活血降脂方对小鼠脂肪肝的防治作用

目的:探讨活血降脂方对小鼠脂肪肝的防治作用及机制。方法:高脂饲料喂养小鼠,分别用不同剂量的活血降脂方(由人参、三七、天麻组成,命名为GST)给小鼠灌胃2周,检测血脂、肝组织甘油三酯(TG)含量,并观察肝指数和肝脏病理变化,筛选出药物的最佳用药剂量。此外,小鼠分为正常对照(NC)组,喂基础饲料;模型组喂高脂饲料。12周后将模型小鼠随机分为高脂(HF)组,正常饮食(ND)组和GST组。除HF组饲高脂饲料外,其余各组饲基础饲料;GST组给予GST灌胃2周,其余各组以同等容积蒸馏水灌胃。检测血清总胆固醇(TC)、TG、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织TC、TG含量,观察肝指数、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,肝组织病理变化及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、细胞色素P450 2E1(CYP2E1)的mRNA表达。结果:GST可显著降低血脂、肝脂和MDA水平,增加SOD活性,明显降低肝指数并改善肝组织脂肪变性,增加肝组织PPARαmRNA表达、抑制CYP2E1 mRNA的表达。结论:GST具有有效防治脂肪肝的作用,其机制可能与上调肝组织PPARαmRNA的表达、降低血清和肝组织TG含量、下调CYP2E1 mRNA的表达以及抗脂质过氧化反应有关。     

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的HELF细胞中结缔组织生长因子基因启动子的激活*

 目的： 探讨沙利度胺（thalidomide, THD）对转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）诱导的人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast, HELF）结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）基因启动子激活的影响。方法: 构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因载体pGL3-CTGFP,将其瞬时转染HELF细胞,通过检测萤光素酶的活性,观察TGF-β1和THD对CTGF基因启动子活性的影响。结果: TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式显著增加HELF细胞中报告基因的活性（P<0.05）,最佳剌激浓度是5 μg/L,萤光素酶相对活性为对照组的2.16倍,最佳剌激时间为12 h,萤光素酶相对活性为对照组的2.52倍;THD对报告基因的基础活性无明显影响（P>0.05）,但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1上调报告基因活性的效应(P<0.05)。结论: TGF-β1能以剂量依赖方式和时间依赖方式上调HELF细胞中CTGF基因启动子的活性,而THD能以剂量依赖方式抑制此过程。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建

人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建。以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD2基因启动子不同长度的4段序列,利用特定的限制性内切酶位点,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这4个序列片段进行酶切并插入表达载体pEGFP-N3中,用Vsp I和Pst I双酶切和PCR鉴定重组质粒,再将重组质粒进行DNA序列分析。构建的重组质粒经脂质体LipofectamineTM2000介导转染HTK293T细胞,转染24 h后加入TNF-α持续刺激细胞24 h或不加TNF-α刺激,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因绿色荧光蛋白(green fluores-cent proteins,GFP)。结果:pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEG-FP-N3-NOD2(1 387 bp)分别经酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,构建的4段重组质粒pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)转染的HTK293T均能表达绿色荧光,其中构建pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)重组质粒经TNF-α持续刺后激绿色荧光表达最强。4段不同长度的人NOD2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体成功构建,这为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。     

α-MSH对EGTA性发热效应及脑腹中隔AVP含量的影响

目的和方法：观察脑腹中隔精氨酸加压素（ＡＶＰ）在α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）解热机制中的作用；用放射免疫法测定ＡＶＰ含量。结果：ＥＧＴＡ引起明显的发热反应（Ｐ＜０．０１），同时降低脑腹中隔ＡＶＰ含量（Ｐ＜０．０５）。α－ＭＳＨ可抑制ＥＧＴＡ性发热反应（Ｐ＜０．０１），并增加脑腹中隔ＡＶＰ含量（Ｐ＜０．０５）；而对正常家兔体温及脑腹中隔ＡＶＰ含量无影响（Ｐ＞０．０５）。结论：α－ＭＳＨ对ＥＧＴＡ的解热作用可能部分是通过增加脑腹中隔ＡＶＰ的释放而实现的。在限制发热的过程中，内生解热物α－ＭＳＨ与ＡＶＰ可能具有协同作用。     

α-黑色素细胞刺激素的抗炎机制

近年来的研究表明 ,神经内分泌系统和免疫系统之间存在着密切联系 ,由神经内分泌系统分泌的多肽能调控免疫系统的功能 ;反过来 ,免疫系统对神经内分泌系统也有调节作用。α -黑色素细胞刺激素 (α -ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ -ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ ,α -ＭＳＨ)是一种内源性神经免疫调节肽 ,是联系神经内分泌系统和免疫系统之间的一种分子。1　α -ＭＳＨ和它的受体　　α -ＭＳＨ是一种进化高度保守的 13肽 (Ｓｅｒ -Ｔｙｒ-Ｓｅｒ -Ｍｅｔ-Ｇｌｕ -Ｈｉｓ -Ｐｈｅ -Ａｒｇ -Ｔｒｐ -Ｇｌｙ -Ｌｙｓ -Ｐｒｏ -Ｖａｌ) ,其Ｃ末…     

甘氨酸和多粘菌素B拮抗内毒素活性及机制的研究

目的和方法：通过ＬＡＬ改良基质显色法和紫外光谱法观察了甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂体外拮抗内毒素的机制。结果：测定了各拮抗剂与内毒素中和后剩余内毒素的浓度（活性）,结果表明甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂组、多粘菌素Ｂ组和甘氨酸组均显著低于内毒素组（Ｐ＜０－０１）,并且甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂组显著低于单独使用多粘菌素Ｂ组和甘氨酸组（Ｐ＜０－０１）。从紫外光谱图上可看到两种拮抗剂中和内毒素的作用是明显不同的。多粘菌素Ｂ可以降低内毒素的吸收峰值（２０６ｎｍ和２５７ｎｍ处）,而甘氨酸与内毒素的吸收峰值则相加（２１２ｎ…     

精氨酸加压素对家兔血细胞生成内生致热原的影响

本文观察了精氨酸加压素对体外培育的兔全血细胞产生内生致热原的影响。结果表明，ＡＶＲ对内毒素诱生ＥＰ过程有明显抑制作用；而ＡＶＰ单独与血细胞培养无降温物质产生；同时，所用剂量的ＡＶＰ对ＥＰ性发热无直接抑制作用。因此作者认为，ＡＶＰ１能够抑制ＥＴ诱生家兔血细胞生成ＥＰ，这可能是其降低或阻断ＥＴ性发热的主要机制之一。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA 表达的影响

目的：观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响，探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法：用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平和给予α-MSH后对CD14和TLR4 mRNA表达的影响。结果：正常静息小鼠腹腔巨噬细胞只表达少量的CD14和TLR4 mRNA,给予LPS刺激后6 h，两者表达明显强于正常对照（P<0.01），并且其表达量随着LPS刺激时间的增加维持在高水平，24 h达到峰值，在48 h CD14 mRNA的表达降到正常水平，而TLR4 mRNA的表达仍然维持在高水平。在LPS刺激的同时给予α-MSH，CD14和TLR4 mRNA的表达则明显低于LPS组（P<0.05），而且α-MSH这种效应与其使用浓度有关，0.1 nmol/L α-MSH不影响LPS诱导的CD14和TLR4 mRNA的表达，而当α-MSH的浓度达到1、10、100 nmol/L则能显著影响CD14和TLR4 mRNA的表达（P<0.05），但各个浓度组之间的作用没有明显差别（P>0.05）。结论：α-MSH抗LPS的效应可能与其下调LPS信号转导通路关键受体CD14和TLR4 mRNA的表达有关，从而干扰LPS跨膜信号转导，阻碍巨噬细胞活化。