基质金属蛋白酶-3在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的：研究基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3,MMP-3）在原发性干燥综合征（primary Sjogren’s syndrome,pSS）患者唇腺组织中的表达情况。方法：收集24例pSS患者和14例对照组的唇腺标本,提取唇腺中总RNA,利用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增MMP-3、β-肌动蛋白（3-actin）的片段,计算MMP-3／β-actin吸光度比值。免疫组织化学染色方法检测MMP-3蛋白在唇腺中的表达情况。结果：pSS组唇腺中MMP-3的mRNA转录及蛋白表达水平均高于对照组（P〈0．05）。MMP-3蛋白主要分布在腺体导管上皮细胞胞浆内。结论：pSS患者唇腺中MMP-3表达增加,可能是唇腺结构破坏的原因之一。     

骨桥蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的：研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在原发性干燥综合征（primary Sjgren’s syndrome,pSS）患者唇腺组织中的表达情况。方法：收集24例pSS患者和14例对照者的唇腺标本,提取唇腺中总RNA,利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增OPN、β-肌动蛋白（β-actin）的片段,计算OPN/β-actin光密度比值。采用免疫组织化学染色方法检测OPN蛋白在唇腺中的表达情况。结果：pSS组唇腺中OPN的mRNA转录及蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05）。OPN表达水平与淋巴细胞灶性评分(lymphocyte foci-score, LFS)呈正相关,mRNA转录水平与LFS相关系数为0.407（Pearson相关系数）,P=0.049;蛋白表达程度与唇腺LFS相关系数为0.476（Spearman相关系数）,P=0.039。免疫组织化学染色显示,OPN蛋白主要分布在腺上皮细胞胞浆内,但在浸润的淋巴细胞胞浆中也有阳性表达。结论：pSS患者唇腺中OPN表达增加,可能是唇腺结构破坏的原因之一。     

TLR4、CD14在干燥综合征患者唇腺组织中的表达及临床意义

目的:探讨干燥综合征患者唇腺组织分泌功能损伤与TLR4、CD14的关系。方法:通过对干燥综合征患者唇腺组织进行免疫组化和逆转录聚合酶链式反应,来检测其中TLR4、CD14蛋白和mRNA的表达。结果:(1)TLR4和CD14在干燥综合征组唇腺组织中表达明显增高,对照组唇腺组织中未见TLR4、CD14表达;(2)按照病理分级,TLR4、CD14表达的阳性率分别为0~1级62.5%,2级70.0%,3级75.0%,4级58.3%,各组间TLR4、CD14表达阳性率差异均有统计学意义(P0.05);(3)约64.4%PSS唇腺组织导管上皮细胞有TLR4、CD14的表达,在淋巴细胞灶中67.8%的淋巴细胞表达TLR4、CD14,但差异无统计学意义(P0.05);(4)TLR4、CD14 mRNA在干燥综合征组唇腺组织中的表达明显高于对照组(P0.05)。结论:TLR4、CD14在干燥综合征唇腺组织中高表达,干燥综合征唇腺组织分泌功能的损伤,可能与外源性感染启动TLR4、CD14信号传导通路有关;在干燥综合征发病机制中,导管上皮细胞主动参与了免疫损伤过程。     

pSS患者血清TNF-α、TGF-β1水平与唇腺淋巴细胞浸润程度及ILD的相关性研究

目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)患者外周血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平与患者唇腺淋巴细胞浸润程度及肺间质病变(ILD)的相关性.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定116例pSS患者及20例健康体检者(对照组)血清TNF-α、TGF-β1水平,同时对pSS患者唇腺标本进行病理检测.根据肺间质纤维化病变分期及唇腺病理分级将116例pSS患者分为单纯pSS组(n=68)、pSS-ILD组(n=48)及无浸润组(n=36)、浸润组(n=80),对血清TNF-α、TGF-β1水平进行统计学分析.结果 pSS-ILD组患者血清TNF-α、TGF-β1水平明显高于单纯pSS组和对照组(P＜0.01),单纯pSS组患者血清TNF-α、TGF-β1水平明显高于对照组(P＜0.01);唇腺淋巴细胞浸润组患者血清TNF-α、TGF-β1水平明显高于无唇腺淋巴细胞浸润组和对照组(P＜0.01),无唇腺淋巴细胞浸润组患者血清TNF-α、TGF-β1水平明显高于对照组(P＜0.01).TNF-α、TGF-β1表达与淋巴细胞浸润灶分级及肺间质纤维化病变分期呈正相关(r=0.867、0.613、0.814、0.864,P=0.000);TNF-α与TGF-β1的相对表达量呈正相关(r=0.857,P=0.000).结论 TNF-α、TGF-β1参与了pSS患者唇腺淋巴细胞浸润及ILD的发生、发展,二者表达增加可能是pSS患者唇腺结构破坏及合并ILD的原因.     

骨桥蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的:研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome,pSS)患者唇腺组织中的表达情况。方法:收集24例pSS患者和14例对照者的唇腺标本,提取唇腺中总RNA,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增OPN、β-肌动蛋白(β-actin)的片段,计算OPN/β-actin光密度比值。采用免疫组织化学染色方法检测OPN蛋白在唇腺中的表达情况。结果:pSS组唇腺中OPN的mRNA转录及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。OPN表达水平与淋巴细胞灶性评分(lymphocyte foci-score,LFS)呈正相关,mRNA转录水平与LFS相关系数为0.407(Pearson相关系数),P=0.049;蛋白表达程度与唇腺LFS相关系数为0.476(Spearman相关系数),P=0.039。免疫组织化学染色显示,OPN蛋白主要分布在腺上皮细胞胞浆内,但在浸润的淋巴细胞胞浆中也有阳性表达。结论:pSS患者唇腺中OPN表达增加,可能是唇腺结构破坏的原因之一。     

干燥综合征病人小涎腺中细胞因子的表达

探讨５种细胞因子在干燥综合征（ＳＳ）病人自身免疫性小涎腺炎的发生和破坏过程中的作用。方法取２４例唇腺活检标本，常规石蜡包埋保存、切片，用酶标记双重原位杂交方法对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ＩＬ－１β）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、血小板衍化生长因子α（ＰＤＧＦα）和ＰＤＧＦβ等５种细胞因子的ｍＲＮＡ表达进行检测。结果ＳＳ病人唇腺中所有细胞因子的表达均高于对照组。原发ＳＳ组唇腺的ＴＮＦα的表达强度明显高于继发ＳＳ组。炎症不同时期细胞因子表达的种类不同。同时表达两种细胞因子的细胞仅见于唇腺中浸润的单个核细胞。腺泡上皮细胞中表达ＴＮＦα发生在间质淋巴细胞浸润之前。病人唇腺中ＩＬ－６阳性者血清中的ＡＮＡ阳性率显著高于阴性者。结论原发ＳＳ的发病过程可能是某些始动因子活化了易感人群的腺泡上皮细胞，使之分泌ＴＮＦα。ＴＮＦα又引起ＩＬ－１等细胞因子的表达，导致小涎腺的炎症和破坏。     

pDC、TLR7、TLR9在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达

目的 检测浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC),Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR 7),Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR 9)在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达情况。 方法 采用免疫组织化学法检测2018年1月—2019年12月昆明医科大学第二附属医院风湿免疫科门诊及住院部25例确诊为原发性干燥综合征的女性患者唇腺组织中pDC特异性抗原CD123及TLR7、TLR9的表达,在低倍镜下(10×20)随机选取4个视野利用Image-Pro Plus 6.0软件和SPSS 17.0软件进行统计分析。 结果 pSS患者唇腺组织中可见pDC、TLR7、TLR9阳性细胞主要分布于主要分布于腺泡、腺导管上皮细胞、淋巴细胞浸润灶。CD123+ pDC表达(3.47±0.26)%高于正常对照组(2.36±0.15)%;TLR7(2.06±0.37)%高于正常对照组(0.14±0.05)%;TLR9(1.80±0.26)%高于正常对照组(0.84±0.08)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。 结论 pDC、TLR 7、TLR 9在pSS患者的唇腺组织(腺导管和腺泡的上皮细胞)及淋巴细胞浸润灶内高表达。      

干燥综合征患者唇腺活检病理表现及其意义

目的探讨干燥综合征患者的唇腺活检病理表现及其在诊断中的意义。方法对我院93例确诊干燥综合征患者的唇腺活检病理标本进行分析。结果发现主要病理改变为腺小叶及导管周围灶性淋巴细胞浸润（一个灶：≥50个淋巴细胞/4mm2）,腺泡破坏、萎缩,导管扩张,纤维结缔组织增生,脂肪浸润。以≥1个灶/4mm2为阳性标准,唇腺活检的阳性率为59.1%。30岁以下和31～40岁组患者的诊断阳性率较高,分别为83.3%和71.4%。结论唇腺活检是诊断干燥综合征的必要检查,尤其对年轻患者有更高的敏感度,对该疾病的诊断有举足轻重的意义。     

白细胞介素-1在合格林综合征病变中的作用

目的：探讨舍格林综合征（SS）患者唇腺组织中的淋巴细胞过度浸润及激活与白细胞介素-1（IL-1）的关系。方法：通过HE染色观察淋巴细胞的浸润，采用免疫组织化学法检测IL—1蛋白的表达，运用图像分析技术对结果进行定量分析。结果：唇腺组织中的IL—1蛋白表达与淋巴细胞浸润密切相关；淋巴细胞浸润密集的组织，炎症浸润广泛，导管上皮增生与腺泡破坏显著。结论：与IL-1细胞因子相关的淋巴细胞浸润与激活促进了SS的发展。     

MMP-9、LN与CD147在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、层黏连蛋白（LN）、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN/CD147,CD147）在原发性干燥综合征（PSS）发病过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测52例PSS患者、30例正常对照组唇腺中MMP-9、CD147表达及分布情况。结果52例PSS患者唇腺组织中MMP-9、CD147高表达于导管、腺泡上皮细胞及淋巴细胞浸润灶,高于正常对照组（P〈0.05）,并且随着淋巴细胞浸润灶数的增加而表达随着增强;LN在PSS组的表达明显低于正常对照组（P〈0.01）,且随淋巴细胞浸润灶数的增加,表达呈递减趋势;PSS患者唇腺组织中MMP-9与CD147的表达呈正相关,MMP-9与LN两者的表达呈负相关（P〈0.01）。结论MMP-9、LN、CD147在PSS患者唇腺组织中存在异常表达,两者的表达情况与病理分级相关。     

脂多糖对干燥综合征患者唇腺上皮细胞表达TLR4及CD14的影响

目的 探讨LPS-TLR4-CD14信号传导通路在干燥综合征(sjogren's syndrome,SS)发病机制中的作用。 方法 选择解放军第285医院风湿科2015年3月-2016年3月收治SS患者7例为研究组;另5例排除SS诊断,且无其他疾病的作为对照组。①取患者唇腺组织进行体外培养,一周后采用抗细胞角蛋白19的单克隆抗体PAP法对新生细胞和唇腺组织细胞进行染色,以鉴定新生细胞来源。②分别于培养成功的新生细胞PSS组和对照组加入浓度为1 μg/ml的内毒素(lipopolysaccharide,LPS),在继续培养后1、8、12、24、48、72 h时间点提取细胞总RNA,采用RT-PCR法分别检测不同时间点TLR4、CD14 mRNA的表达。③对新生细胞pSS组分别加入浓度为1、10、100、103、104、105 ng/ml的LPS,对照组不加LPS,继续培养24 h后分别检测TLR4和CD14 mRNA表达。 结果 ①结果显示新生细胞和唇腺组织中导管上皮细胞染色为阳性反应,唇腺组织中的淋巴细胞、腺泡细胞呈阴性反应,证明本次培养的新生细胞来源于唇腺组织的导管上皮细胞。②在新生细胞中加入LPS,作用1 h后TLR4和CD14 mRNA表达增强,分别于8、12 h后达高峰期,作用72 h后明显下降。③浓度为1 ng/ml的LPS即可引起PSS组新生细胞TLR4和CD14 mRNA表达显著增高,随着LPS浓度的增高,TLR4和CD14 mRNA表达持续升高,当LPS浓度达到104 ng/ml以上时,TLR4和CD14 mRNA表达呈平台期,变化不显著。 结论 经LPS刺激后,唇腺导管上皮细胞高表达TLR4和CD14 mRNA,且反应在一定范围内呈时间、浓度依赖性,由此推断LPS-TLR4-CD14信号转导通路参与了SS的发病机制,进而揭示感染与SS发病有关。      

趋化因子RANTES及MIP-1α在肾移植术后急性排斥反应中的作用

目的探讨趋化因子RANTES及MIP-1α表达在肾移植术后急性排斥反应中的作用.方法采用RT-PCR法分析57例肾移植术后发生急性排斥反应患者及19例未发生反应患者移植肾活检组织中RANTES和MIP-1α的基因表达.结果19例无急性排斥反应肾活检组织中仅4例(21%)轻度表达RANTES,5例(26%)轻度表达MIP-1α.57例急性排斥反应肾活检组织中38例(66.7%)强烈表达RANTES,14例轻度表达,5例无表达;41例(72%)强烈表达MIP-1α,14例轻度表达,2例无表达,两组间比较差异极显著(P＜0.001).结论趋化因子RANTES及MIP-1α表达在肾移植术后急性排斥反应中可能具有重要作用.     

原发性干燥综合征患者唇腺组织与外周血BAFF/BAFF-R检测及临床意义

目的:检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血B淋巴细胞活化因子(BAFF)和外周血B细胞/唇腺组织中BAFF受体(BAFF-R)的表达,进一步观察和研究BAFF在SS发病过程中的作用,并探讨将唇腺组织BAFF-R水平检测作为SS病理诊断指标的可能性。方法:选取确诊pSS患者唇腺组织及外周血样本35例,并选择35例非SS颌面部手术患者的正常唇腺组织及外周血作为对照。同步采用免疫组化技术检测唇腺组织BAFF-R表达情况,以流式细胞术检测外周血CD19+细胞表面BAFF-R的表达水平,和采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定外周血清中可溶性BAFF的水平。结果与对照组35例唇腺组织BAFF-R弱阳性着色相比,32/35例(91.4%)pSS患者唇腺组织中BAFF-R特异性染色呈强阳性;SS患者外周血中CD19+B淋巴细胞膜表面BAFF-R表达(24.6±8.3%vs 3.8±2.2%,),以及其血清中可溶性BAFF的表达(8.2±1.1 ng/ml vs 1.9±0.7 ng/ml,)均显著高于对照组。结论:pSS患者唇腺组织与外周血中B细胞膜表面BAFF-R,以及血清可溶性BAFF的表达水平均上调,可能通过激活自身反应性B淋巴细胞参与pSS的发病过程;检测唇腺组织B细胞膜表面BAFF-R可能有助于pSS的诊断和疾病活动的判定。     

CD+4CD+25调节性T细胞在干燥综合征患者外周血和唇腺组织的表达

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在干燥综合征（SS）患者外周血和唇腺组织的表达。方法用流式细胞术检测57例SS患者和46例健康对照组外周血和唇腺组织单细胞悬液CCD4^＋CD25^＋调节T细胞的表达;用免疫组化的方法,对唇腺石蜡组织的连续切片进行CD4、CD25、CD68和CD8染色。结果SS组CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平中位数为6．9％（2．84％-13．50％）,对照组为5．77％～15．30％,两者比较P〈0．001。SS组CD4^＋CD25^high T细胞水平为0．001％～1．83％,对照组为0．13％～2．45％,两者比较P〈0．001。唇腺组织免疫组化染色显示ss组患者唇腺中浸润的淋巴细胞中,CD4^＋T细胞占大多数,两组均无CD25的表达。结论SS患者唇腺中缺乏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞降低,提示调节性T细胞在SS的发病机制中起重要作用。     

干燥综合征唇腺免疫病理研究

目的 探讨CIM＋CD25＋调节性T细胞在干燥综合征（SS）患者唇腺组织的表达。方法 用免疫组织化学的方法对31例唇腺石蜡组织的连续切片进行CIM、CD25、CD68、CD8和Foxp3染色。结果 唇腺组织免疫组化染色显示25例SS患者唇腺中浸润的淋巴细胞中,CIM＋T细胞占大多数,两组均无CD25和FOXP3的表达。结论SS患者唇腺中缺乏CIM＋CD25＋调节性T细胞;调节性T细胞在SS的发病机制中起重要作用。     

CLINICAL APPLICATION AND EVALUATION OF SALIVAFERNING TEST IN SJOGREN'S SYNDROME

Objective To evaluate the saliva ferning test (SFT) as diagnostic test for xerostomia in patients with Sjogren 's Syndrome (SS). Methods In this study, dried samples of freshly produced saliva from 78 patients with established SS according to European Community criteria and 80 healthy controls were examined by light microscopy. The crystallization was classified into 4 types according to the ferning phenomenon: uniformity, branching, spreading and integrity (type Ⅰ normal and type Ⅱ ,III ,Ⅳ abnormal ). Then , the 78 patients underwent labial salivary gland biopsy. According to Tarpley' s classifica tion, minor salivary gland biopsy (≥2+) was considered to be positive. Results 1. The sensitivity of SFT was high (70/ 78 = 89.74% ). And the specificity was also high (67/80 = 83.75% ). 2. Abnormal SFT was observed in 70/78(89.74%) samples from patients group and in 13/80 ( 16.25% ) samples from healthy controls. The differences of SFT in patients group versus controls were statistically significant (P<0.01). 3. The sensitivity of SFT and mini labial gland biopsy had no signifi cant differences (P>0.05) as diagnostic tests in SS. Conclusion SFT was simple , sensitive and specific as diagnostic test in SS suspect patients just as mini labial gland biopsy.