刺五加皂苷对糖基化终产物损伤内皮细胞的保护作用

目的:研究刺五加叶皂苷(ASS)对糖基化终产物(AGE)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法:  体外培养HUVECs,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白（AGE-BSA）。将细胞分为6组,即正常对照组、实验对照组（BSA组）、损伤组（AGE组）、损伤加入ASS低、中、高浓度组。将200 mg·L^-1 AGE作用于不同浓度(10、50和100 mg·L-1)ASS培养4 h的HUVECs,继续培养24 h,测定各组细胞增殖活力及培养液中血管性假血友病因子（vWF）、一氧化氮（NO）及乳酸脱氢酶（LDH）的含量。结果：与BSA组比较, AGE组HUVECs增殖活力明显降低(P<0.01),AGE组HUVECs培养液vWF和LDH含量明显增加(P<0.01),NO水平明显降低(P<0.01)。与AGE组比较,10、50和100 mg·L-1 ASS组HUVEC增殖活力明显增高(P<0.05),vWF 水平显著减少(P<0.05),LDH含量明显减少(P<0.05),NO生成量明显增多(P<0.05)。结论: ASS可抑制AGE对内皮细胞的损伤作用,且可抑制AGE减少NO生成的作用,ASS保护内皮细胞免受AGE损伤的机制可能与增加内皮细胞NO生成量有关。     

晚期糖基化终产物引起内皮细胞connexin43表达上调

目的研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白(gap junction protein)connexin43基因表达的影响。方法 D-葡萄糖孵育牛血清白蛋白制备糖基化牛血清白蛋白作为晚期糖基化终产物。体外常规培养的人脐静脉内皮细胞分为4组,分别为对照组,100、200和400mg/L AGEs干预组,干预24h后通过RT-PCR方法检测各组connexin43基因mRNA的表达有无差别;通过免疫荧光方法检测对照组和200mg/L AGEs干预组之间connexin43蛋白的表达水平有无差别。结果不同浓度(100、200、400mg/L)的AGEs干预24h均能引起人脐静脉内皮细胞con-nexin43基因mRNA的表达上调(P<0.01);200mg/L的AGEs干预24h引起人脐静脉内皮细胞connexin43基因的蛋白表达上调(P<0.01)。结论 AGEs体外短期干预可引起人脐静脉内皮细胞connexin43基因的mRNA和蛋白表达水平上调。     

三羟异黄酮对胆固醇诱导内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨胆固醇(cholesterol)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡、细胞增殖的影响,同时观察CuSO4溶液在其中的作用及三羟异黄酮(genistein,GST)干预HUVEC的损伤情况。方法:实验分为8组。对照组(等体积溶剂)、胆固醇低剂量组(25 mg/L)、中剂量组(50 mg/L)和高剂量组(100 mg/L);另外4组分别为以上各组加入终浓度为10μmol/L CuSO4溶液。应用流式细胞仪检测不同浓度胆固醇对细胞凋亡率的影响;应用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT试验)检测细胞的生存率。胆固醇损伤组(胆固醇50 mg/L+终浓度为10μmol/L的CuSO4溶液)分别加入GST 22.5μmol/L、45μmol/L和90μmol/L。结果:不同浓度的胆固醇可不同程度地诱导HUVEC细胞发生凋亡,抑制HUVEC细胞增殖,且随浓度增高,其作用均明显增强。各组加入CuSO₄溶液后可使其细胞凋亡率明显升高,增殖率下降。胆固醇损伤组的GSH-Px活力和NO生成量明显下降,丙二醛(MDA)含量升高,与正常对照组和不同剂量组比较差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01),而正常对照组和GST不同剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:胆固醇可以诱导内皮细胞凋亡及抑制细胞增殖,CuSO₄溶液可促进胆固醇对HUVEC的损伤。GST对被胆固醇损伤的内皮细胞有一定的保护作用。     

生地黄-山茱萸对AGEs致HUVEC细胞损伤的保护作用

目的 观察生地黄、山莱萸对晚期糖基化终产物(AGEs)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用.方法 体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、AGEs组、生地黄组、山茱萸组、生地黄-山茱萸分煎及合煎组,加入终浓度为0.125、0.062 5、0.031 25 g/L的药物预孵lh后,加入200 mg/L的AGEs作为刺激物,继续培养24h后,用CCK-8测定并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率;取各组细胞上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氲酶(LDH),ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β.结果 生地黄、山茱萸、生地黄-山茱萸(0.125、0.062 5、0.031 25 g/L)对AGEs致HUVEC损伤均有保护作用.AGEs组细胞上清液中SOD活性、NO含量降低(P＜0.05～0.01),MDA、LDH含量增加(P＜0.05～0.01),TNF-α、IL-1β分泌增加(P＜0.05～0.01).而各给药组能提高SOD活性、NO含量,降低LDH、MDA,减少TNF-α和IL-lβ分泌,与AGEs组比较有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论 生地黄、山茱萸、生地黄-山茱萸通过增加内皮细胞NO生成量、抑制氧化应激、调节细胞分泌功能来保护血管肉皮细胞的,尤以生地黄-山茱萸保护HUNEC最为明显.     

晚期糖基化终产物对内皮细胞Connexin40基因表达的影响

目的 研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin40 基因表达的影响.方法 D- 葡萄糖孵育牛血清白蛋白制备糖基化牛血清白蛋白作为晚期糖基化终产物.体外常规培养的人脐静脉内皮细胞分为4组,分别为对照组、100mg/L AGEs 干预组、200mg/L AGEs 干预组和400mg/L AGEs 干预组,干预24h 后通过RT-PCR 方法检测各组Connexin40 基因mRNA 的表达有无差异;通过免疫细胞荧光方法检测对照组和200mg/LAGEs 干预组之间Connexin40 基因蛋白的表达水平有无差异.结果 不同浓度(100、200、400mg/L)的AGEs 干预24h 均能引起人脐静脉内皮细胞Connexin40 基因mRNA 的表达减少(均P＜0.01);200mg/L 的AGEs 干预24h 引起人脐静脉内皮细胞Connexin40基因的蛋白表达减少(P＜0.01).结论 AGEs 体外短期干预可引起人脐静脉内皮细胞Connexin40 基因的mRNA 和蛋白表达水平减少.     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的调节作用。方法Wistar大鼠喂以高糖高脂饲料加链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立的2型糖尿病大鼠模型。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、2型糖尿病模型组、银杏叶提取物治疗组及氨基胍治疗组。12周末应用原位杂交法观察大鼠主动脉内皮细胞糖基化终产物受体mRNA表达。结果2型糖尿病模型组大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达增加,明显高于对照组(P<0.01);银杏叶提取物治疗组及氨基胍治疗组大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达降低,低于模型组(P<0.05)。结论银杏叶提取物能抑制糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达,对高血糖及糖基化终产物(AGE)造成主动脉血管损伤具有保护作用。     

生地环烯醚萜苷类成分对AGEs损伤HUVEC的保护作用

目的观察生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷对晚期糖基化终产物（AGEs）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、模型组、梓醇组及毛蕊花糖苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L的药物分别预孵1 h后,加入200 mg/L的AGEs作为刺激物继续培养,24 h后用MTT法检测并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率。体外培养HUVEC,加入氨基胍及梓醇、毛蕊花糖苷（终浓度分别为1、10、100 μmol/L）预孵1 h后,加入终浓度为200 mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,24 h后取各组细胞培养上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和NO;ELISA法测定内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子-β(TGF-β)及白介素1β(IL-1β)。结果生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷（0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L）可减轻AGEs致HUVEC的损伤。与空白对照组比较,模型组细胞上清液中ROS、AngⅡ、MDA含量增加（P<0.05~0.01）,SOD活力和NO水平降低（P<0.05~0.01）,TGF-β、IL-1β分泌增加（P<0.05~0.01）。而梓醇、毛蕊花糖苷给药组（1、10、100 μmol/L）能不同程度的降低ROS、AngⅡ、MDA含量,升高SOD活力和NO水平,减少TGF-β、IL-1β分泌,与模型组比较具有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷可通过抑制氧化应激、调节内皮细胞分泌功能、抑制炎症因子及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞。      

流式细胞术观察晚期糖基化终产物导致的血管内皮细胞氧化应激

目的：研究晚期糖基化终产物（AGE）修饰蛋白引起内皮细胞氧化应激的作用。方法：内皮细胞来自培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。将内皮细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白（AGE－HSA）共同培养，以二氢二氯荧光素标记细胞，流式细胞仪检测细胞的荧光强度。结果：AGE－HSA以时间和剂量依赖的方式刺激内皮细胞氧化水平增高，此作用可被抗氧化剂N－乙酰半胱氨酸（NAC）抑制。结论：AGE修饰蛋白能够引起血管内皮细胞的细胞内氧化水平增高，这一作用可能参与了AGE相关性疾病血管病变的发生、发展。     

恒磁场对糖基化终产物作用下内皮细胞分泌细胞间黏附分子-1及与单核细胞黏附的影响

目的观察不同强度恒磁场对糖基化终产物(AGE)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及HUVEC与人单核细胞株THP-1黏附的影响。方法采用体外培养第3代的HUVEC,实验分为6组,即对照组、AGE组(AGE-BSA100μg/L)及AGE+不同强度(1、5、10、20Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVEC分泌I-CAM-1的量,计数法观察HUVEC与THP-1的黏附率。结果AGE组细胞ICAM-1的分泌量显著增高(P<0.05vs对照组),而1、5、10和20Gs恒磁场组细胞ICAM-1的分泌量显著低于AGE组(P<0.05)。AGE组HUVEC与THP-1的黏附率显著增加(P<0.05vs对照组),而1、5、10和20Gs恒磁场组HUVEC与THP-1的黏附率显著低于AGE组(P<0.05)。结论1-20Gs的恒磁场可拮抗AGE的作用,抑制HUVEC分泌ICAM-1及与单核细胞的黏附率。     

晚期糖基化终产物通过p38信号通路抑制内皮细胞合成一氧化氮的研究

目的　研究晚期糖基化终产物 (AGE)修饰蛋白对内皮细胞生成一氧化氮 (NO)的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)信号传导通路在此病理过程中的作用。方法　用来自培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)和人内皮细胞株ECV30 4。将内皮细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白(AGE HSA)、AGE修饰牛血清白蛋白 (AGE BSA)在体外共同培养。用Griess法检测培养上清的NO水平 ;用免疫沉淀 激酶活性测定法测定细胞p38 MAPK活性。结果　AGE HSA和AGE BSA以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞生成NO ,同时导致p38信号通路激活 ;未经修饰的HSA和BSA无此作用 ,AGE HSA和AGE BSA的抑制作用亦无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;p38通路特异阻断剂SB 2 0 35 80完全阻断AGE修饰蛋白对内皮细胞生成NO的抑制效应 ,提示AGE修饰蛋白对内皮细胞的这一生物学作用是由p38通路介导的。AGE修饰蛋白激活HUVECp38通路。在AGE修饰蛋白作用 10min时 ,p38激酶磷酸化活性明显升高 ,在 30min时到达高峰 ,在 12 0min时回到基础水平。p38磷酸化激酶的磷酸化作用随着AGE修饰蛋白浓度的增高而加强。以ECV30 4细胞株为靶细胞时 ,AGE修饰蛋白对p38通路的活化作用与对HUVEC相同。AGE BSA对内皮细胞p38通路的活化作用与AGE HSA相同。结论本研究证实 ,AGE修饰蛋白能     

Structural and functional changes of immune system in aging mouse induced by D-galactose

Objective To investigate the role of D-galactose, especially in the structural and functional changes of the immune system in aging. Methods Serum levels of advanced glycation end-products （AGE） were determined by ELISA method. Ultra-structures of thymus and spleen were detected by transmission electron microscopy. MTT method was used to determine the lymphocyte proliferation. IL-2 activity was determined by bioassay. Northern blot was used to detect the IL-2 mRNA levels. Results Serum AGE levels of D-galactose- （P〈0.01） and AGE-treated （P〈0.05） mice （n=8） were increased significantly. The ultra-structures of thymus and spleen in D-galactose- and AGE-treated mice showed regressive changes similar to those in the aged control group. The lymphocyte mitogenesis and IL-2 activity of spleen were also decreased significantly （P〈0.01, n=8）. The change of IL-2 activity shown by Northern blot resulted from the change of mRNA expression. The AGE plus aminoguanidine group, however, showed no significant change in these parameters in comparison with the young control group （P〈0.01 or P〈0.05, n=8）. Conclusion D-galactose and AGE lead to a mimic regression change of aging in the immune system in vivo.     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠血管内皮功能的保护作用

目的:评价不同剂量阿托伐他汀治疗对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮功能的保护作用。方法:18只SHR随机分为3组:SHR对照组、阿托伐他汀50mg组和10 mg组;6只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组。给药共10周,分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压(SBP),测定血浆一氧化氮(NO)、血管性假性血友病因子(vWF)及血脂含量。结果:用药前SHR各组SBP均显著高于WKY组(P<0.01);阿托伐他汀50 mg组在给药后第6、8、10周和阿托伐他汀10 mg组在给药后第10周,SBP明显低于SHR对照组(P<0.05或P<0.01)。SHR对照组血浆NO浓度明显低于WKY正常对照组(P<0.01);给药10周后,用药2组血浆NO浓度明显高于SHR对照组(P<0.01或P<0.05)。SHR对照组血浆vWF浓度明显高于WKY正常对照组(P<0.01);给药10周后,用药2组血浆vWF浓度明显低于SHR对照组(P<0.01)。同时,用药2组血脂水平低于SHR对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:阿托伐他汀可降低血压,并通过提高血浆NO浓度和降低vWF浓度等机制改善血管内皮功能。     

还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠肾小球内皮功能的影响

目的:观察早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小球内皮功能的特点,探讨还原型谷胱甘肽对早期DN大鼠内皮功能的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组和治疗组,应用链脲佐菌素腹腔注射建立DN模型,治疗组每天腹腔注射还原型谷胱甘肽。应用相关试剂盒检测尿白蛋白(UA)、肾小球组织一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性、血管性假性血友病因子(vWF)和超氧化物歧化酶、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶。结果:与对照组比较,模型组早期DN大鼠肾小球NO含量、eNOS活性均显著下降,vWF水平明显升高,UA显著增加(P<0.01),且UA增加的程度与vWF升高的水平呈正相关关系(P<0.05);肾小球组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶均明显下降,MDA明显升高(P<0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠肾小球NO含量、eNOS活性均明显上升,vWF水平显著降低,UA明显减少,肾小球组织中MDA显著下降(P<0.01)。结论:早期DN大鼠肾小球内皮功能紊乱,氧化应激水平明显升高,还原型谷胱甘肽可能通过降低早期DN大鼠肾小球内氧化应激水平从而改善肾小球内皮功能。     

葡萄籽原花青素对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响

目的:观察葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin,GSPC)对2型糖尿病(2-DM)大鼠体内氧化应激的影响.方法:60只Wistar大鼠,随机选取10只为正常对照组,余下50只大鼠给予高糖高脂饮食加尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2-DM模型后,随机以10只一组分为4组,分别为2-DM模型对照组,葡萄籽原花青素(GSPC)低、中、高三个剂量组.灌胃治疗8周后,用分光光度法比较各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(super oxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)水平.结果:与2-DM模型组比较,GSPC组可以显著升高血清SOD、NO、NOS(P＜0.01),降低MDA水平(P＜0.01).结论:GSPC能够降低2-DM大鼠的氧化应激水平,对2-DM有一定的预防和治疗作用.     

片仔癀对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 观察片仔癀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 用MTT法检潮片仔癀对HUVEC增殖的影响,用划痕损伤实验观察片仔癀对HUVEC的迁移的影响.结果 片仔癀干预6、12、24、48 h后,与空白对照组比较,各剂量组抑制HUVEC的增殖能力(P＜0.01),且有剂量和时间依赖;片仔...     

不对称二甲基精氨酸在冠心病临床分型中的应用

目的：测定冠心病患者中稳定型心绞痛和急性冠脉综合征的血浆不对称二甲基精氨酸（ADMA）、一氧化氮（NO）和血管性血友病因子(vWF)水平,探讨其与冠心病各临床类型之间的关系。方法：按纳入与排除标准入选了143例研究对象,其中包括非冠心病组64例,急性冠脉综合征组54例和稳定性心绞痛组25例。检测各组血浆 ADMA,NO和vWF水平,并分析它们与急性冠脉综合征和稳定性心绞痛之间的相关性。结果：与非冠心病组和稳定型心绞痛组比较, 急性冠脉综合征血浆 ADMA水平显著升高（P<0.05）。与非冠心病组相比, 稳定型心绞痛组血浆 ADMA水平有升高趋势但差异无统计学意义（P>0.05）; 与非冠心病组相比,稳定型心绞痛和急性冠脉综合征组血浆 NO水平均显著下降（P<0.05）,急性冠脉综合征组下降的程度明显大于稳定型心绞痛组（P<0.05）;与非冠心病组相比,稳定型心绞痛组和急性冠脉综合征组血浆 vWF水平均显著升高（P<0.05）。稳定型心绞痛组和急性冠脉综合征组之间血浆 vWF水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：血浆 ADMA水平变化与冠心病中急性冠脉综合征的发生发展密切相关,血浆 ADMA水平的变化可能是急性冠脉综合征的预测因子。