GANT61诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用及其机制

目的 研究Gli抑制剂GANT61诱导人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30凋亡的机制。方法 应用不同浓度（0、10、15 μmol/L）的GANT61处理OE21和KYSE-30细胞24 h后,Western blot观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2、Fas和Bcl-2蛋白表达的影响。流式细胞术观察细胞凋亡及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果 Western blot显示GANT61可以剂量依赖性显著下调OE21和KYSE-30细胞Gli1、Gli2和Bcl-2蛋白表达,增加Fas蛋白表达。流式细胞术检测显示不同浓度GANT61作用24 h后,OE21和KYSE-30细胞表现出不同程度的细胞凋亡并且呈药物剂量依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P=0.000）;与空白对照组相比,OE21和KYSE-30细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著降低且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义（P=0.000）; Fas蛋白表达水平显著增加且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义（P=0.000）。结论 GANT61明显诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其通过特异性抑制OE21和KYSE-30细胞中Gli1、Gli2表达从而调节Fas和Bcl-2蛋白表达有关。     

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞生长的抑制作用

目的 研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制。方 法 培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响。结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IC50值分别是8.6 μmol/L和8.2 μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性。Western blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Gli1和Gli2蛋白的表达。Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降。结论 GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Gli1和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点。     

组织型转谷氨酰胺酶对乳腺癌侵袭转移作用的研究

目的 探讨组织型转谷氨酰胺酶(transglutaminase type 2,tissue transglutaminase,TG2或tTG)对人乳腺癌细胞的侵袭转移能力作用及可能的机制.方法 构建TGM2的特异性慢病毒干扰载体(TGM2-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,实验设TGM2干扰组(RNAi)、空白组(Con)和阴性对照组(NC).实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TGM2 mRNA表达.细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁徙能力改变.蛋白质印迹检测MDA-MB-231细胞TG2、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein 9,MMP 9)和波形蛋白(Vimentin)的表达.选择2012 05-10-2014-07-29广西医科大学第一附属医院(46例)和江西省肿瘤医院(35例)病理确诊的81例乳腺浸润性导管癌患者,采用免疫组化检测TG2表达水平,分析其与淋巴结转移关系.结果 RT-PCR检测结果显示,Con组TGM2mRNA表达量为1,RNAi组TGM2 mRNA表达量为0.21±0.03,明显低于Con组的1,z＝-2.087,P＝0.036 9;明显低于NC组的0.94±0.05,z=-1.964,P=0.049 5.细胞侵袭实验显示,侵袭到滤膜下的细胞数RNAi组为42.33±4.04,低于Con组的93.50±7.42和NC组的87.25±5.74,z值均为-2.121,P值均为0.033 9.迁移到滤膜下的细胞数RNAi组为66.13±4.59,低于Con组116.75±7.82和NC组109.00±7.79(z值均为-2.309,P值均为0.020 9).蛋白质印迹检测结果显示,RNAi组、NC组和Con组TG2蛋白相对表达量分别为0.34±0.06、0.87±0.10和0.95±0.03,F=66.55,P＜0.001.RNAi组Vimentin相对表达量(0.45±0.05)低于NC组(0.89±0.07)和Con组(0.90±0.03)的相对表达量,F=80.56,P＜0.001.RNAi组、NC组和Con组MMP-9蛋白相对表达量分别为0.09±0.02、0.18±0.03和0.19±0.04,F=12.89,P=0.007.TG2表达水平与年龄、肿瘤分化程度和月经状态无显著相关性,P值均＞0.05;而与淋巴结转移(x2=14.750,P＜0.001)、ER表达水平(x2=11.632,P=0.001)和TNM分期(x2 =13.506,P＜0.001)相关.Spearman相关分析显示,TG2与Vimentin(r=0.337,P=0.002)和MMP-9(r=0.358,P=0.001)表达水平呈正相关.结论 TG2可能具有促进乳腺癌的侵袭转移作用,下调TG2表达水平可能是治疗肿瘤转移的新靶点.     

GANT61通过自噬性细胞死亡抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖

 目的 观察Hedgehog通路抑制剂GANT61对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 GANT61作用MCF-7细胞后,通过流式细胞术检测细胞死亡;提取处理细胞总RNA和蛋白。分别采用Real-timePCR和Western blot检测Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2及自噬标志物LC3-Ⅱ表达;处理细胞固定后通过电子显微镜观察GANT61诱导的自噬体形态;自噬抑制剂3-MA处理细胞或自噬相关基因atg5 siRNA转染细胞后再用GANT61作用,流式细胞术检测细胞死亡数量。结果 GANT61能明显诱导MCF-7死亡,降低Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2表达水平,提高LC3-Ⅱ蛋白表达,并可诱导MCF-7细胞产生自噬体。3-MA及atg5 siRNA可减弱GANT61诱导的细胞死亡。结论 GANT61通过诱导自噬性细胞死亡机制发挥抗乳腺癌细胞活性。     

钠氢交换蛋白1基因在体外对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭作用的影响

目的:观察钠氢交换蛋白1(Na+/H-exchanger 1,NHE-1)基因对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测NHE-1 mRNA及其蛋白在人食管癌EC-9706、KYSE-450、EC-1和KYSE-70细胞中的表达情况.将化学合成的靶向NHE-1的小干扰RNA (small interference RNA,si RNA)体外转染入KYSE-70细胞,实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测转染24、48和72 h后KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,MTT和Boyden小室法检测KYSE-70细胞的增殖及侵袭能力.结果:NHE-1 mRNA及其蛋白在KYSE-70细胞中高表达.与阴性对照(转染阴性对照siRNA)及空白对照(未转染的KYSE-70细胞)组相比,靶向NHE-1的siRNA可抑制KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05);与阴性对照组、空白对照组及NHE-1 siRNA转染24 h组比较,NHE-1 siRNA转染48和72 h后的KYSE-70细胞体外增殖能力和侵袭能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:干扰NHE-1基因的表达可以抑制食管癌KYSE-70细胞的体外增殖和侵袭能力,NHE-1基因有望成为食管癌基因治疗的重要靶点.     

Hedgehog信号通路转录因子Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达

目的 探讨Hedgehog信号通路转录因子脑胶质瘤相关癌基因l(gli1)蛋白在结直肠癌组织中的表达及作用.方法 免疫组化法检测Gli1蛋白在147例手术切除结直肠癌组织中的表达;Western blotting法检测Glil蛋白在19例结直肠癌新鲜组织和2个结肠癌细胞系中的表达;同时用共聚焦激光显微镜观察Gli1转录水平的抑制剂GANT61对8例直肠癌组织中直接分离的肿瘤细胞的影响.结果 147例结直肠癌根治切除标本中,Gli1蛋白在78.2％(115/147)的结直肠癌组织中表达升高,阳性信号表达在肿瘤细胞的细胞核和细胞浆.Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌浸润前缘肿瘤细胞团数目、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05).在5例Glil蛋白阳性的结直肠癌组织中,间质细胞,包括肿瘤相关纤维母细胞和内皮细胞内高表达Gli1蛋白.Gli1蛋白在结直肠癌组织和2个结肠癌细胞系中的表达也升高.对结直肠癌组织中直接分离出的肿瘤细胞,培养以后加入GANT61,可以明显抑制肿瘤细胞内Gli1蛋白的表达,而对肿瘤相关纤维母细胞没有显著影响.结论 Gli1蛋白的活化可能增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力,从而促进结直肠癌的进展;GANT61可能为进展期结直肠癌的治疗提供新的契机.     

MiR-124对食管癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

摘 要：［目的］检测miR-124及其靶基因CREB1在食管癌组织中的表达情况，探讨miR-124/CREB1在人食管鳞癌细胞KYSE-150体外增殖和侵袭中的作用及机制。［方法］ 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测32例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及周围正常组织的miR-124和CREB1表达。Targetscan分析miR-124与CREB1的结合位点，荧光素酶基因报告实验验证miR-124 与CREB1是否结合；过表达或抑制miR-124后，采用Western blot检测KYSE-150细胞中CREB1的表达；在KYSE-150细胞中转染miR-124 mimic为miR-124 mimic或转染miR-124抑制剂为anti-mi-R124，转染后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染24h后通过体外侵袭实验检测过表达或抑制miR-124对KYSE-150细胞侵袭的影响。在KYSE-150细胞中转染CREB1 siRNA后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染CREB1 siRNA 24h后检测KYSE-150细胞侵袭能力的变化；在KYSE-150细胞中共同转染anti-miR-124和siCREB1，检测细胞增殖和侵袭能力变化情况。［结果］ MiR-124在食管癌组织表达降低(P<0.001)，而CREB1在食管癌组织中表达升高(P<0.001)；CREB1是miR-124下游分子，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞中CREB1的表达(P=0.016)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞中CREB1的表达(P<0.001)。在食管癌细胞中，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)；敲低CREB1抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)。敲低CREB1可抑制anti-miR-124对KYSE-150细胞增殖和侵袭的促进作用(P均<0.05)。［结论］过表达miR-124通过靶向CREB1抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。     

乳腺癌组织ER与Hedgehog信号通路分子相关性

目的 探讨乳腺浸润性导管癌中雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达与Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch之间的关系及临床意义.方法 收集2012-01-01-2013-01-30滨州医学院附属医院甲乳外科手术切除60例ER阳性和60例ER阴性乳腺浸润性导管癌标本,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch mRNA和蛋白的表达情况,分析其相关性及临床意义.结果 RT-PCR检测结果显示,ER阳性组Gli1 mRNA表达量为1.05±0.27,ER阴性组中为2.70±0.26,差异有统计学意义,t=20.751,P＜0.01;ER阳性组Ptch mRNA表达量为1.04±0.29,ER阴性组中为2.34±0.35,差异有统计学意义,t=18.413,P＜0.01;蛋白质印迹法检测结果显示,ER阳性组中Gli1蛋白表达量为0.43±0.007,ER阴性组中为0.71±0.011,差异有统计学意义,t＝11.086,P＜0.01;ER阳性组Ptch蛋白表达量为0.36±0.008,在ER阴性组中为0.58±0.012,差异有统计学意义,t=16.437,P＜0.01.Gli1和Ptch与ER阴性患者的年龄和肿瘤大小无关,P值均＞0.05;Gli1(x2＝16.33,P＜0.001)和Ptch(x2＝24.33,P＜0.001)与TNM分期存在相关性;Gli1(x2=6.50,P＜0.05)和Ptch(x2 =5.09,P＜0.05)与腋窝淋巴结转移存在相关性.结论 在ER阴性乳腺浸润性导管癌中,Hedgehog信号通路呈明显活化状态,可能与TNM分期与腋窝淋巴结的转移有关,阻断Hedgehog信号通路可能成为治疗ER阴性乳腺癌的新靶点.     

肾透明细胞癌组织SMO表达与肾癌细胞增殖和凋亡的相关性

目的 Hedgehog信号通路参与了肿瘤的发生发展,本研究探讨该通路关键信号分子Smoothened(SMO)在肾透明细胞癌中的表达及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 选取2012-01-01-2013-06-30青岛大学附属医院泌尿外科,行手术治疗的80例肾透明细胞癌患者的临床及病理资料,采用免疫组织化学方法检测SMO在肾透明细胞癌组织中的表达并分析其与临床病理特征间的关系.采用小干扰RNA下调SMO在人肾癌细胞786-O中的表达,分别应用CCK-8法、流式细胞术及蛋白质印迹法检测下调SMO表达对细胞增殖、凋亡及Gli1和Gli2表达的影响.结果 SMO在73例(91.25％)肾透明细胞癌组织中有表达,其在高级别肾癌中表达(80.49％)较低级别(56.41％)显著升高,x2 =5.39,P=0.02.RT-PCR 检测结果显示,SMO在人肾癌细胞系786-O中表达量为0.704±0.059;蛋白质印迹结果显示,SMO在786-O中表达量为0.651±0.074.在786-O细胞中应用小干扰RNA沉默SMO表达后,实验组细胞相较于对照组其活力百分比在48、72和96 h分别为92.7％、80.9％和79.9％,3个时间点差异有统计学意义(P=0.003),细胞凋亡显著增加,t=-29.2,P＜0.001;与空白对照组和阴性对照组相比,其下游分子Gli1和Gli2蛋白表达明显减少(Gli1:3.2 vs 2.9 vs1;Gli2:2.5 vs 2.1vs 1).结论 SMO可能通过调控细胞增殖和凋亡,以及调节Gli蛋白表达参与了肾癌的发生发展.     

X线反复照射人食管鳞癌细胞系KYSE-150的生物效应研究

目的 建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞系,并检测肿瘤干细胞标志物的表达,以期了解肿瘤干细胞与放射抗拒性形成之间的关系.方法 分次照射建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞系KYSE-150R,在相差显微镜下观察细胞形态学差异,用G显带法进行染色体分析.用成克隆实验验证KYSE-150和KYSE-150R细胞的放射敏感性差异,流式细胞术检测它们的细胞周期分布,Western Blotting法检测它们中肿瘤干细胞(CSCs)标志物β-catenin和Integrin-β_1的表达.结果 KYSE-150R细胞的群体倍增时间长于亲代细胞KYSE-150[(25.90±0.55)h:(23.62±0.23)h,t=6.62,P=0.00].KYSE-150R细胞的染色体数目增加,并观察到染色体畸变.KYSE-150R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于KYSE-150细胞,Dn值比为1.21.流式细胞仪分析显示KYSE-150细胞照射后S期比例增加(45.35%±4.03%:55.09%±1.70%,t=-3.86,P=0.02),G_2+M期比例下降(9.91%±3.83%:1.15%±0.32%,t=3.95,P=0.02),而KYSE-150R则变化不大.Western Blotting结果 显示KYSE-150R中的β-catenin和Integin-β_1的表达量约为KYSE-150细胞的2倍.结论 新细胞系KYSE-150B比其亲本更具放射抗拒性,其含有的CSCs比例也较其亲本高,证明CSCs与放射抗拒性产生机制有关.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

胰腺实性假乳头状瘤7例临床病理特征并文献复习

目的探讨胰腺实性假乳头状瘤（SPTP）的临床病理特征以及免疫组化特点。方法对7例SPTP进行临床、组织病理、免疫表型的观察并复习相关文献。结果 7例SPTP,男女之比为2∶5,平均年龄34岁,仅3例有临床症状。6例发生于胰腺,有1例发生在胰腺外。肿瘤均呈囊实性;组织学上肿瘤细胞形态较一致,呈巢状排列,并形成假乳头状结构,部分瘤细胞呈透明细胞样细胞改变;间质黏液样变性、异物巨细胞反应及胆固醇样结晶。免疫组化结果显示：瘤细胞Vimentin、AAT呈强阳性,EMA均呈阴性;部分病例NSE、Syn、CgA、CD56、CD10、、AE1/AE3、PR局部阳性。4例术后随访30～114个月,患者均未发现复发及转移。结论 SPTP少见,多见于年轻女性,以实性、假乳头结构为主要组织学特征,并伴有其它多种组织学结构及多向分化的免疫组化表型。免疫组织化学检测结果对SPTP诊断具有重要价值,AAT、Vimentin阳性是诊断SPTP的可靠依据。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。