探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与经HIV Tat蛋白刺激后的CD4^＋ T淋巴细胞凋亡的相互关系。方法用Western blot方法测定经HIV Tat蛋白刺激后，CD4＋ T淋巴细胞表达bcl-2的水平，以λ-氨基放线菌素D（7-AAD）和AnnexinV染色方法测定CD4＋ T淋巴细胞的凋亡。结果HIV Tat蛋白能明显增加CD4＋ T淋巴细胞bcl-2的表达，以100ng/ml为最佳浓度；7-AAD染色结果表明100ng/ml重组TRAIL能诱导53．85％±2．63％的CD4^＋ T淋巴细胞发生凋亡，如CD4^＋ T淋巴细胞经HIV Tat蛋白刺激后，则仅有16．04％±5．26％的细胞发生凋亡，此作用能被多克隆抗-Tat蛋白抗体抑制。Annexin V染色取得了同样的结果。结论经HIV Tat蛋白刺激后CD4^＋ T淋巴细胞bcl-2的表达明显增加，并能抑制由重组TRAIL诱导的细胞凋亡，提示HIV Tat蛋白是导致HIV在CD4^＋ T淋巴细胞内持续感染的重要调节蛋白，在HIV感染中起十分重要作用。