siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78（GRP78）增强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性,以期为乳腺癌的临床治疗提供
新的靶点。方法MTT法检测不同浓度（0、1、2、4、8、16 μmol/L）顺铂对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用;PI/Annexin
V 双染检测顺铂（8 μmol/L）对siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒乳腺
癌细胞MDA-MB-231 作为空白和阴性对照;Western blot 检测顺铂（8 μmol/L）处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 不同时间（0、6、
16、24 h）GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231 中GRP78的表达。结果8 μmol/L顺铂作用于
乳腺癌细胞MDA-MB-231 24、48、72 h细胞存活率分别为83.13%、54.22%、35.79%,但24 h细胞凋亡率仅为10.8%。将GRP78
沉默后,细胞的凋亡率为24.6%,沉默GRP78并合用顺铂进行刺激,细胞的凋亡率为48.9%,明显高于单用顺铂组。用顺铂刺激
乳腺癌细胞MDA-MB-231 GRP78表达先上调后有减弱趋势,而siRNA转染沉默GRP78后,GRP78表达明显下降。结论抑制
GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率,为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点。
     

奈达铂对乳腺癌细胞增殖、侵袭转移、凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨奈达铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭转移及凋亡的影响,并探讨相关作用机制.方法 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,分为空白对照组、阳性对照组(1μmol/L多西紫杉醇)及奈达铂低、中、高剂量组(15、30、45μg/mL奈达铂).M T T法检测MDA-MB-231细胞增殖能力;Anne...     

与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义

目的探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制,研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l(fibroblast-specific protein-1,FSP-l)的表达及对乳腺癌生长的影响。方法 Transwell方法共培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株ESF;实时RT-qPCR检测共培养的MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1mRNA水平;免疫荧光流式细胞仪检测共培养MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1蛋白表达水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测MDA-MB-231细胞的增殖;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织FSP-1的表达,检测FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果 MDA-MB-231细胞和ESF细胞共培养可上调ESF细胞表达FSP-1并促进MDA-MB-231细胞增殖;ESF+MDA-MB-231组MDA-MB-231细胞表达FSP-1,但在MDA-MB-231组未检测到FSP-1蛋白表达;荷瘤裸鼠MDA-MB-231细胞和ESF细胞共生长的癌组织高表达FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。     

miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响

目的 探究miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组,即MDA-MB-231组、miR-21 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、siRNA-E2F1组和siRNA-NC组。检测细胞中miR-21表达（RT-PCR法）;分别检测细胞增殖（MTT法）、侵袭（Transwell法）、迁移（划痕实验）和凋亡能力（流式细胞仪）;检测细胞中E2F1蛋白表达;检测miR-21与E2F1的靶向关系（双荧光素酶实验报告）。结果MDA-MB-231细胞中miR-21表达明显高于MCF10A细胞（P<0.05）;miR-21 inhibitor组细胞细胞中miR-21表达明显低于MDA-MB-231组（P<0.05）。与MDA-MB-231组相比,miR-21 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭能力、迁移能力和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显升高（P<0.05）;MDA-MB-231组细胞吸光度值、侵袭、迁移、凋亡能力和细胞中E2F1蛋白表达与miR-NC inhibitor组相比差异无统计学意义（P>0.05）。预测软件显示E2F1的3′UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。通过向MDA-MB-231细胞中转染野生型E2F1（E2F1-WT）时,miR-21组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）;miR-21组和miR-NC组突变体荧光素酶活性相比差异无统计学意义（P>0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-E2F1组细胞增殖、侵袭、迁移和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P<0.05）。与miR-NC inhibitor组裸鼠移植肿瘤第8天时相比,miR-21 inhibitor组裸鼠肿瘤体积明显降低,肿瘤抑制率为45.3%（P<0.05）。结论低表达miR-21可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭,促进凋亡,且抑制裸鼠移植瘤体积,其作用机制可能与抑制E2F1表达有关。     

miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响?方法:检测乳腺癌细胞株MCF-7?SKBr3和MDA-MB-231中miR-342-3p的表达?应用脂质体转染方法,转染hsa-miR-342-3p模拟物到低表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(mimic转染组),同时设立阴性对照(mim-NC转染组);转染miR-342-3p抑制物到高表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(inhibitor转染组),同时设立阴性对照(inhi-NC转染组)?mimic转染组?mim-NC转染组?inhibitor转染组和inhi-NC转染组细胞,分别加入浓度为2 ?滋mol/L的紫杉醇?顺铂及4 ?滋mol/L的阿霉素的进行培养,应用CCK8法检测药物作用48 h后细胞增殖率的变化?结果:以SKBr3为参照,miR-243-3p在MCF-7细胞中的相对表达倍数是126.000,在MDA-MB-231细胞中的相对表达倍数是0.017?mimic转染组细胞与紫杉醇?顺铂孵育48 h后,肿瘤细胞增殖率低于mim-NC转染组,差异有统计学意义(P < 0.05),但与阿霉素孵育后细胞增殖率与mim-NC转染组差异无统计学意义(P > 0.05);inhibitor转染组细胞与紫杉醇?顺铂和阿霉素孵育48 h后,肿瘤细胞的增殖率高于inhi-NC转染组,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231?MCF-7对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但提高miR-342-3p表达不能增加MDA-MB-231细胞对阿霉素的化疗敏感性,降低miR-342-3p的表达却可以减弱MCF-7细胞对阿霉素的化疗敏感性?     

乳酸菌培养上清液下调Piwil2基因增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制.方法 采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5 μg/mL)和LS(体积分数分别为1％、5％、10％、20％)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和Piwil2基因表达的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Westernblot检测其沉默效果,CCK-8检测Piwil2基因沉默后对MDA-MB-231细胞增殖的影响;2μg/mL DDP联合不同浓度LS(体积分数分别为1％、5％、10％、20％)作用MDA-MB-231细胞,观察细胞增殖抑制效应和Piwil2蛋白表达的改变.结果 高浓度DDP(≥3μg/mL)可抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.05),而低浓度DDP(≤2 μg/mL)不能有效抑制细胞增殖;DDP以剂量依赖性方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2表达可恢复2μg/mL DDP对细胞增殖的抑制.与对照组(乳酸菌培养基,MRS)比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达,但并不影响细胞的增殖;与单用2μg/mLDDP比较,2μg/mL DDP联合20％ LS处理可显著下调Piwil2蛋白的表达并抑制细胞增殖(P＜0.05).结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低,乳酸菌培养上清液可通过下调PiwiL2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性.     

miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响.方法:收集江苏省肿瘤医院乳腺外科2011年1月至2013年8月行术前化疗的三阴性乳腺癌病人32例,其中完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)27例,检测肿瘤组织中miR-342-3p的表达情况;应用脂质体转染方法,三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染has-miR-342-3p模拟物(mimic)和miR-342-3p抑制物(inhibitor),设立阴性对照(mim-NC)组和(inhi-NC)组.mimic组,mim-NC组,inhibitor组和inhi-NC组细胞株,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇,顺铂及4μmol/L的阿霉素进行培养;应用CCK8法和流式细胞仪检测48 h后肿瘤细胞增殖率和凋亡的变化.结果:miRNA-342-3p在术前化疗后达到CR的三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于PR的三阴性乳腺癌组织(P＜0.05).Mimic组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后肿瘤细胞增殖率低于mim-NC组,凋亡率高于mim-NC组,差异有统计学意义(w0.05).Inhibitor组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后,肿瘤细胞增殖率高于inhiNC组,凋亡率低于inhi-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).但与阿霉素作用后细胞增殖率和凋亡率在mimic组与mimNC组,inhibitor组与inhi-NC组,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:miR-342-3p高表达的三阴性乳腺癌对化疗药物反应更敏感,miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但miR-342-3p不影响MDAMB-231细胞株对阿霉素的化疗敏感性.     

IWR-1-endo 对三阴性乳腺癌抑制作用的研究

目的：探明新近发现的 Wnt 信号通路的小分子抑制剂 IWR-1-endo 是否会对三阴性乳腺癌细胞系 MDA-MB-231以及该细胞系的裸鼠荷瘤模型的生长产生抑制作用及其机制。方法应用不同浓度的 IWR-1-endo 处理 MDA-MB-231细胞并计算细胞增殖抑制率。建立裸鼠荷瘤模型并且每2天1次腹腔注射 IWR-1-endo 溶液0.1 mL/10 g,同时每4天1次测量瘤体长径和短径、计算肿瘤体积。4周后,处死小鼠、收集肿瘤组织、测量并计算体积抑瘤率和瘤重抑瘤率。将肿瘤组织制成石蜡切片,进行 Ki-67染色及 TUNEL 染色,以计算增殖指数和凋亡指数。另应用 western blot 检测肿瘤细胞和组织中 Axin 1、Axin 2、β-cate-nin 和 p-β-catenin 蛋白的表达。结果IWR-1-endo 可以明显抑制 MDA-MB-231细胞的生长,其抑制作用呈浓度依赖型,IC50值为180 nmol/L。IWR-1-endo 的体积抑瘤率为42.2%,瘤重抑瘤率为44.6%。与对照组比较,IWR-1-endo 组凋亡指数上升,差异有统计学意义,而增殖指数差异无统计学意义。western blot 检测结果显示细胞及组织中 Axin 1和 Axin 2表达量明显上升,β-catenin 明显下降,而 p-β-catenin 上升。结论IWR-1-endo 可以通过稳定化 Axin 而抑制 Wnt 信号通路,实现对三阴性乳腺癌细胞系及裸鼠荷瘤模型生长的抑制。     

ZIC1基因转染联合姜黄素对人乳腺癌细胞生物学行为的影响

［摘要］目的: 探讨ZIC1基因转染联合姜黄素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法: 将慢病毒载体pLV Zic1 PGK Puro稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过蛋白质印迹法检测转染后MDA-MB-231细胞ZIC1蛋白的表达水平。通过MTT法检测抑制率在50％左右的姜黄素浓度,并作为后续实验的标准加药浓度。以ZIC1空载不加姜黄素为对照组,空载加姜黄素、转染不加姜黄素及转染加姜黄素为实验组,以MTT法检测ZIC1、姜黄素及ZIC1联合姜黄素对MDA-MB-231细胞黏附的影响;用划痕实验检测各组细胞的迁移能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果： 乳腺癌细胞转染ZIC1质粒后,ZIC1蛋白呈阳性表达,而转染空载体细胞中ZIC1蛋白表达阴性。细胞增殖抑制率在50％左右的姜黄素浓度为5 mg/L,以此作为标准加药浓度。与对照组比较,转染组、姜黄素组及转染联合姜黄素组乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖受到明显抑制,凋亡率明显增高(均P＜0.05)。其中,ZIC1转染联合姜黄素对细胞增殖的抑制及凋亡诱导作用更明显(P＜0.05)。结论： ZIC1基因与姜黄素对乳腺癌的抑制存在协同作用。     

二氢杨梅素对顺铂体外抗乳腺癌作用的干预及其机制研究

目的观察二氢杨梅素对顺铂体外抗乳腺癌作用的影响,并探讨其作用机制。方法将2μg/m L沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达质粒转染MDA-MB-435细胞,MDA-MB-435细胞按5×103/孔接种在96孔板上,分为对照组、二氢杨梅素组、顺铂组、顺铂+二氢杨梅素组、顺铂+二氢杨梅素+NAC组和顺铂+二氢杨梅素+SIRT1质粒组。分别采用MTT法和Annexin V染色流式细胞术检测MDA-MB-435细胞活力和细胞凋亡。Western blot方法检测MCF-10A及MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞SIRT1表达水平。二氢乙啶(DHE)染色流式细胞术及Western blot方法分别检测ROS产生和JNK磷酸化。结果二氢杨梅素联合顺铂处理的MDA-MB-435细胞活力抑制率和凋亡诱导率显著高于顺铂组、二氢杨梅素组和二氢杨梅素+顺铂+SIRT1质粒组[细胞活力抑制率:(61.5±5.1)%比(15.2±1.4)%、(7.2±0.5)%、(19.7±1.6)%,P均0.05;凋亡诱导率:(36.8±2.9)%比(7.6±0.6)%、(2.9±0.3)%、(10.8±0.9)%,P均0.05]。人乳腺癌细胞系MCF-7、MDAMB-231和MD-MB-435SIRT1蛋白表达水平明显高于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A。二氢杨梅素处理显著抑制MDA-MB-435细胞SIRT1蛋白表达水平并显著增强顺铂对MDA-MB-435细胞活性氧簇(ROS)的诱导、JNK蛋白磷酸化和Caspase-9、Caspase-3活化。结论二氢杨梅素可能通过抑制SIRT1表达增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性。     

评刊之感

欣逢《中国医院》创刊6周年、公开发行两周年之际,谈点评刊之感,以兹庆贺、纪念。 从2001年7月起,我有幸担任本刊评刊员,真诚感谢给我这一“老有所学”机会,期期通读,收获甚丰。24期,千篇文章(含动态、短讯),颇有走进没设课桌的动态医院管理大学之感。《中国医院》杂志突出特点,一是政策性强,紧跟党中央、国务院、卫生部对医院改革发展,乃至整个卫生改革发展的部署,传递信息,答疑释惑;二是科学性强,理论阐述,经验介绍,感悟体会,都遵循经济社会规律和医学科学规律;三是权威性高,政府官员,学会领导,院士、博士专家,优秀院长、主任,国内国际名士,均为本刊撰稿。本刊对医院管理者和卫生管理者及时而良好的指导作用,已为业内人士所公认和赞许。     

依从性预测研究进展

依从性差是一个普遍存在的现象,也是疾病得不到有效控制的重要因素,其对临床效果及疾病康复有重要的影响; 早期预测患者依从性状况并找出重要的影响因素,将有助于医护人员采取有针对性的干预措施,从而提高患者的依从性, 改善预后。对依从性的定义和测量工具、依从性预测模型及评分系统等系列问题进行综述,以期为开展特定疾病的依从 性预测研究提供依据。     

子宫输卵管造影的相关影响因素分析

目的:分析子宫输卵管造影(Hysterosalpingography,HSG)中使用双腔球囊导管置管和注药过程中影响诊断的相关因素,并分析预防措施。方法:搜集2007年1月至2010年11月在本院行HSG的患者2 308例,均使用双腔球囊导管。比较不同球囊大小、导管顶端插入深度和不同通液速度对HSG的影响。结果:不同球囊大小造影剂外溢、导管脱出、发生人工流产综合征和宫腔显影不全的比例有明显差异,部分差异有统计学意义(P<0.05);导管顶端位于输卵管开口处者82.69%(640/774)同侧输卵管、宫角不显影,经调整后71.45%(553/774)同侧宫角显影,55.17%(427/774)同侧输卵管显影;导管顶端位于宫腔内、宫颈管内者有37例和7例宫腔部分显影或不显影,经调整后宫腔均正常显影;不同通液速度疼痛和输卵管再通的比例有显著的统计学差异(P<0.05),而淋巴静脉返流的比例无显著的统计学差异。结论:在子宫输卵管造影中,根据宫腔大小和位置选用适当的球囊大小、导管位置和通液速度,获得最好的显影效果同时预防手术并发症的发生。     

磁共振横向弛豫时间测量方法的研究

目的研究磁共振横向弛豫时间测量方法,使病变诊断定量计算更为简便。方法本文拟在T2测量方面借助Matlab进行测算,依据T2的数学表达式特征,采用单双指数曲线拟合法、最小二乘法对测量数据进行处理,并对三种处理方法进行比较研究。结果通过Origin9．0软件评估,数值波动双指数拟合最小、最稳定;最小二乘法较大;单指数拟合最大。但最小二乘法和单指数拟合地更快。结论三种方法均可以测出横向弛豫时间T2的值。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

国外医院患者入院过程概述

合理有效的做好患者人院安排是医院面临的一个比较重要的问题,笔者简单介绍了国外医院的入院过程,并提出改进患者人院过程应准确的记录患者信息、有效的使用各种技术、以及最优化医院的资源等策略,以期为中国医院患者入院以及挂号过程提供一些借鉴。     

葛根素对高血压性头颈痛疗效观察

目的：观察葛根素对高血压性头颈痛治疗效果。方法：对76例高血压头颈痛病例,随机分为治疗组34例（葛根素治疗）、对照组42例（β体阻滞剂治疗）。结果：5天内总的症状消失率治疗组82．4％,对照组57．1％,两组比较有显著性差异（P＜0．01）;总的停药反跳率分别为8．8％和42．9％,二者有显著性差异（P＜0．05）;不良反应峡谷组也有显著性差异（P＜0．01）。结论葛根素对高血压性头颈痛疗效优于β受体阻滞剂而且稳定,无不良反应。     

基于文献计量方法的免疫血小板减少症研究现状分析

目的 分析国际免疫性血小板减少症(ITP)的研究现状与研究热点.方法 检索科学引文索引扩展板(SCI-E)数据库2006-2016年ITP主题领域的文献,基于文献计量方法,应用Cite Space软件分析国际ITP研究的作者合作关系、时间分布、地域分布、发文机构分布及主题分布情况,重点对目前ITP的国际研究热点主题进行分析.结果 共检索到期刊论文936篇,2006-2015年ITP主题领域的文献量呈稳固上升趋势;研究主要分布于东亚、欧洲及北美洲地区,文献发文排名靠前的国家分别为美国、中国、日本、加拿大和英国;论文产出最多的机构为美国康奈尔大学.动物模型、血小板生成素受体激动剂、幽门螺杆菌根除、系统评价、T淋巴细胞增殖为研究热点;大剂量地塞米松、基因多态性、相关性、反应等高频关鍵词为最新研究方向.结论;本文明确了ITP主题领域研究的作者合作关系、地域分布,以及研究的热点与趋势,可以为我国ITP科研领域的发展提供参考.