结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化及意义

目的观察结肠癌组织中RAS相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化,并探讨其意义。方法分别采用甲基化特异性PCR（MSPCR）和RT-PCR技术检测80例结肠癌及癌旁正常结肠组织中RASSF1A基因启动子甲基化、mRNA。结果 80例正常结肠组织中RASSF1A基因启动子未见甲基化,80例结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化者58例,两者相比,P〈0.05。正常结肠组织均可检测到RASSF1A基因mRNA,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化者未检测到RASSF1A基因mRNA、未甲基化者可检测到RASSF1A基因mRNA。RASSF1A基因启动子甲基化与结肠癌病理分型、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关（P均〈0.05）。RASSF1A基因mRNA的表达与结肠癌Dukes分期有关（P〈0.05）。结论结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化,RASSF1A基因启动子甲基化者RASSF1A基因mRNA表达缺失,这可能与结肠癌的发生发展及转移有关。     

RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化与胃癌进展转移的关系

目的:探讨胃癌RUNX3、RASSF1A基因启动子甲基化在胃癌进展转移中的作用及意义.方法:RT-PCR和MSP检测62例胃癌标本及56例正常胃黏膜组织RUNX3、RASSF1A基因mRNA表达及甲基化状况,免疫组织化学检测VEGF在RUNX3、RASSF1A甲基化与非甲基化胃癌组织及20例正常组织中的表达,并分析RUNX3、RASSF1A甲基化与VEGF表达的关系.结果:胃癌组织RUNX3与RASSF1A表达较正常组织均明显降低(0.629±0.461 vs 0.893±0.543,0.653±0.476 vs 0.858±0.581,均P<0.05),且RUNX3与RASSF1A甲基化率均高于正常组织(69.4%VS 26.8%,66.1%vs 23.2%.均P<0.01).胃癌组织中RUNX3、RASSF1A甲基化组mRNA表达量较非甲基化组明显降低(0.545±0.299 vs 0.736±0.291,0.562±0.208 vs 0.674±0.185,均P<0.05).RASSF1A甲基化与肿瘤TNM分期及浸润深度相走RUNX3甲基化与肿瘤淋巴结转移、血管侵犯及TNM分期相关(P<0.05).RUNX3甲基化组胃癌组织VEGF蛋白表达高于非甲基化组(86.0%vs57.9%),RUNX3甲基化与VEGF表达相关(P<0.05).结论:RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化可能是导致其表达降低的原因,并与胃癌进展演变相关.RUNX3甲基化可能参与胃癌血管、淋巴管转移.     

p16、hMLH1基因甲基化与结肠癌的相关性研究

目的检测正常黏膜、结肠腺瘤、结肠癌中p16、hMLH1基因CpG岛甲基化状态,评价其在结肠癌发生中的作用及临床意义。方法收集四川省人民医院2008年10月～12月结肠组织标本60例,其中结肠癌20例、腺瘤20例、正常组织标本20例。采用特异性甲基化PCR（MSP）方法检测p16、hMLH1基因的CpG岛甲基化状态。结果 MSP方法检测发现p16启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与腺瘤组、正常组比较有显著性差异（P=0.020、0.020）,而腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。hMLH1启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与正常组比较有显著性差异（P=0.047）,结肠癌组与腺瘤组、腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。p16、hMLH1基因CpG岛甲基化与Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度具有相关性（P〈0.05）,与肿瘤部位、性别无相关性（P〉0.05）。结论 p16、hMLH1启动子区CpG岛甲基化是促进结肠癌发生的重要基因事件,且可能与结肠癌Duke分期相关。     

全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义

目的: 探讨全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义.方法: 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法, 检测80例胃癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织及全血中RUNX3启动子甲基化情况.结果: 胃癌组织标本中RUNX3基因启动子甲基化率为45%, 癌旁组织中甲基化率为0%,全血中甲基化率为40%. 胃癌组织、全血中RUNX3基因启动子甲基化, 差异无统计学意义( P>0.05). 全血标本中RUNX3启动子甲基化表达情况与分化程度、是否有淋巴结转移密切相关, 与年龄、性别、肿瘤部位浸润深度无关.结论: 全血RUNX3启动子区甲基化对胃癌早期诊断有重要指导意义, 与胃癌的发生、发展密切相关.     

结肠癌Lovo细胞RUNX3基因的表达与其增殖及凋亡的关系

目的:探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响.方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR0.4,4,40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3d,继续常规培养5d后,采用四唑盐法(MTT)比色法观察细胞经药物处理前后的生长活性.以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达,以甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后RUNX3的甲基化状态,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果:与对照组相比,0.4,4,40 μmol/L的5.Aza-CdR处理细胞后.细胞RUNX3mRNA的相对表达量(0.46±0.06,0.71±0.06,0.84±0.07 vs 0,P＜0.01)和细胞凋亡率均增高(10.95%±2.09%,17.61%±1.51%,26.60%±1.89%vs 2.92%±0.93%,P＜0.01).呈剂量依赖性(F=168.4,F=145.7),结肠癌Lovo细胞生长速率下降,RUNX3 mRNA重新表达,其基因启动子区域部分甲基化.结论:5-Aza-CdR可逆转RUNX3启动子高甲基化状态,抑制细胞生长,诱导部分细胞凋亡.     

大肠癌组织中MTAP mRNA表达与其启动子去甲基化的相关性

目的 观察大肠癌组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP) mRNA的表达,探讨MTAP mRNA与其启动子去甲基化的相关性.方法 采用半定量逆转录PCR法检测76例正常大肠黏膜和大肠癌组织中的MTAP mRNA,采用MSP法检测大肠癌组织中MTAP基因甲基化状态.结果 大肠癌组织中MTAP mRNA表达阳性率为90.78％ (69/76),高于正常组织中的5.26％ (4/76),P＜0.05;MTAP mRNA表达与大肠癌患者的年龄、性别及病变部位、肿瘤大小无关(P均＞0.05),而与肿瘤的分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P均＜0.05).正常大肠组织中MTAP基因启动子甲基化频率为95.00％ (19/20),高于大肠癌组织中的39.47％ (30/76),P＜0.01;MTAP基因甲基化大肠癌组织中MTAP mRNA表达率显著低于去甲基化大肠癌组织(x2=8.592,P＜0.05),大肠癌组织中MTAP mRNA表达与其启动子去甲基化呈正相关(r=0.919,P＜0.05).结论 大肠癌组织中MTAP mRNA高表达与其启动子去甲基化有关.     

宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点甲基化及其临床意义

目的检测宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点甲基化状态及mRNA,并探讨其临床意义。方法提取正常健康人宫颈上皮细胞和宫颈癌C-33A细胞总DNA和RNA,分别进行重亚硫酸氢盐测序（BSP）和RT-PCR扩增,检测RASSF1A基因启动子CG位点甲基化状态和RASSF1A基因mRNA。结果 C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点呈现高甲基化状态,显著高于正常宫颈上皮细胞（P〈0.01）;C-33A细胞RASSF1A mRNA表达量明显低于正常宫颈上皮组织（P〈0.01）。结论宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点呈高度甲基化状态,其RASSF1A mRNA表达明显受到抑制。RASSF1A基因启动子CG位点甲基化在宫颈癌发生过程中发挥重要作用。     

胰腺癌和慢性胰腺炎中弹性蛋白酶3B(ELA3B)基因甲基化状态检测

背景：DNA甲基化指DNA中的核苷酸与甲基基团共价结合，这是一种表观遗传修饰，在许多生物学过程中发挥重要作用。目的：探讨弹性蛋白酶3B（ELA3B）基因在胰腺癌中异常表达的潜在机制。方法：以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测30例胰腺癌、20例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中ELA3B mRNA的表达，以甲基化特异性PCR（MSP）检测该基因启动子区甲基化水平。结果：胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织ELA3B mRNA的表达率依次为46．7％、85．0％和100％。胰腺癌组织ELA3B基因启动子区甲基化指数（MI）显著高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织（7．02±6．31对2．33±0．97和3．31±0．75．P〈0．05），其中ELA3B mRNA表达阴性胰腺癌组织的MI显著高于ELA3B mRNA表达阳性组织（11．83±7．82对3．82±1．18，P〈0．05）。结论：本实验首次检测了ELA3B基因在胰腺癌和慢性胰腺炎组织中的甲基化状态，首次揭示ELA3B基因启动子区高甲基化是导致该基因在胰腺癌组织中低表达的原因之一。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化

目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及RT-qPCR检测RUNX3 的表达,分析RUNX3基因启动子CpG岛甲基化水平。合成DNA甲基转移酶3A的小干扰RNA(siRNA_3A)单独转染或与HBx共转染,检测RUNX3的表达。PCR检测21例手术切除的肝细胞癌新鲜组织标本HBx表达情况,比较HBx阴性与HBx阳性组织样本间RUNX3的表达差异以及启动子甲基化程度。结果过表达HBx可导致肝癌细胞内RUNX3表达下调,且甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR可完全阻断HBx对RUNX3的抑制作用。HBx诱导RUNX3基因启动子CpG岛发生高甲基化,但不影响DNA甲基转移酶的表达。siRNA_3A转染肝癌细胞后,RUNX3 mRNA与蛋白表达均显著上调;其与HBx共转染后,逆转了单独HBx对RUNX3的抑制作用。HBx阳性的肝癌组织中RUNX3 mRNA表达水平较HBx阴性组低,且RUNX3启动子甲基化程度也相对较高。结论HBx通过促进RUNX3启动子区域发生高甲基化而抑制其表达,且这一过程是由DNMT3A所介导的。     

IL-6表观遗传改变调节SOCS3在大肠癌发病机制中的作用

目的 检测大肠癌（CRC）中IL-6、SOCS3基因mRNA表达和启动子甲基化状态,以及STAT3基因mRNA表达水平,探讨大肠癌中IL-6、SOCS3基因表观遗传学改变及其对IL-6/STAT3通路的影响.方法 实时荧光定量PCR检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6、SOCS3及STAT3基因mRNA水平,甲基化特异性PCR（MSP）检测SOCS3甲基化状态,亚硫酸氢盐测序（BSP）检测IL-6启动子甲基化状态.结果 与癌旁组织相比,癌组织中IL-6、STAT3 mR-NA表达显著增高（P＜0.05）,而SOCS3显著降低,IL-6与SOCS3表达呈负相关;癌组织中IL-6启动子-633、-611、-575、-575bp位点甲基化水平均降低,而SOCS3则呈现高度甲基化状态（P＜0.05）.结论 大肠癌中IL-6和SOCS3基因DNA甲基化状态异常,影响基因表达,从而诱导IL-6/STAT3信号转导通路持续活化,促进了大肠癌的发生发展.     

结肠癌中DCC基因启动子甲基化及其临床意义

目的探讨DCC基因启动子甲基化在结肠癌发生发展过程中的作用及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测DCC基因表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测DCC基因启动子甲基化。结果在结直肠癌组织中DCC基因甲基化启动子甲基化频率与浸润深度无关(P0.05);而与肿瘤组织分化程度、临床分期密切相关(P0.05)。DCC基因启动子甲基化频率在低或未分化组、C、D期组均高于其对应的高或中分化组和A、B期组(P0.05)。结论 DCC基因启动子甲基化和DCC蛋白表达在正常组织,结肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著的差异,可能与结肠癌的发生发展有关,可作为判断结直肠癌生物学行为的一个指标。     

胃癌维甲酸信号通路相关基因启动子区协同高甲基化的研究

背景：启动子区高甲基化与胃癌中多种抑癌基因表达沉默密切相关。目的：探讨维甲酸信号通路相关基因维甲酸受体B（RAR13）、细胞维生素A结合蛋白1（CRBP1）和他扎罗汀诱导基因1（TIG1）启动子区高甲基化与胃癌的关系。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测40例胃癌标本、10例正常胃黏膜标本和6株胃癌细胞株的RAR13、CRBPI和TIG1基因启动子区甲基化状态，分析i者甲基化状态的相关性及其与胃癌1晦床病理特征的关系。以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌细胞株RAR13、CRBP1和TIG1mRNA表达。结果：40例胃癌组织的RAR13、CRBPI和TIG1基因甲基化率分别为45．0％、32．5％和57．5％，10例正常胃黏膜组织均未检测到上述基因甲基化（P〈0．05）。胃癌组织中RAR13的甲基化状态与CRBP1和TIG1的甲基化状态显著相关（P〈0．05），但三者的甲基化状态与胃癌临床病理特征无相关性。启动子区高甲基化胃癌细胞株相应基因mRNA表达缺失或减弱。结论：胃癌组织常发生维甲酸信号通路相关基因RAR13、CRBP1和TIG1启动子区高甲基化，高甲基化可能是相应基因转录失活的重要原因。     

RASAL1基因启动子甲基化及RAS活性与结肠癌临床病理的关系

目的:检测RASAL1(ras GTPase-activatinglike protein 1)基因甲基化率及RAS活性在人结肠癌组织中的表达,探讨其与临床病理资料间的关系.方法:以40例结肠癌标本为研究对象,相应的正常组织标本为对照.甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测RASAL1启动子CpG岛甲基化状态,免疫共沉淀法检测RAS活性,分析肿瘤组织中RASAL1基因甲基化率及RAS活性与临床病理参数间的关系.结果:40例肿瘤组织中有26例检测出RASAL1基因甲基化(26/40,67.5%),对照组40例中有12例出现甲基化(12/40,30%),肿瘤组织甲基化率明显高于正常组织(P=0.0017).肿瘤组织中RAS活性的中位数为1.07,正常组织中RAS活性的中位数为0.52,P<0.001,差异有统计学意义.结肠癌组织中RASAL1基因的甲基化率、RAS活性与患者肿瘤分化程度、侵袭深度、淋巴结转移、TNM分期有统计学差异(均P<0.05).结论:RASAL1甲基化状态与RAS活性增加有关,可能在结肠癌的发生发展中起重要作用.抑制RASAL1甲基化及RAS活性,可能成为治疗结肠癌的新靶点.     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化作用及意义

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义。方法分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA。结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Aza-CdR处理前呈现高甲基化状态（甲基化率≥60%）,其mRNA表达完全缺失;5-Aza-CdR处理后则表现为低或无甲基化状态（甲基化率≤20%）,其mRNA表达恢复正常。结论 CHFR基因启动子在AGS细胞中呈高甲基化状态,5-Aza-CdR能显著逆转其CHFR基因异常甲基化,诱导CHFR基因表达,为胃癌的治疗提供新思路。     

胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态观察

目的观察胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测54例胃癌及其癌旁正常组织中的E—cadherin基因启动子异常甲基化状态,并分析E-cadherin基因启动子异常甲基化状态与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌组织中的E-cadherin基因启动子异常甲基化发生频率为48．10％（26／54）,明显高于癌旁正常组织中的11．11％（6／54）。E—cadherin基因启动子异常甲基化频率与胃癌分化程度、病理类型、浸润深度以及淋巴结转移、临床分期有关（P均〈0．05）。结论胃癌组织中E-cadherin基因启动子异常甲基化频率较高,并与胃癌浸润、转移有关。     

肺癌患者PTEN基因启动子甲基化和转录表达的研究

目的 探讨张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子CpG岛甲基化状态和基因表达水平与肺癌发生的关系.方法 用甲基化特异性PCR检测PTEN启动子CpG岛甲基化状态,实时定量PCR 检测PTEN mRNA的表达水平.结果 在肺癌组织中PTEN基因启动子甲基化的频率为26.67%(12/45),在肺正常组织中未发生甲基化(χ2=7.448,P＜0.01).正常组织中PTEN mRNA全部表达,肺癌组织中表达缺失率为22.22%(10/45),且表达量低于正常肺组织(t=-14.156,P＜0.001),不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类中其表达量无显著性差异(P＞0.05);PTEN甲基化与其mRNA表达下降密切相关.结论 肺癌中PTEN基因启动子甲基化频率明显升高,其表达普遍下调或缺失,提示PTEN启动子甲基可在肺癌发生、发展中起一定作用.     

胃癌中SEMA3B基因表达与其启动子区甲基化的关系

背景:SEMA3B为一候选肿瘤抑制基因,在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。目的:初步探讨DNA甲基化调控机制对胃癌中SEMA3B基因表达的影响。方法:以real-time PCR检测6株人胃癌细胞株(SGC7901、AGS、MGC803、BGC823、MKN45、HGC27)、正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和41例胃癌组织及其相应癌旁非癌组织中的SEMA3B mRNA表达。以甲基化特异性PCR检测SEMA3B基因启动子区甲基化状态,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。以去甲基化药物5-Aza-dC(10μmol/L)处理上述细胞株72 h,观察SEMA3B基因甲基化状态和mRNA表达变化。结果:6株胃癌细胞和胃癌组织中的SEMA3B mRNA表达分别显著低于GES-1细胞(P0.001)和相应癌旁非癌组织(P0.01)。6株胃癌细胞SEMA3B基因启动子区均发生甲基化,GES-1细胞则未发生甲基化。胃癌组织SEMA3B基因甲基化率显著高于相应癌旁非癌组织(67.6%对32.4%,P0.01),甲基化状态与胃癌分化程度和淋巴结转移相关(P0.05)。经5-Aza-dC处理后,5株胃癌细胞SEMA3B基因甲基化程度下降,伴mRNA表达上调。结论:SEMA3B基因启动子区高甲基化可能是其在胃癌中表达下调的原因之一,并参与了胃癌的发生、发展。SEMA3B有望成为胃癌诊断和预后评估的分子标记物以及表观遗传学治疗靶点。     

血浆Runx3基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌的临床价值

目的探讨血浆Runt相关转录因子3（Runx3）基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌（HCC）的临床价值。方法采用DNA甲基化特异性PCR方法,检测81例HCC患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆Runx3基因启动子异常甲基化情况。结果癌旁正常组织未发现Runx3异常甲基化现象;癌组织Runx3异常甲基化率43．2％（35／81）,血浆39．5％（32／81）;血浆Runx3甲基化改变与癌组织甲基化改变显著相关（P〈0．05）。Runx3基因异常甲基化与HCC患者的临床病理参数无显著相关性（P〉0．05）。结论血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断HCC有一定参考价值。     

上消化道癌肿中runx3基因甲基化研究

runx3是胃癌中新发现的抑癌基因。国外至少40％的胃癌组织中检测到runx3基因启动子区高甲基化，此种高甲基化状态直接导致基因静默，表达缺失。runx3启动子甲基化具有很高的肿瘤特异性，有望成为胃癌诊断的早期标记。鉴于runx3启动子甲基化与前肠来源组织肿瘤密切相关，我们研究runx3在我国食管鳞癌、贲门癌和胃癌中的甲基化状态及相应mRNA表达水平，探索其在这些肿瘤发生中的作用。