软坚散结胶囊含药血清调控VEGF-ERK信号通路诱导胃癌细胞凋亡机制研究

目的研究VEGF-ERK信号通路在软坚散结胶囊含药血清诱导胃癌SGC7901细胞凋亡过程中的变化,探讨软坚散结胶囊含药血清调控胃癌细胞凋亡的机制。方法制备软坚散结胶囊含药血清;激光共聚焦显微镜观察软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞形态变化;流式细胞仪检测软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞凋亡率;Western Blot检测软坚散结胶囊含药血清对人胃癌SGC7901细胞ERK、P-ERK及VEGF蛋白表达影响。结果软坚散结胶囊含药血清处理细胞后,激光共聚焦显微镜下见:阴性对照组以正常活性细胞为主,Annexin V和PI均为低染,细胞膜完整,细胞形态正常;低剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核着色浅或不着色;中剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核呈桔红色荧光;高剂量组PI高染,细胞核呈红色荧光,出现部分细胞的细胞膜破裂、细胞核呈大小不等形态不规则的碎片状,为典型的细胞凋亡形态特征。流式细胞仪检测经阴性对照组及低中高剂量组含药血清处理的SGC7901细胞后,各组细胞凋亡率分别为:(6.053±0.223)%、(9.117±1.583)%、(23.663±3.428)%、(37.707±1.328)%,细胞凋亡率随软坚散结胶囊含药血清剂量的增加而升高。Western Blot检测发现SGC7901细胞中VEGF蛋白水平随含药血清剂量的增加而降低(P0.05);ERK蛋白表达无明显变化(P0.05),P-ERK(ERK磷酸化)蛋白水平随含药血清剂量增加而降低(P0.05)。结论软坚散结胶囊含药血清能诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡;其作用机制可能是通过抑制VEGF蛋白表达,调控ERK信号通路,抑制ERK磷酸化(p-ERK)表达进而促进胃癌细胞凋亡。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

Caspase-3抑制剂对兔体外循环心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨Caspase-3抑制剂对兔体外循环心肌细胞凋亡的作用.方法:将24只健康新西兰大耳白兔随机分为3组:正常对照组、体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)组和Caspase-3抑制剂组.采用原位末端标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡的改变;借助Caspase-3活性检测试剂盒,荧光比色法检测心肌细胞凋亡过程中Caspase-3活性的变化;应用半定量RT-PCR技术分析心肌细胞凋亡过程中Caspase-3 mRNA的表达.结果:Caspase-3抑制剂组心肌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)为(4.24±1.36)%,与CPB组(7.28±2.28)%相比明显降低(P＜0.01);Caspase-3抑制剂组的Caspase-3活性比CPB组降低了47.44%(P＜0.01);Caspase-3 mRNA的表达分析显示,Caspase-3抑制剂组明显低于CPB组(P＜0.01).结论:Caspase-3抑制剂对兔体外循环心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制与抑制凋亡途径中关键蛋白酶Caspase-3的活性有关.     

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L).噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析.结果 与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少.结论 高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡.     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

目的 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用.方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、高糖组(B组,200 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆),4-苯基丁酸含药血浆组(D组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆).培养48 h后,采用免疫荧光细胞化学法、流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Western blot法、RT-PCR法分别检测Caspase-12蛋白或mRNA表达水平的变化.结果 与A组比较:在高糖状态下B组足细胞凋亡率、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较:C组、D组足细胞凋亡率,Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与C组比较:D组足细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);但Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Caspase-12表达上调,是足细胞凋亡的分子机制之一;10％左归降糖益肾方含药血浆可能通过降低Caspase-12的表达水平,从而保护足细胞.     

IGF-1对大鼠缺血、缺氧神经元p-JNK及p-P38表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对缺血、缺氧大鼠脑皮质神经元凋亡的保护作用及作用机制。方法原代培养新生大鼠脑皮质神经元,建立缺血、缺氧细胞模型,观察IGF-1及IGF-1受体抑制剂(AG1024)对该模型细胞存活率(MTT试验)、细胞凋亡(流式细胞法)、JNK、P38表达(Western blot法)和Caspase-3活性(荧光测定法)的影响。结果 IGF-1(HII组)及AG1024(HIIA组)干预细胞模型24h后,模型细胞存活率分别为(77.00±3.80)%、(62.00±4.40)%;凋亡率分别达到14.58%、24.97%。IGF-1组可明显抑制p-JNK及p-P38的表达及Caspase-3的活性。结论 IGF-1对缺血、缺氧神经元损伤有一定的保护作用,并通过调控p-JNK、p-P38及Caspase-3的表达抑制缺血、缺氧神经元的凋亡。     

解毒化浊方诱导HER-2阳性乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的研究

目的采用解毒化浊方血清干预乳腺癌SK-BR-3细胞,观察中药血清诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。方法 8只雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组,每组2只,给药制备含药血清,中药血清分24h、48h时间干预SK-BR-3细胞,采用流式细胞技术检测含药血清干预乳腺癌细胞后细胞凋亡率。结果含药血清干预SK-BR-3细胞24h后,与对照组比较,各用药组早期细胞凋亡率、总凋亡率明显增加,西药组[(4.76±0.63)%、(7.00±1.75)%]、联合组[(6.93±0.76)%、(9.93±0.28)%]较对照组[(1.03±0.23)%、(2.53±0.42)%]增加明显(P0.05);晚期细胞凋亡率各组差异不明显(P0.05)。干预SK-BR-3细胞48h后,各用药组早期细胞凋亡率[(4.76±0.23)%、(8.56±0.64)%、(6.80±0.10)%]与对照组[(1.60±0.10)%]比较,差异有统计学意义(P0.05);晚期细胞凋亡率、总凋亡率比较,西药组[(32.90±2.00)%、(41.46±1.93)%]、联合组[(22.86±9.74)%、(34.83±6.51)%]高于对照组[(1.93±0.20)%、(3.53±0.13)%](P0.05),西药组与联合组细胞凋亡率、总凋亡率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论解毒化浊方可能有诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡,协同抑制剂减毒增效作用。     

扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞体外增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡相关蛋白的影响。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为6个组,每组10只,分别为扶正消瘤颗粒低剂量组、扶正消瘤颗粒中剂量组、扶正消瘤颗粒高剂量组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、联合组、对照组。中药各剂量组给予不同剂量扶正消瘤颗粒灌胃;5-FU组给予5-FU腹腔灌注;联合组给予中剂量的扶正消瘤颗粒灌胃,同时给予5-FU腹腔灌注;对照组给予生理盐水灌胃。采用四甲基偶氮唑盐比色法检测肝癌HepG2细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测肝癌HepG2细胞凋亡;Western-Blot法观察各组肝癌HepG2细胞P53蛋白、Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:扶正消瘤颗粒含药血清可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性;其中联合组对肝癌HepG2细胞的抑制率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);不同浓度扶正消瘤颗粒含药血清均可诱导肝癌HepG2细胞的凋亡,联合组凋亡率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,各扶正消瘤颗粒含药血清组均可下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达。结论:扶正消瘤颗粒含药血清可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用可能是通过抑制Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达实现的。     

五福饮含药血清对大鼠软骨细胞肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性及基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察五福饮含药血清对大鼠软骨细胞肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性、胶原蛋白(Collagen)II、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响,探讨其防治骨性关节炎作用机制。方法应用随机数字表法将30只2月龄Wistar大鼠分为生理盐水组(生理盐水灌胃)、硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖灌胃)、五福饮组(五福饮灌胃),每组10只,经干预后取得相应血清。用Ⅱ型胶原酶消化法获取2月龄SD大鼠膝关节软骨细胞,应用随机数字表法将大鼠软骨细胞分为:空白组:采用0μg/L肿瘤坏死因子(TNF)-α+10%生理盐水组血清;模型组:采用20μg/L TNF-α+10%生理盐水组血清;对照组:采用20μg/L TNF-α+10%硫酸氨基葡萄糖组血清;观察组:采用20μg/L TNF-α+10%五福饮组血清。干预48h后检测软骨细胞Collagen II表达,软骨细胞凋亡、增殖及MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达。结果 Collagen II的平均荧光表达值:空白组(70.92±3.72),模型组(43.39±1.52),对照组(62.92±5.32),观察组(53.33±2.33)。模型组、对照组和观察组显著低于空白组(P0.05,P0.01);对照组和观察组高于模型组(P0.05,P0.01)。软骨细胞凋亡:模型组凋亡率最高,对照组与观察组凋亡率接近,低于模型组,高于空白组。软骨细胞增殖能力吸光度(OD)值:给药24、48、72h后,模型组、对照组、观察组软骨细胞OD值均低于空白组[24h:(0.297±0.014)、(0.342±0.021)、(0.316±0.028)比(0.396±0.017);48h:(0.333±0.021)、(0.414±0.029)、(0.394±0.028)比(0.470±0.018);72h:(0.361±0.014)、(0.510±0.035)、(0.493±0.030)比(0.570±0.031),P0.05,P0.01],观察组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);给药48、72h后,与模型组比较,对照组和观察组软骨细胞OD值均升高(P0.05,P0.01)。MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达:与空白组比较,模型组、观察组MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA水平显著升高[MMP-3:(2.610±0.328)、(1.994±0.134)比(1.003±0.091);MMP-9:(2.519±0.195)、(2.000±0.053)比(1.033±0.300);MMP-13:(2.491±0.300)、(1.688±0.012)比(1.012±0.200),P均0.01],对照组MMP-9 mRNA水平亦升高[(1.866±0.151)比(1.033±0.300),P0.05]。与模型组比较,对照组和观察组MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA水平明显下降[MMP-3:(1.313±0.335)、(1.994±0.134)比(2.610±0.328);MMP-9:(1.866±0.151)、(2.000±0.053)比(2.519±0.195);MMP-13:(1.449±0.289)、(1.688±0.012)比(2.491±0.300),P0.05,P0.01]。与对照组比较,观察组MMP-3 mRNA水平显著升高(P0.01),MMP-9、MMP-13 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论五福饮能延缓肿瘤坏死因子-α诱导引起的大鼠软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13等基质金属蛋白酶表达相关。     

Effect of Serum Containing Tougu Xiaotong Capsule on Activity of Chondrocyte

目的 观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响. 方法 SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞同步化后进行干预,分别确定含药血清的有效干预时间及干预浓度.各组合药血清在有效浓度作用下干预软骨细胞,在有效干预时间点采用MTT法. 结果 干预后,软骨细胞OD值干预72 h明显高于干预24 h、48 h、96 h(P＜0.05);10％含药血清浓度组明显高于5％、20％含药血清浓度组(P＜0.01).确定72 h为有效作用时间,10％为有效作用浓度.在10％含药血清浓度的作用下干预72 h,第3代软骨细胞OD值,透骨消痛胶囊实验组明显高于空白组(P＜0.01),实验2组增殖效果最明显(P＜0.05). 结论 透骨消痛胶囊含药血清能加速软骨细胞增殖,维持软骨细胞活性,其促进软骨细胞增殖作用与药物浓度有关,以中剂量药物浓度(含透骨消痛胶囊29 mg/d)为最佳.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。