白花丹醌对人肝癌细胞HepG2侵袭和凋亡的影响

目的探讨白花丹醌对人肝癌HepG2细胞侵袭和凋亡的影响。方法人肝癌HepG2细胞进行体外培养,经不同浓度的白花丹醌处理后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示,与对照组比较,白花丹醌干预组抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-效应关系(P<0.05);Transwell细胞体外侵袭实验显示,随白花丹醌用药浓度的递增,细胞侵袭能力明显下降,尤其以4、8μmol·L~(-1)明显(P<0.01);流式细胞术结果显示,白花丹醌作用HepG2细胞48 h,4、8μmol·L~(-1)组细胞凋亡率均明显高于对照组;免疫组化显示,随着白花丹醌浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论白花丹醌能够抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,同时具有抑制HepG2细胞侵袭的能力。     

儿茶素对人肝癌细胞HepG2的影响

目的研究儿茶素[(+)-catechin,Cat]不同时间、不同浓度对人肝癌细胞(HepG2)的增殖、迁移能力的抑制及诱导凋亡作用。方法 HepG2细胞分别与不同浓度Cat作用,MTT法检测细胞增殖率的变化,显微镜观察细胞形态学变化,划痕法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法检测HepG2的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 Cat(4~100mg·mL-1)能明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示Cat(4mg.L-1)作用于HepG2细胞24h即可诱导细胞凋亡。免疫组织化学结果显示Cat(4~20mg·mL-1)的Bax和Caspase-3的表达呈浓度依赖性升高,而Bcl-2的表达呈浓度依赖性降低。结论 Cat可以一定程度的抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与其下调HepG2细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而促进Caspase-3活化有关。     

洛伐他汀联合顺铂对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响及其机制

目的 研究洛伐他汀单用或与化疗药物顺铂联用时对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响,初步探索其抗肿瘤作用机制。方法 不同浓度洛伐他汀、洛伐他汀联合顺铂处理细胞 48 h后,CCK-8法检测HepG2细胞的增殖抑制作用,金氏公式计算联合应用效果;平板克隆形成实验评价药物作用于肝癌细胞的远期效应;划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响;Transwell小室法检测药物对细胞侵袭能力的影响;流式细胞术检测药物处理后细胞周期和凋亡情况;蛋白印迹技术（Western-blot）检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平变化。结果 洛伐他汀呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的增殖,金氏公式计算结果显示洛伐他汀可协同增强顺铂的抗肿瘤作用;平板克隆形成实验结果表明洛伐他汀能显著抑制HepG2细胞克隆形成率;划痕实验提示洛伐他汀能显著降低肝癌细胞的迁移率;Transwell小室侵袭实验结果发现洛伐他汀能明显减少穿膜细胞数量;流式细胞检测发现洛伐他汀可引起G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加;Western-blot检测结果显示洛伐他汀可下调Bcl-2蛋白表达,同时上调Bax和Caspase-3蛋白表达。结论 洛伐他汀可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力,与顺铂联用可增强顺铂体外抗肿瘤效果,通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡是其可能的抗肿瘤作用机制之一。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

TRAIL及其受体在咖啡因抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用

目的探讨TRAIL及其受体在咖啡因(caffeine)抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用。方法HepG2细胞分别经caffeine、TRAIL及caffeine+TRAIL作用24h,采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制情况,根据中效原理进行联合用药效应评价;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;Westernblot法检测caffeine作用不同时间HepG2细胞中TRAIL受体相关蛋白的表达。结果在1.25～20mmol.L-1浓度范围内,caffeine明显抑制HepG2细胞增殖;在0.01275～0.2040μmol.L-1浓度范围内,TRAIL可明显抑制HepG2细胞增殖。Caffeine联合TRAIL在多数效应范围内的合用指数小于1,具有协同作用。Caffeine5mmol.L-1和TRAIL0.0510μmol.L-1联合用药组HepG2细胞凋亡率明显高于各单独用药组,且两者联合用药对HepG2细胞周期具有明显的影响,使G0/G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少;caffeine5mmol.L-1作用HepG2细胞24h时,其DR4及DR5的表达量明显增加,而DcR1和DcR2的表达无改变。结论TRAIL在caffeine抑制HepG2细胞增殖过程中具有一定的协同作用,其机制可能与caffeine上调HepG2细胞表面DR4、DR5的表达,联合TRAIL后能够进一步诱导凋亡及调节细胞周期有关。     

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的：探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法：MTT法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平,同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果：加入浓度超过2.5mmol/L的丁酸钠后,结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降,p16的表达水平上调,细胞阻滞于G1/S期。结论：浓度超过2.5mmol/L的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,使其细胞周期阻滞于G1/S期,且这种诱导作用是剂量依赖型的,其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中,伴随着AQP3的基因表达水平降低。     

无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的观察无蹼壁虎抗肿瘤活性成分(Gekko Swinhonisanti-neoplasm active component,GSAAC)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法 GSAAC与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,分别以MTT法和Transwell小室检测其对细胞增殖及迁移、侵袭的影响;免疫组化法检测PCNA的表达;Hochest33342荧光染色法、TUNEL法观察GSAAC对HepG2细胞的作用;流式细胞术检测细胞周期及早期凋亡率。结果 GSAAC(25～400 mg.L-1)可明显抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,呈浓度依赖性;Ho-chest33342、TUNEL染色及流式细胞术结果显示,GSAAC可诱导细胞发生早期凋亡,阻滞HepG2细胞从S期进入G2期。结论 GSAAC可能通过影响细胞周期进而抑制HepG2细胞增殖和迁移并诱导细胞发生凋亡,进而实现抑制肿瘤的作用。     

醉茄素A对肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨醉茄素A(WA)对肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其分子机制。方法分别采用WA 0、2、4、6、8μmol/L处理肝癌细胞株HepG2,MTT法检测细胞增殖，筛选出最佳作用浓度。再将HepG2细胞分为WA 0μmol/L组、WA 8μmol/L组和SP600125组[c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125 20μmol/L预孵育1 h,再加入WA 8μmol/L],继续作用24或48 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测侵袭细胞数，反转录-聚合酶链反应和Western blot法分别检测磷酸化JNK(p-JNK)、JNK、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 与WA 0μmol/L组比较，WA 8μmol/L组HepG2细胞凋亡率增加，侵袭细胞数减少，p-JNK、Bax mRNA和蛋白表达升高，Bcl-2的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);而预孵育SP600125后，上述作用被逆转(P<0.05)。结论 WA能够抑制HepG2细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡，可能通过丝裂原活化蛋白激酶/JNK信号通路来实现。     

蜂毒素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其部分机制研究

目的研究蜂毒素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用和HDAC2及Hedgehog信号通路的关系。方法给予不同浓度蜂毒素,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HepG2细胞的增殖变化,Hoechst33258染色和流式细胞术检测HepG2细胞凋亡变化;qRT-PCR检测SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2 mRNA的表达;Western blot检测SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2蛋白的表达。结果不同浓度的蜂毒素在作用48 h后,能明显抑制Hep G2细胞的增殖,促进其凋亡;Hedgehog信号通路中SHH、PTCH1、SMO、Gli1 mRNA及蛋白水平均明显降低,并与蜂毒素浓度呈负相关。同时检测到细胞内HDAC2 mRNA及蛋白水平均降低,与蜂毒素剂量呈负相关。结论蜂毒素可明显抑制人肝癌Hep G2细胞增殖,促进其凋亡,其作用与抑制HDAC2,下调Hedgehog信号通路密切相关。     

丙戊酸钠抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导分化和凋亡机制的研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)通过抑制组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)的活性,消除AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用,抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导凋亡的机制。方法:不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间后,应用台盼蓝拒染人工计数法观察VPA对细胞增殖的影响,普通光学显微镜观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原CD11b的表达水平的变化,DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡。结果:VPA能显著抑制Kasumi-1细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,VPA处理Kasumi-1细胞72h时的半数抑制浓度(IC50)为2.33mmol/L;VPA处理后,细胞周期检测G0/G1期细胞比例逐渐增高;VPA能诱导髓系分化抗原CD11b表达水平的阳性率升高,呈时间及剂量依赖性;VPA能诱导Kasumi-1细胞凋亡,Kasumi-l细胞经VPA3mmol/L处理72h后,出现典型的凋亡细胞所具有的梯形DNA条带。结论:VPA能抑制Kasumi-1细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞部分分化和凋亡。     

TSA对不同糖浓度下小鼠海马神经元HT-22细胞凋亡的影响#br#

目的　探究曲古抑菌素A（TSA）对不同糖浓度下小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡的影响。方法　分别用高糖培养基（葡萄糖浓度55 mmol/L）及普通培养基（葡萄糖浓度25 mmol/L）培养小鼠海马神经元HT-22细胞,高糖培养基及普通培养基各分为对照组（NC组）和抑制剂组（TSA组）。用1 mmol/L的TSA作用细胞1、4、8 h,同时用0.4 mmol/L的TSA作用细胞1、4、8、12、14、16、20、24 h,CCK8法检测细胞存活率,确定抑制剂最佳作用浓度和作用时间;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达情况。结果　以0.4 mmol/L、20 h为TSA处理HT-22细胞的最适条件;ELISA结果显示,TSA作用后,HDAC显著减少,HAT显著增加（P＜0.05）;流式细胞术结果显示,在TSA抑制20 h后,细胞凋亡率显著增加,高糖环境下加入TSA,细胞凋亡情况更加严重;TSA作用20 h后,Bcl-2表达显著下调,Caspase-3显著上调（P＜0.05）。结论　TSA可能通过抑制HDAC增加组蛋白乙酰化水平,导致小鼠神经元HT-22细胞的凋亡。     

吡格列酮对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的观察吡格列酮对体外培养的HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其是否通过PPARγ依赖途径发挥上述药理作用。方法将不同浓度的吡格列酮作用于体外培养HepG2细胞,以MTT比色法检测HepG2细胞增殖情况,以3H-TdR参入实验检测细胞DNA合成速率,采用RT-PCR和Western blot检测PPARγmRNA和蛋白的表达,以流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;同时观察PPARγ特异性拮抗剂GW9662和(或)瞬时转染pSG5-PPARγ真核表达质粒对吡格列酮细胞增殖作用的影响;并将PPARγ小干扰RNA(pGCsi-PPARγ)表达质粒稳定转染HepG2细胞,观察PPARγ沉默后吡格列酮对HepG2细胞增殖作用的影响。结果吡格列酮作用于HepG2细胞后,导致HepG2细胞的增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,并诱导细胞凋亡,呈一定的剂量依赖关系;在此过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达没有变化;GW9662部分拮抗吡格列酮的增殖抑制作用,但转染pSG5-PPARγ真核表达质粒可以逆转GW9662的作用;吡格列酮在高浓度(20μmol.L-1)时对pGCsi-PPARγ表达质粒稳定转染的HepG2细胞仍表现出增殖抑制作用。结论吡格列酮能够抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,具有潜在的抗瘤作用,这种作用与其诱导细胞G0/G1期的停滞有关,PPARγ依赖和非依赖途径参与上述过程。     

S-allylcysteine,a garlic derivative,suppresses proliferation and induces apoptosis in human ovarian cancer cells in vitro

Aim： To investigate the effects of S-allylcysteine （SAC）, a water-soluble garlic derivative, on human ovarian cancer cells in vitro. Methods： Human epithelial ovarian cancer cell line A2780 was tested. Cell proliferation was examined with CCK-8 and colony formation assays. Cell cycle was analyzed with flow cytometry. Cell apoptosis was studied using Hoeohst 33258 staining and Annexin V/PI staining with flow cytometry. The migration and invasion of A2780 cells were examined with transwell and wound healing assays. The expression of relevant proteins was detected with Western blot assays. Results： SAC （1-100 mmol/L） inhibited the proliferation of A2780 cells in dose- and time-dependent manners （the ICsovalue was approximately 25 mmoVL at 48 h, and less than 6.25 mmol/L at 96 h）. Furthermore, SAC dose-dependently inhibited the colony formation of A2780 cells. Treatment of A2780 cells with SAC resulted in G/S phase arrest and induced apoptosis, accompanied by decreased expression of pro-caspase-3, Parp-1 and Bcl-2, and increased expression of active caspase-3 and Bax. SAC treatment significantly reduced the migration of A2780 cells, and markedly decreased the protein expression of Wnt5a, p-AKT and c-Jun, which were the key proteins involved in proliferation and metastasis. Conclusion： SAC suppresses proliferation and induces apoptosis in A2780 ovarian cancer cells in vitro.     

阿托伐他汀抑制肝癌细胞增殖作用的研究

摘要　目的：体外观察阿托伐他汀对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期及COX-2蛋白表达的影响。方法：取对数期人肝癌HepG2细胞,加入阿托伐他汀使其终浓度为0μM、0.1μM、1μM、10μM、100μM,采用细胞计数法及噻唑蓝(MTT)法观察阿托伐他汀对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪(FCM)研究阿托伐他汀对细胞周期的作用,免疫细胞化学观察阿托伐他汀对COX-2蛋白表达的影响。结果：1.体外阿托伐他汀呈浓度和时间依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,但0.1μM组与0μM组差异无统计学意义。2. 细胞周期分析显示,阿托伐他汀作用24h后,呈浓度依赖性改变细胞周期分布,一方面增高G0/G1期细胞的比例,一方面降低S期及G2/M期的细胞比例,但细胞凋亡不明显。3.体外阿托伐他汀呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞COX-2蛋白的表达。结论：体外阿托伐他汀对HepG2细胞增殖有抑制作用,该作用可能与使细胞生长阻滞于G0/G1期及抑制COX-2蛋白表达有关。     

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法用四氮唑蓝法、流式细胞术、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法、Wright-Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2、BEL7402和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl-2基因表达的影响。结果UDCA对HepG2、BEL7402细胞株具有显著地抑制生长、诱导凋亡、阻滞细胞周期于S期、降低bcl-2和提升Bax表达的作用。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0.92,0.86mmol/L。UDCA(1.0mmol/L)对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为42%及44%,明显高于对照组(P<0.01)。UDCA对L-02细胞无明显作用。结论UDCA对HepG2、BEL7402细胞株有显著地抑制增殖及诱导凋亡作用,该作用可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl-2和提升Bax的表达有关。     

Telekin suppresses human hepatocellular carcinoma cells in vitro by inducing G2/M phase arrest via the p38 MAPK signaling pathway

Aim:

Telekin, isolated from the Chinese herb Carpesium divaricatum, has shown anti-proliferation effects against various cancer cells, including hepatocellular carcinoma cells. In this study, we investigated the anti-proliferation mechanisms of telekin in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells in vitro.

Methods:

HepG2 cells were treated with telekin. Cell viability was evaluated using MTT assay. Flow cytometry was used to measure cell cycle profiles, ROS level and apoptosis. The protein expression levels were analyzed with Western blotting.

Results:

Telekin (3.75–30 μmol/L) dose-dependently inhibited the viability of HepG2 cells and induced l apoptosis. Furthermore, the treatment induced cell cycle arrest at G₂/M phase, accompanied by significantly increased the phosphorylation of Cdc25A and Cdc2, and decreased Cyclin B1 level. Moreover, the treatment significantly stimulated ROS production, and increased the phosphorylation of p38 and MAPKAPK-2 in the cells. Pretreatment with the antioxidant NAC (2.5, 5, and 10 mmol/L), or the p38 MAPK inhibitor SB203580 (2.5 and 5 μmol/L) dose-dependently attenuated these telekin-induced effects in the cells.

Conclusion:

Telekin suppresses hepatocellular carcinoma cells in vitro by inducing G₂/M phase arrest via activating the p38 MAPK pathway.     

茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制

探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响。1～2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯处理BE(2)-C细胞6～24 h后， MTT法检测瘤细胞生长活性， 克隆形成实验检测细胞增殖能力， PI单染流式细胞术检测细胞周期， AO/EB荧光染色法、 Hoechst 33258荧光染色法、 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡， 半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测细胞周期素D1(cyclin D1)、 X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein， XIAP)及survivin表达。结果表明， 各浓度茉莉酸甲酯作用后， BE(2)-C细胞呈时间、 浓度依赖性生长抑制， 1， 1.5和2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24 h后， 细胞生长抑制率为20.6%～85.5%(P<0.01)， IC₅₀为1.35 mmol·L^-1； S期细胞比率增高， 部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变， 早期凋亡细胞(FITC⁺ PI^-)分别占13.51%、 17.32%和24.59%(均P<0.01)，细胞死亡率分别为29.36%、 54.73%和75.52%(均P<0.01)； XIAP和survivin表达分别下调18.5%～68.9%和22.4%～48.7%(均P<0.05)， 而cyclin D1表达无显著变化(P>0.05)。可见， 茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长活性， 下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一。     

Saikosaponin-b regulates the proliferation and apoptosis of HepG2 cells by targeting the MACC1/c-Met/Akt signaling pathway

OBJECTIVE Metastasis-associated in colon cancer-1(MACC1)is an oncogene that has been newly identified.It promotes tumor proliferation and invasion via the MET pathway.Our study investigated the effects of Saikosaponin-b(SS-b)on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells and its regulation on MACC1/c-Met/Akt signaling pathway.METHODS HepG2 cells were treated with SS-b(10-800 g·L~(-1))for 48 h in vitro.The CCK-8 assay was used to assess cell proliferation,and cell apoptosis was determined by Hoechst33258 staining,AnnexinⅤ/PI staining and caspase 3 assay.RT-PCR was used to examine the expression of MACC1,c-MET and hepatocyte growth factor(HGF)mR NA.MACC1 protein was detected by Western blot and immunohistochemistry.The protein expressions of p-cMET,c-MET,p-AKT,AKT,p-BAD,BAD were measured by Western blot.RESULTS SS-b inhibited the growth of HepG2 cells in dose-dependent way and induced cell apoptosis significantly.HepG2 cells showed karyopyknosis,fragmentation and fluorescence highlight in SS-b treatment group.FCM results showed that apoptosis rate of HepG2 cells increased with SS-b concentration.The immunofluorescence results showed that the MACC1 expression decreased significantly in HepG2 cells treated with SS-b.The expression levels of MACC1,c-MET and HGF mR NA in HepG2 cells were significantly inhibited by SS-b.SS-b also significantly decreased the protein expressions of MACC1,p-c-MET and p-AKT while increased the expression of p-BAD and caspase 3 in HepG2 cells(P<0.05).CONCLUSION SS-b inhibited the proliferation and induced the apoptosis of HepG2 cells by targeting the MACC1/c-Met/Akt signaling pathway.     

槲皮素对肝癌HepG2细胞生长影响的体外研究

目的 观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及hTERT基因表达的影响.方法 以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,用透射电镜从形态变化方面了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性.结果 槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的半数抑药浓度（IC5o）为25.5μmol/L;形态学检测显示出了细胞凋亡的特征变化,经10-20 μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白降低,端粒酶活性被抑制.结论 槲皮素能呈时间、剂量依赖性地抑制肝癌细胞的生长,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达、抑制端粒酶活性、破坏端粒稳定性有关.