153Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究

目的研究153Sm通过二乙三胺五乙酸(DTPA)环酐(cDTPAa)为双功能络合剂标记抗CEA单抗的方法.方法确定cDTPAa与抗体偶联的最佳条件,并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性.结果 153Sm标记抗CEA单抗的方法简便、快速,且抗体与cDTPAa偶联后其免疫活性无明显丧失.在抗体浓度为20mg/ml时,最佳偶联条件为:抗CEA单抗与cDTPAa的摩尔比为1∶20,偶联反应中pH为7～8.在最佳偶联条件下,用高比活度的153Sm(22.2GBq/ml),CEAMcab-DTPA的标记率可达60%.结论通过DTPA环酐法将153Sm标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂.     

153Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究

目的研究153Sm通过二乙三胺五乙酸(DTPA)环酐(cDTPAa)为双功能络合剂标记抗CEA单抗的方法。方法　确定cDTPAa与抗体偶联的最佳条件,并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性。结果　153Sm标记抗CEA单抗的方法简便、快速,且抗体与cDTPAa偶联后其免疫活性无明显丧失。在抗体浓度为20mg／ml时,最佳偶联条件为抗CEA单抗与cDTPAa的摩尔比为1∶20,偶联反应中pH为7～8。在最佳偶联条件下,用高比活度的153Sm(22．2GBq／ml),CEAMcab-DTPA的标记率可达60％。结论　通过DTPA环酐法将153Sm标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂。     

99mTc螯合两种抗肝癌单链抗体的标记条件

目的:研究两种全新的抗肝癌基因工程单链抗体hdsFv和scFv-PE38的99mTc标记方法及适宜条件以应用于放免显像. 方法:选用二乙烯三胺五乙酸环酐(cDTPAa)作为螯合剂,沿用比较成熟的标记方法,以标记率和标记物免疫活性为指标分别测定两种单链抗体与99mTc偶联的适宜条件,并测定标记物的比活度和体外稳定性. 结果:其他理化条件不变,cDTPA与hdsFv的浓度比为20: 1～40: 1,99mTc活度37～148 MBq时,hdsFv标记率为62%～84%;cDTPA对scFv-PE38的浓度比为20: 1～100: 1,99mTc活度为37～148 MBq时,scFv-PE38标记率为68%～89%;且两种标记单链抗体的免疫活性均在60%以上. 结论:通过对这两种全新的单链抗体的标记和检测,得到了尽可能保持其原有免疫活性的标记条件,为通过放免显像在活体内检验单链抗体亲瘤性奠定了基础.     

90Y标记单克隆抗体CD45的研究

目的 制备^90Y标记的CD45单克隆抗体,为用^90Y-CDTPA-CD45mAb治疗急性白血病奠定基础。方法 利用环酐DTPA为络合剂,螯合^90Y与CD45mAb,并对^90Y-CDTPA-CD45mAb的标记率、放化纯度、稳定性、比活度、免疫活性进行检测。结果 在CDTPA与IgG的最佳摩尔比为20：1的条件下,^90Y-CDTPA-CD45mAb的标记率为95％,放化纯度达99．8％,稳定性良好,比活度为1.9mCi／mg,免疫活性与未标记的CD45mAb相比无明显差异。结论 ^90Y-CDTPA-CD45mAb是一个较理想的靶向治疗制剂．可以用于下一步的急性白血病治疗研究。     

抗原修复液pH值及修复时间对免疫组化染色效果的影响

目的:探讨使P504S、P63、CD10 、Ki-67抗原抗体复合物在免疫组化检测中获得高表达的抗原修复条件.方法:取前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和人乳头状瘤病毒感染的外阴上皮组织,用10%(体积分数)中性缓冲甲醛固定液固定.用EnVision二步法行免疫组化染色, P504S、P63、CD10、 Ki-67分别作为前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和感染人乳头状瘤病毒的外阴上皮组织的一抗,使用统一的EnVisionTM二抗.每种组织皆分别使用3种不同的缓冲液进行抗原修复:pH 6.0的枸橼酸缓冲液、pH 8.0的乙二氨四乙酸二钠(EDTA)缓冲液和pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液.对每一种抗原修复液,应用4个不同的抗原修复时间:12 min、20 min、25 min和30 min.染色完成后,镜下对比不同条件下抗原抗体复合物表达的情况.结果:P504S在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复20 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;P63在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复30 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高; Ki-67在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复25 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;CD10在不同pH值的缓冲液中修复20 min或25 min效果相同,都能得到最强表达.结论:不同的抗原有其各自最适合的抗原修复液、pH值范围和最适修复时间.相对来说, 高pH值的EDTA-Tris缓冲液的修复效果要优于低pH值的修复液.     

大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7 异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法：复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行 gG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合
理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果：HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25　600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2 h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coliO157∶H7反应明显 ,强荧光连续照射15 min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡
萄球菌反应。结论：本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coli O157：H7 FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157：H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。
     

抗原修复液pH值对淋巴组织免疫组化染色的影响

目的：研究抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响.方法：选用CD3、CD5、CD10、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、CyclinD1、κ、γ为一抗,Elivision二步法免疫组化染色.染色时分别用pH5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0的抗原修复液作微波抗原修复.结果：不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化.结论：本实验选用淋巴组织,抗原修复液选择pH7.0,8.0柠檬酸盐缓冲液均优于其它pH值,其中pH8.0染色效果最佳.修复液pH＞8.0影响切片附着,造成脱片.     

放射性碘标记格列本脲的初步研究

目的:获得髙比活度的核素标记药物.方法:试用无水碘标记法标记磺脲类药物格列本脲,并应用放射配体结合分析法测定大鼠心肌组织膜磺脲类药物受体的特性.结果:所获得的125I-格列本脲放射比活度较高(111 GBq/mmol),放化纯度为95.6%,125I-格列本脲可和大鼠心肌组织膜上磺脲类药物受体结合.结论:无水碘标记法是非水溶性物质核素碘标记法的理想方法之一.     

基于双功能螯合剂的99mTc间接标记depreotide的探索

目的探索使用采用双功能螯合剂作为偶联剂进行间接标记,以避免直接标记所带来的损伤。方法使用近年来常用的三种螯合剂HYNIC、NHS-MAG3及SHNH进行间接标记。结论三种标记体系的标记率、放化纯及比活度较高,为核素分子显像提供了必要的基础条件和临床应用前景。稳定性测定发现^99mTc-MAG3-depreotide在室温、血清以及血浆中更稳定。^99mTc HYNIC-depreotide和^99mTc-SHNH-depreotide在血液、心脏、胃、肠的分布显著较高。而^99mTc-MAG3-depreotide标记物主要经过肾脏排出体外,在血液、肝脏和肾脏中清除较快,而心脏、肺、肌肉、骨骼和脑组织放射性分布均较低,且在整个过程中变化不显著。     

抗乙型肝炎表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗实验研究

目的 探讨核素标记人源化抗(乙型肝炎)乙肝表面抗原Fab片段(抗HBsAg Fab)联合核素标记抗细胞核单克隆抗体(chTNT)瘤内注射治疗荷人肝癌移植瘤裸鼠的可行性和优越性,为临床应用核素标记多种不同性质的单克隆抗体进行放射免疫治疗肝癌提供实验依据.方法 荷瘤裸鼠分为五组,分别瘤内注射131I-抗HBsAg Fab、131I-chTNT、131I-抗HBsAg Fab联合131I-chTNT、131I-无关抗体(131HgG)及PBS.治疗后行SPECT显像观察标记抗体在肿瘤内的浓聚,并澍量肿瘤大小变化,计算肿瘤抑制率.结果 研究发现2种标记抗体联合应用组的肿瘤抑制率为73.09%,呀显高于131I-抗HBsAgFab组的47.8%和131I-chTNT组的54.26%.联合应用组标记抗体在肿瘤组织/非肿瘤组织内的放射活度比值(T/NT值)大于单独应用组.结论 131I-抗HBsAg Fab联合131I-chTNT瘤内注射放射免疫治疗可增加标记抗体在肿瘤组织内的浓聚.并能提高放射免疫治疗效果.