siRNA抑制HPV18 E6基因及其对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究特异小干扰RNA(sm all interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap-illom avirus,HPV)18型E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法针对HPV18E6基因设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,利用L ipofectam ineTM2000脂质体转染HeLa细胞,在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR测定HPV18E6 mRNA变化。结果转染siRNA后细胞活力受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,72 h的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示,细胞转染24、48和72 h后HPV18E6 mRNA分别减少了57%、78%和40%,而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

RNA干扰对宫颈癌细胞中E6AP基因的影响及其意义

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对宫颈癌细胞系HeLa细胞E6AP基因表达及细胞增殖和凋亡的影响.方法 实验分为3组:空白对照组(未经转染的HeLa细胞)、转染阴性对照的小干扰RNA(siRNA)组及转染特异性E6AP siRNA组.采用半定量RT-PCR技术、Western blot方法 检测E6AP mRNA、蛋白表达水平,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞增殖状况,用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 转染E6AP siRNA 24、48、72 h后,E6AP siRNA组E6AP mRNA表达水平与对照siRNA组比较下降33%、72%、70%.Western blot结果 显示,在转染48及72 h,E6AP蛋白表达下降38%、59%.MTT法检测显示,转染HeLa细胞24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低,E6AP siRNA组与空白对照组(F=101.38,P＜0.05)、对照siRNA组(F=38.64,P＜0.05)比较,差异均有统计学意义.E6AP siRNA作用24、48、72 h后E6AP siRNA组凋亡率明显高于对照siRNA组(F=41.48,P＜0.05)和空白对照组(F=86.36,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 体外合成的siRNA能有效封闭宫颈癌细胞中E6AP基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞的凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据.     

特异siRNA抑制宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒16型E6表达的研究

目的 优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA，抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响。方法 选择4个分别针对HPV-16 E6 mRNA外显子和内含子序列为靶序列，合成DNA链，构建表达HPV-16 E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1．0-U6载体，导入HPV-16DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中，观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化，并观察细胞生长被抑制的情况。结果 4种HPV-16 E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率。通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96h内，可降低细胞生长速度。荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低，其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平。Western blot分析表明，4个HPV-16 E6 siRNA作用72h后，未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16 E6蛋白。结论 HPV-16 E6 siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢；选择针对E6内含子的siRNA作用位点，特异性抑制E6表达；而针对E6外显子的siRNA作用位点，可抑制E6和E7基因的表达，是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位。     

短发夹状RNA特异性抑制HeLa细胞的Hax-1基因表达

目的:构建靶向Hax-1基因的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体pGenesil-Hax-1,并探讨siRNA靶向抑制Hax-1基因表达的作用。方法:根据shRNA设计的原则,在Hax-1全长序列中选取含19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pGenesil-1中,获得可靶向抑制Hax-1基因的重组shRNA表达载体。采用LipofectamineTM2000转染试剂将pGenesil-Hax-1导入HeLa细胞中;分别采用RT-PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平上检测干扰效果。结果:半定量PCR及Western blot结果表明,siRNA可使Hax-1mRNA的转录水平得到显著抑制(P<0.01),Hax-1蛋白的表达较对照组减少约70%。结论:靶向Hax-1基因的重组shRNA表达载体pGene-sil-Hax-1介导的siRNA可显著抑制Hax-1基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达。     

靶向VEGF165 RNA干涉对HeLa细胞凋亡的影响

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是指序列特异性的转录后基因沉默,它已经发展成为高效、特异阻断目的基因表达的有效工具[1].据此,我们针对人VEGF165基因mRNA序列,设计了2个干涉靶位点,体外转录合成siRNA,通过脂质体转染入HeLa细胞,分别体内、体外观察对HeLa细胞凋亡的影响.     

hAFP及hTERT双启动子调控的针对人IGF-II基因的siRNA特异性抑制人肝癌细胞生长

 目的：设计并筛选高效沉默胰岛素样生长因子II（IGF-II）基因的小干扰RNA（siRNA）序列,构建由重组人甲胎蛋白（hAFP）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）双启动子调控的该siRNA表达载体,观察其对肝癌细胞生长的影响。方法：根据siRNA设计原则,参照IGF-II mRNA序列设计3对siRNA序列及1对阴性对照序列,转染人肝癌Huh7细胞,转染24 h后采用实时荧光定量PCR检测IGF-II mRNA表达量变化,筛选干扰效率最高的siRNA序列。采用PCR扩增出hAFP及hTERT启动子的核心序列,应用基因重组技术构建重组hAFP和hTERT双启动子调控的该siRNA表达载体。将上述siRNA表达载体转染Huh7细胞及L-02人正常肝细胞,观察IGF-II mRNA表达及细胞生长情况变化。结果：实时荧光定量PCR显示,siRNA3在25 nmol/L浓度时抑制效率最高,约90%。成功扩增hAFP及hTERT启动子核心序列,将其分别克隆入pGL3-Basic载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT载体;将siRNA3克隆至pGL3-hAFP-hTERT载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3表达载体。Huh7细胞IGF-II mRNA表达量显著降低,抑制效率达86%,细胞增殖受到明显抑制,G1期细胞比例显著增加;L-02细胞上述指标无明显改变。结论: 成功构建双重RNA聚合酶II启动子（hAFP及hTERT双启动子）调控的针对IGF-II基因的siRNA表达载体,即pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;该siRNA表达载体可特异性抑制IGF-II mRNA表达及肝癌细胞生长。     

应用RNA干扰技术抑制人胃癌细胞环氧合酶-2基因的表达研究

目的 研究应用RNA干扰技术进行抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2的表达研究。方法 依据siRNA设计原则，针对人COX-2的mRNA序列，设计并合成3条21bp的双链RNA，瞬时转染人胃癌细胞SGC-7901，Western blot验证基因沉默效率以筛选合适的siRNA序列；根据筛选出的有效序列，合成编码短发卡RNA的双链寡核苷酸，定向克隆到含有U6 RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer? 2.1-U6 neo 真核表达载体，稳定转染胃癌细胞SGC-7901中，经G418筛选，获得克隆细胞。 结果 筛选出一条有效的干扰序列，位于291-311bp，成功构建表达载体，COX-2在蛋白水平的表达明显被抑制。结论：利用化学合成siRNA进行初筛，再构建shRNA表达载体，可快速实现目的基因的表达抑制。     

survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究

目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论siRNA．survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。     

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其下调凋亡因子caspase-9效应的研究

构建自噬基因Beclin 1的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,脂质体包裹后体外转染人宫颈癌HeLa细胞株,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响,并检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡情况以及凋亡因子caspase-9 mRNA及蛋白表达的变化。结果表明shRNA真核表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染后细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低,并伴有caspase-9 mRNA及蛋白量的显著下调。因此,Beclin 1不仅与自噬调控通路有关,而且可以调控凋亡的发生,同时参与两种程序性细胞死亡的过程。     

靶向hTERT RNA干涉促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的：利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达，探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法：将成功构建的针对hTERT的siRNA(small interferencing RNA)表达载体转染HeLa细胞，通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细胞的凋亡情况。结果：构建的siRNA表达载体可以诱导HeLa细胞发生凋亡。结论：针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体稳定转染HeLa细胞，可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

沉默Smo基因对人宫颈癌HeLa细胞活力及凋亡的影响

目的:使用RNA干扰技术沉默Smoothened(Smo)基因,探讨其对宫颈癌He La细胞活力和凋亡的影响。方法:采用Smo shRNA转染宫颈癌He La细胞;采用RT-PCR和Western blot技术检测各组He La细胞Smo和转录因子Gli1的mRNA和蛋白表达;采用MTT比色法测定沉默Smo后细胞生长的情况;流式细胞术检测Smo shRNA对细胞周期和凋亡的影响。结果:与对照组比较,Smo shRNA转染细胞72 h后,Smo和Gli1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。Smo基因沉默后,He La细胞的活力明显降低,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高。结论:沉默Smo基因可有效抑制人宫颈癌He La细胞生长,并诱导其凋亡。     

RNA干扰沉默Aurora A基因表达对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制人胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞增殖及凋亡的影响。 方法 设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blotting检测Aurora A mRNA和蛋白的表达情况,同时利用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和流式细胞仪观察转染后U251细胞增殖抑制率和细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变。 结果 转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;U251细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率显著增高 (P<0.01),且U251细胞发生了显著的凋亡形态改变。 结论 体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功地抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能抑制胶质瘤细胞增殖、促进凋亡,提示Aurora A可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

RNA干扰CREB对缓激肽作用的胶质瘤细胞IL-1β分泌的影响

目的探讨转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的磷酸化是否介导了缓激肽刺激大鼠C6胶质瘤细胞内白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,以CREB为靶基因,将体外化学合成的CREB序列特异性双链小干扰RNA(siRNA)和无关序列的siRNA分别与Lipofectamine2000结合后转染细胞,用Western blot分析CREB蛋白的表达水平。利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量技术和放射免疫法分别检测CREB siRNA转染前后,缓激肽诱导C6胶质瘤细胞IL-1βmRNA及细胞培养上清液中IL-1β的表达水平。结果CREB序列特异性siRNA转染细胞72h后,可较强的抑制CREB蛋白的表达,而无关序列的siRNA对CREB蛋白表达水平无明显的抑制作用。RT-PCR和放射免疫法结果均显示CREBsiRNA干预C6细胞后,并未改变缓激肽刺激IL-1β表达的能力。结论化学合成的siRNA可有效抑制C6胶质瘤细胞中CREB的表达,CREB可能未参与缓激肽刺激C6细胞IL-1β表达的信号转导过程。     

RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

 目的：通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法：组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝（MTT）比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间（24、48和72 h）RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果：荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%（P<0.01）。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%（均P<0.01）。MTT结果显示,早期（24和48 h）RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%（P<0.01）。结论：转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。     

siRNA沉默Ikaros基因对K562细胞中γ珠蛋白表达的影响

目的:通过siRNA干扰靶基因Ikaros,观察人红白血病细胞株K562细胞中γ珠蛋白的表达变化。方法:设计合成三条针对Ikaros的siRNA寡核苷酸序列,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染siRNA至K562细胞,采用RT-PCR方法筛选出最佳siRNA序列和最佳干扰时间。运用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测siRNA沉默Ikaros后K562细胞Ikaros和γ珠蛋白mRNA及蛋白的表达水平,应用联苯胺染色法检测siRNA沉默Ikaros后K562细胞内血红蛋白(Hb)含量。结果:筛选试验表明siRNA3的转染效率最高,达58.7%,siRNA3对Ikaros基因抑制率最高(86.7%),其最佳干扰时间为72h。应用siRNA3沉默Ikaros基因可以上调γ珠蛋白mRNA和蛋白的表达水平,增加K562细胞内Hb含量。结论:siRNA3沉默Ikaros上调γ珠蛋白mRNA和蛋白表达,可能成为治疗重型β-地中海贫血的一种新策略。     

TNFAIP3 siRNA对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY1细胞NF-κB活性及增殖的影响

目的探讨A20(TNFAIP3)基因对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞生长的影响及其与细胞内核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化的关系。方法采用RNA干扰技术沉默A20,设计3条针对人A20mRNA的siRNA序列,经过lipofectamine RNAiMAX转染至OCI-LY1细胞(DLBCL细胞),用RT-PCR技术检测转染后OCI-LY1细胞内A20 mRNA的表达,用Western blot法检测A20和NF-κB(p65)蛋白的表达。用MTT法检测A20基因沉默后OCI-LY1细胞体外生长活力变化。结果 (1)siRNA转染组A20 mRNA及编码蛋白表达较未转染组及阴性对照组明显降低(P0.05);(2)转染组p65蛋白的表达较未转染组和阴性对照组明显增高(P0.05);(3)转染组细胞较未转染组、阴性对照组的OCI-LY1细胞体外生长活力明显增强。三组siRNA序列中siRNA-2序列干扰效果最明显。结论 DLBCL细胞中A20基因沉默会导致NF-κB活性增强,从而增强淋巴瘤细胞的生长活力。     

肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。     

CHK1shRNA抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡

目的：构建针对CHK(checkpoint kinase，细胞周期检测点激酶)1基因的短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA），观察其对高表达〖STBX〗CHK1〖STBZ〗的宫颈癌细胞系-HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响。方法：〖HTSS〗 设计并合成了针对CHK1的shRNA，将其导入本室构建的携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的RNAi（RNA interference，RNA干扰）表达载体中。通过 RT-PCR和Western blotting分别检测HeLa细胞CHK1基因和蛋白水平的表达，以流式细胞仪测细胞凋亡，MTT法检测细胞的增殖。结果：〖HTSS〗 成功构建了携带EGFP的RNAi表达载体pEGFP-H1。与对照组和空载体转染组相比, shRNA使细胞中〖STBX〗CHK1〖STBZ〗 mRNA水平下降了66％，蛋白水平下降了60％。此外，shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显高于对照组，其增殖活性则明显低于对照组。结论：〖HTSS〗 本课题构建的RNAi表达载体便于观察靶基因的转染情况，且不影响H1启动子的体内转录。CHK1shRNA能诱导HeLa细胞凋亡，抑制该细胞的增殖，为进一步研究〖STBX〗CHK1〖STBZ〗在肿瘤治疗中的作用机制提供了实验基础。     

RNA干扰阻抑Bax inhibitor-1(bi-1)基因表达对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的： 研究RNA干扰(RNAi)效应对人卵巢癌细胞株HO8910PM和HO8910中bi-1基因表达的抑制作用和凋亡诱导作用。 方法： 把表达bi-1 shRNA的各重组干扰质粒转染到HO8910PM和HO8910细胞中,RT-PCR和Western blotting法检测bi-1基因mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术和Hoechst 33258/PI荧光染色检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果：与对照组细胞相比较,转染4种候选干扰质粒组细胞中bi-1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降（P<0.05）,以转染pmU6-b4组细胞的表达抑制率最高,在HO8910PM细胞中的抑制率分别为 (45.50±3.04）%和(51.08±4.96）%,在HO8910细胞中的抑制率分别为 (37.29±3.69）%和(44.96±4.28）%;流式细胞术结果表明,与对照组细胞相比较,转染pmU6-b4质粒24 h、48 h、72 h、96 h的HO8910PM细胞中亚二倍体峰比值明显升高 (P<0.05),以转染72 h组细胞的比值最高,达到 (25.89±5.63）%,而HO8910细胞中无亚二倍体峰出现;荧光显微镜下可见转染pmU6-b4质粒72h的HO8910PM细胞出现细胞核缩小、染色质固缩和核断裂,而HO8910细胞核无明显变化。 结论： 针对bi-1的siRNA能特异有效地下调HO8910PM和HO8910细胞中bi-1基因的表达,不同序列特异性的siRNA下调bi-1基因表达的能力不同;瞬时转染质粒pmU6-b4能有效诱导HO8910PM细胞凋亡,但不能诱导HO8910细胞凋亡。     

RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

目的：探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法：构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体质粒pRNAT—U6．1-Caspase-3shRNA，用电穿孔法转染RK3E细胞，经G418筛选后，形成稳定的表达Caspase-3shRNA的细胞系。实验分为3组：①正常对照组：未转染的RK3E细胞；②阴性对照组：转染空载体pRNAT-U6．1的RK3E细胞系；③实验组：转染Caspase-3shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖（LPS）孵育12小时后，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，RT-PCR检测mRNA的表达，以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果：与正常对照组和阴性对照组相比，实验组的细胞凋亡率显著降低（P〈0．01），Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低（P〈0．01）。结论：针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默，进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。