石上柏和蒲葵子对蛋白激酶C活性的影响

采用DE52柱层析法部分纯化大鼠中的蛋白激酶C，研究了石上柏和蒲葵子醇提物对蛋白激酶C活性的影响。为了证明测定系统的可靠性，观察了多粘菌素B（已知蛋白激酶C抑制剂）对蛋白激酶C活性的影响。表明：石上柏醇提物对蛋白激酶C有强烈的抑制作用，IC502．2μg／ml；100μg／ml的蒲葵子醇提物对蛋白激酶C的抑制率为66．6％，降低药物浓度抑制作用减弱；多粘菌素B对蛋白激酶C有抑制作用，IC5017．7U／ml。     

西瑞香素体外抑制破骨细胞分化和促进成骨细胞增殖的活性研究

目的:研究西瑞香素对破骨细胞分化及成骨细胞增殖作用的影响。方法:以依普黄酮(10~(-8)mol/L)作为阳性对照,采用1α,25-(OH)2Vit D3诱导乳兔骨髓细胞获得破骨细胞,通过TRAP活力测定、TRAP+细胞计数和骨吸收陷窝面积检测西瑞香素对破骨细胞分化及骨吸收活性的影响;并采用MTT法测定西瑞香素对MC3T3-E1Subclone14成骨细胞增殖作用的影响。结果:不同浓度的西瑞香素均对破骨细胞分化及骨吸收活性均具有抑制作用,其中10~(-5)mol/L剂量组的抑制作用最为显著;西瑞香素对成骨细胞增殖具有促进作用,其中10-5mol/L剂量组的促进作用最为显著。结论:西瑞香素能抑制破骨细胞活性和促进成骨细胞增殖。     

高效液相色谱法测定大风丸中蛇床子素的含量

目的建立大风丸中蛇床子素含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，Diamonsil ODS1 C18柱，流动相为甲醇-0．1mol／L硫酸铵溶液（70：30），用硫酸溶液（1→5）调pH为2．5，流速为1．0mL／min，检测波长322nm。结果蛇床子素在0．101-0．808μg范围内呈良好线性，回归方程为r=9．964406×10^-3X-1．355684×10^-3，r=0．9995，平均加样回收率为98．4％，RSD=1．40％（n=6）。结论本方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，是大风丸中蛇床子素定量分析的有效方法。     

丹参酮ⅡA抗宫颈癌鳞癌细胞增殖效应及其雌激素受体亚型介导机制的研究

目的观察丹参酮ⅡA对宫颈癌鳞癌Siha细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法不同浓度丹参酮ⅡA作用人宫颈癌鳞癌Siha细胞,MTT法和流式细胞术测定Siha细胞增殖速率和增殖周期分布,Western blot测定Siha细胞磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、细胞周期蛋白(Cyclin)D表达。结果 1×10-5、5×10-6、1×10-6、5×10-7 mol/L丹参酮ⅡA显著抑制宫颈癌鳞癌Siha细胞增殖,该抑制作用可被雌激素受体(ER)α拮抗剂MPP增强、可被ERβ拮抗剂PHTPP减弱;1×10-5、5×10-6、1×10-6 mol/L丹参酮ⅡA干预后Siha细胞增殖指数显著下降;1×10-5、5×10-6、1×10-6、5×10-7 mol/L丹参酮ⅡA干预后Siha细胞p-ERK、Cyclin D蛋白表达水平显著降低。结论丹参酮ⅡA抑制宫颈癌鳞癌Siha细胞增殖是通过靶细胞ER途径实现的,并通过降低p-ERK、Cyclin D表达量发挥抗增殖作用。     

固真方对UMR106成内样细胞蛋白激酶活性的影响

探讨中药固真方对细胞信号体系中蛋白激酶活性的影响。结果：表明经固真方处理的大鼠UMR106成骨样细胞的蛋白激酶A、蛋白激酶C以及酪氨酸蛋白激酶活性均有增高,分别为对照组的137．5％、362．4％及202．6％（P＜0．01或P＜0．05）。提示：固真方可活跃和增进细胞的信号转导,这可能是其促细胞增殖的一种机制。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞，观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞，利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大，观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量），同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05），对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）；②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）；③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加，加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大，抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

绿萝花中抗2型糖尿病PPARs激动剂的筛选

目的筛选绿萝花中抗2型糖尿病的过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARs)激动剂。方法建立Hep G2胰岛素抵抗细胞模型以降低细胞中PPARs水平后,分别给予绿萝花中9种成分[水杨酸、去甲基丁香色原酮、银锻苷、十五烷酸、伞形酮、西瑞香素、结香酸、结香苷C、(3S)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸,浓度均为40、80μmol/L],Western blot法检测各成分对PPARs蛋白表达的影响。结果在40、80μmol/L浓度下,结香苷C、西瑞香素均可双重激活PPAR-α/γ,银锻苷可双重激活PPAR-α/β;在80μmol/L浓度下,十五烷酸、西瑞香素、银锻苷均可激活PPAR-α/β/γ三重表达,以上差异与模型组比较均有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01)。结论绿萝花中十五烷酸、西瑞香素、结香苷C、银锻苷均有着成为抗2型糖尿病PPARs激动剂的潜力。     

瑞香毒素和密执毒素对蛋白激酶Cα、β1、δ和ξ的不同活性

瑞香毒素是从白花欧瑞香 Daphne gni-dium 茎皮中分得的。密执毒素是从欧瑞香D.mezereum 分得的,是蛋白激酶 C(PKC)激活剂,具抗白血病活性。有报道称瑞香毒素无此活性。瑞香毒素是密执毒素的衍生物,作者通过体内可变酵母表型试验比较了二者对PKC 经典型(α、β)、新型(δ)和非典型(ζ)等4     

单扫示波极谱法测定槐米和芦丁制剂中芦丁的含量

利用单扫示波极谱法测定了槐米和芦丁制剂（芦丁片、复方芦丁片）中芦丁的含量。芦丁在0．1mol／LNaAc－HAc缓冲液（pH=3．5）中于-1．38V（vs．SCE）左右产生灵敏的还原波。主峰与其浓度在1．0×10-8～9．0×10-4mol／L范围内呈线性关系，检测限为1．5×10-10mol／L。考察了人体中常见物质的影响，探讨了电极反应机理。对样品可不经分离，直接测定，方法简便，准确可靠。     

汉黄芩素对肺癌肿瘤细胞生长和转移抑制作用机制的研究

目的:探讨明胶酶(MMP-2)、表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)和氨肽酶N(APN)抑制剂汉黄芩素对肺癌细胞的生长和转移抑制机制。方法:本文采用酶抑制学方法,研究了汉黄芩素(0~100μmol/L)对MMP-2、APN和EGFR-TPK的抑制作用,并进一步的分析了汉黄芩素(0~100μmol/L)对肺癌A549的生长、细胞转移的抑制作用和A549细胞中TIMP-2和TGF-β1表达水平的影响,酶标仪吸光度法检测细胞凋亡蛋白Caspase 3活性。结果:汉黄芩素能够抑制MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性(汉黄芩素半抑制浓度IC50分别为7.26±0.33、7.11±0.43和5.32±0.22μmol/L)和诱导A549的凋亡(汉黄芩素半抑制浓度IC50为49.13±4.90μmol/L);随着汉黄芩素作用浓度(1、10、50、100μmol/L)的增加,TGF-β1表达均呈现降低趋势,TIMP-2的表达呈增加趋势,且A549细胞穿过人工基底膜的能力下降而凋亡蛋白Caspase 3活性增加。结论:汉黄芩素通过诱导TIMP-2表达增强和TGF-β1表达的降低,对MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性产生抑制作用,对Caspase 3活性产生激活作用,最终对肺癌A549细胞的转移和凋亡起到重要作用。     

蛋白激酶抑制剂调控木犀草素与葡萄糖醛酸结合的研究

目的探究蛋白激酶抑制剂对木犀草素与葡萄糖醛酸结合的影响。方法分别将不同浓度的蛋白激酶抑制剂(姜黄素和钙感光蛋白C)与LS174T细胞共孵育1 h后裂解细胞,获得的细胞S9成分与木犀草素进行体外孵育,用高效液相色谱法测定孵育液中葡萄糖醛酸结合产物。通过Real-time PCR和Western blot分别测定处理后的LS174T细胞中UGT1A在mRNA水平和蛋白水平的表达变化。结果木犀草素与经蛋白激酶抑制剂处理后的细胞共孵育,其葡萄糖醛酸结合受到抑制。而Real-time PCR和Western blot均表明,蛋白激酶抑制剂对UGT1A的表达无影响。结论蛋白激酶抑制剂可抑制木犀草素与葡萄糖醛酸的结合,而这种抑制作用是间接的。蛋白激酶抑制剂很可能通过调控UGTs磷酸化修饰而改变UGTs活性进而导致木犀草素与葡萄糖醛酸结合减少。     

腺苷酸蛋白激酶活化在红景天苷抑制同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞内质网应激中的作用

目的:探讨腺苷酸蛋白激酶(AMPK)活化在红景天苷(Sal)抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)内质网应激中的作用。方法:将AMPK基因的siRNA载体(AMPK-si-RNA)转染HUVECs后,用红景天苷或AMPK的选择性激动剂5-氨-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)预孵育2 h,再加入Hcy处理24 h,实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)检测免疫球蛋白结合蛋白(Bi P)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平,Western Blot检测Bi P、CHOP、AMPK的蛋白表达变化,双链RNA依赖的PKR内质网激酶(PERK)、翻译起始因子(e IF2α)和AMPK的磷酸化水平。结果:与空白对照组相比,单用Hcy处理组的Bi P和CHOP基因表达和蛋白表达都显著升高(P<0.01),PERK和e IF2α的磷酸化水平升高(P<0.01),与单用Hcy处理组相比,红景天苷和AICAR预处理组均能抑制Hcy导致的Bi P和CHOP的基因和蛋白表达(P<0.05),降低PERK和e IF2α的磷酸化水平(P<0.05),而AMPK-si-RNA转染细胞后,红景天苷抑制Bi P和CHOP基因和蛋白表达的能力下降,抑制PERK和e IF2α的磷酸化水平的能力也相应降低。结论:红景天苷抑制Hcy诱导的内质网应激是由AMPK活化介导的,从而发挥内皮保护的效应。     

中药干预糖尿病鼠肾脏蛋白激酶C信号通路的研究进展

细胞信号转导系统己成为近年来研究糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的热点之一,高糖作为始动因子,诱导蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路激活并促进DN发生、发展的研究倍受关注。诸多研究显示PKC信号通路的异常激活参与了DN的发生发展,且其重要作用已逐渐确立:PKC信号通路激活可明显影响血液动力学、增加血管通透性以及细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)沉积、抑制Na+-K+-ATP酶活性和参与细胞增殖等。并且PKC抑制剂的使用为DN防治开辟了新视角与途径。研究证实,单味中药及其提取物(如牛蒡子及其提取物、槲皮素等)及一些中药复方(如菟箭合剂、六味地黄加味胶囊等)对DM鼠肾脏有部分保护作用,对PKC信号通路也有良好的抑制作用。但现有研究证据表明PKC信号通路抑制剂多为非特异性,且副作用大,而特异性PKC信号通路抑制剂尚在研究中,且迄今无成功应用到临床的先例。因此,随着中药现代化研究加快,深入研究中药抑制PKC信号通路激活,对从信号通路干预DN进展具有重要意义。本文就目前中药干预PKC信号通路与DN研究进展综述,为今后用中药作为PKC抑制剂来防治DN提供一定实验与理论依据。     

丹参酮IIA对自发性高血压大鼠蛋白激酶C的影响

目的观察丹参酮IIA对自发性高血压大鼠蛋白激酶C的影响,探讨丹参酮IIA防治高血压心肌肥厚的机制.方法将18只8周龄的自发性高血压大鼠随机分成三组一组于8周处死,另两组经腹腔分别注射丹参酮IIA和蒸馏水,共10周.测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)及左心室重量指数(LVMI).应用HE染色、免疫组织化学的方法,结合计算机图像分析技术,检测心肌细胞的直径和面积,以及蛋白激酶C(PKC)的表达.结果与8周龄的自发性高血压大鼠相比,18周龄大鼠的SBP、LVMI、心肌细胞的直径和面积显著增加,PKC表达上调.丹参酮IIA可抑制LVH的发展和心肌组织PKC的表达,但收缩压无明显改变.结论长期应用丹参酮IIA可预防自发性高血压大鼠左室肥厚的形成,其机制可能与丹参酮IIA能降低心脏蛋白激酶C的表达有关.     

Coptidis Rhizoma Water Extract Stimulates 5'-AMP-Activated Protein Kinase in Rat Skeletal Muscle

AIM:Coptidis Rhizoma(CR),the dried rhizomes of Asian herbs(including Coptis chinensis Franch),has been used to treat diabetes mellitus for thousands of years.We explored the possibility that CR acts directly on skeletal muscle,the major organ responsible for glucose homeostasis,and activates 5'-AMP-activated protein kinase(AMPK),a signaling intermediary leading to metabolic enhancement of skeletal muscle.METHODS:Isolated rat epitrochlearis and soleus muscles were incubated in a buffer containing a CR water ...     

赤芍对内膜增殖机制中丝裂素活化蛋白激酶信号通路的影响探讨

目的:观察赤芍对家兔颈动脉血管成形术后内膜增殖及丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)mRNA表达的影响。方法:新西兰白兔随机分为对照及赤芍组,各组均饲喂高脂饲料(普通饲料 2%胆固醇 5%猪油)。赤芍组按剂量给予赤芍提取物:高剂量组(相当于生药3g.kg-1.d-1)、中剂量组(相当于生药2g.kg-1.d-1)、低剂量组(相当于生药1g.kg-1.d-1)。血管成形术后,取材血管行RT-PCR检测MKP-1mRNA表达、形态学测定、免疫组化染色。结果:与对照组比较,增生内膜面积、增生内膜面积/中膜面积显著减少(P<0.05或P<0.01);MKP-1mRNA表达显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论:赤芍增加高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后MKP-1mRNA表达,减轻内膜增殖程度。表明内膜增殖程度的减低与赤芍阻断MAPK信号通路有关。     

匙羹藤对胰岛素抵抗小鼠脂肪组织蛋白激酶B 的影响

目的：观察匙羹藤对胰岛素抵抗（IR）KKAy 小鼠脂肪组织中蛋白激酶B 表达及磷酸化的影响以及调节机制。方法：将18只胰岛素抵抗KKAy小鼠按体质量随机分为模型组（DM）和匙羹藤水提物组（GS）,并选取9只C57BL/6J小鼠为正常对照组（NC）,连续灌胃给药8周。实验结束后取血测定空腹血糖（FPG）,空腹血清胰岛素（Fins）,并计算胰岛素敏感指数（ISI）,测定附睾脂肪组织中磷酸激酶依赖的激酶1（PDK1）、蛋白激酶B（PKB）、P-PKB（Ser473）,P-PKB（Thr308）蛋白相对含量,及磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）mRNA 相对含量。结果：与DM 组相比,GS组小鼠FPG、Fins降低,ISI升高,P-PKB（Ser473）蛋白相对含量及其磷酸化水平升高,P-PKB（Thr308）蛋白相对含量升高,PDK1蛋白相对含量降低,PTENmRNA表达量降低。结论：匙羹藤可通过增加脂肪组织中P-PKB（Ser473）蛋白相对含量,增强Ser473位点磷酸化水平,以及增加P-PKB（Thr308）蛋白相对含量激活PKB,进而改善IR。     

参元丹晚期药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌PKC及HSP70的影响

目的应用免疫组化法观察蛋白激酶C（PKC）及热休克蛋白（HSP70）表达,探讨参元丹（SYD）的晚期药理性预适应作用及其机制。方法选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只。随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、晚期假性缺血预处理组、晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组。每组10只。分别造模,取血、心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,彩色病理图像分析心肌梗死面积。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果彩色病理图像分析,SYD能够代替心绞痛缺血、缺氧刺激,减小心肌梗死面积,具有晚期药理性预适应的心脏保护作用。晚期假性缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组无PKC的表达,提示PKC未参与晚期缺血预适应的细胞内信号转导。晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组均有HSP70大量表达,晚期药物预处理组亦有HSP70表达,提示晚期缺血预处理的心肌保护作用机制与HSP70有关,SYD具有独立的晚期药理预适应作用,晚期药物预处理组＋缺血预处理组的HSP70表达有SYD作用存在;SYD的心肌保护作用机制与HSP70有关。结论SYD具有晚期药理预适应样心肌保护作用;SYD晚期预适应心肌保护作用的机制可能与HSP70的介导有关;SYD晚期预适应可能与缺血预适应协同发挥心肌保护作用。     

糖脂平胶囊对胰岛素抵抗大鼠蛋白激酶B表达的影响

目的:研究中药糖脂平胶囊对胰岛素抵抗(IR)模型大鼠肌肉胰岛素信号转导系统基因蛋白激酶B(Akt/PKB)表达的影响.方法:高脂饲料建立IR大鼠模型,以糖脂平胶囊、罗格列酮观察,8周后测定空腹血糖(FBG)、胰岛素(INS)、葡萄糖输注率(GIR).取骨骼肌进行PCR扩增,观察Akt/PKB表达情况.结果:经钳夹鉴定IR模型建立.模型组FBG较正常组明显升高(P<0.01),与中药组和西药组相比均有统计学意义(P<0.05).西药组GIR较中药组更为明显(P<0.01,P<0.05).OD值中药组(93.33%)比西药组(87.42%)高5.91%.结论:中药和西药组均能缓解高胰岛素状态,改善高脂诱导IR大鼠糖代谢.中药组在骨骼肌AKt/PKB传导通路表达方面,较西药组敏感,可增强胰岛素生物效应,并改善IR.     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1(ERK1)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水组、(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水组、(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组、(4)FN+10%kxr组、(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测ERK1蛋白的表达,采用RT-PCR法测定ERK1mRNA的表达。结果:与FN组相比,kxr组肝星状细胞的ERK1mRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了54.36%(35.98%)、66.08%(49.59%)、72.82%(59.15%),均有显著性差异。结论:kxr能够在转录及翻译水平抑制ERK1mRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的MAPK途径的信号转导。